改进的^18O同位素标记法标记蛋白质多肽

赵焱; 卢庄; 贾伟; 应万涛; 钱小红 蛋白质组学国家重点实验室、北京蛋白质组研究中心; 北京102206; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 北京100850

关键词:18o同位素标记 多肽 蛋白质组 

摘要:针对^18O同位素标记反应两个重要影响因素——肽段分散度和胰酶灭活方法,进行了标记条件的改进和灭活方法的优化。在H21^8O中加入RapigestTM SF助溶剂并微波辅助加热,使α-酪蛋白胰酶酶切肽段的标记效率得到明显改进(^18O/^16O峰面积比值〉99%)。标记后,对胰酶进行还原烷基化化学修饰彻底灭活,使标记后的肽段稳定性显著提高,放置6d不发生回交反应。对标准蛋白质甲状腺球蛋白酶切肽段混合物标记后的质谱实验结果表明:优化的标记方法能快速稳定地标记蛋白质酶切多肽。

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