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中图分类号 P4 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2016)21-0194-01
随着社会的发展与进步,气象科技服务工作在气象业务中占据着越来越重要的地位。近年来,濮阳市气象科技服务发展一直坚持快速健康发展的目标,日益形成了以公众需求为导向,以专业气象业务为依托的气象科技服务体系,为濮阳市气象事业的不断进步提供了有力支撑,成为创新与开拓庀笠滴褚约胺务领域的中坚力量。
1 濮阳市气象科技服务现状
1.1 不断建立完善农业气象科技服务基础设施
近年来,濮阳县气象局认真做好“三农”专项试点工作,根据濮阳县高标准粮田建设和新农村建设规划,调整村级气象信息服务站、气象预警机、电子屏、田间小气候气象观测站、多要素站布局,并制作了沙盘模型,建成20个乡镇气象信息服务站、26个村级气象信息服务站、6个企业(专业合作社)气象信息服务站、4个气象科普教育基地,共安装电子屏(含液晶显示屏)38块,预警接收机146部,可视化RYQ-4型田间农林小气候观测站1套、棚内RYQ-4型田间农林小气候观测仪3套、四要素站设备1套、土壤水分自动测试仪2部,气象科普教育宣传栏74处近800 m2,完善了濮阳市乡镇气象信息服务平台、气象预警信息平台。对20个乡镇、26个重点村及47家种植养殖大户、合作社开展开展“一对一”贴身式气象防灾减灾服务,取得了良好效果[1-2]。
1.2 大力开展专题气象科技服务
针对关键性事项开展专题气象科技服务工作。一是及时制定气象服务方案,细化服务内容。密切监视天气变化,制作“三夏”期间滚动天气预报和喷药(肥)、夏收、夏种、晾晒等农用天气预报,提出针对性农事生产建议,服务“三夏”生产。二是充分利用电视、广播、12121电话、手机短信、电子显示屏、预警大喇叭、互联网等及时为政府、有关部门和农民群众开展专题服务。三是加强大风倒伏、干热风、冰雹、暴雨等灾害性天气跟踪监测,及时制作并气象灾害预警信息,指导农民采取有效措施。四是利用卫星遥感技术,做好秸秆焚烧火点监测工作,确保禁烧工作圆满完成。五是做好麦收前期病虫害防御工作,做好病虫害防御[3-4]。
1.3 加强全市危化品防雷安全检查工作
定期检查全市油库、气库、弹药库、化学品仓库、烟花爆竹、石化等易燃易爆建设工程和场所的防雷年度检测情况。检查全市危化品防雷年度检测、防雷安全大排查和防雷安全管理、防雷安全隐患整治落实等是否到位,以及各县区防雷监管部门是否依法履职尽责到位。
2 濮阳市气象科技服务存在的不足
虽然近年来濮阳市气象科技服务工作取得了一定的成绩,但是还存在诸多不足之处:社会公众缺乏气象科技知识,气象科技服务体制不健全,导致工作职责分工不明确;气象科技服务产品科技含量不高,很少拓展新领域、开发新项目,缺乏气象科技服务人才,尤其气象信息产品开发、经营策划与营销人才还不足,影响着气象科技服务的快速发展。
3 濮阳市气象科技服务工作的发展建议
3.1 加强气象科普知识的宣传,提高公众气象知识水平
要定期开展气象科普知识宣传工作,建立气象科普基地,加大公众对气象知识的了解,认识天气预报产品种类及灾害性天气预警信号标志,学会根据灾害严重程度等采取对策,减少或避免气象灾害导致的生命财产损失。
3.2 做好气象科技服务的调研工作
气象部门要深入农业、工业、林业、交通等行业开展气象调研工作,了解当地对气象科技服务的具体需求;加大科技资金投入,加强人工影响天气工作、气象科技等研发工作,同时对各类气象信息进行深加工,开发满足社会公众要求的气象科技服务产品,提高气象科技服务产品科技含量。
3.3 加强气象科技服务的管理
建立完善气象科技服务管理机制,制定科学合理的气象科技服务发展措施,逐步形成“界面清晰、责权明确、管理规范、监督有效、成效显著”的气象科技服务管理体系,制定出科学有效的气象科技服务标准化实施方案,不断提高气象科服务工作的标准化以及规范化水平。
3.4 加强气象预报预警系统的建设
加强气象科技服务信息制作平台的建设,主要包括天气实况及监测分析评估服务系统、决策气象服务系统;完善气象科技服务信息系统及气象预报预警平台建设。主要包括气候预测业务系统以及灾害性天气预报业务系统等,全面提高天气预报预警水平。
3.5 加强气象科技服务队伍的建设
建立有效的人才队伍建设机制,采取外引内培方式,引进气象科技专业人才,补充到气象科技服务队伍中,并定期对气象科技服务人员开展培训,为气象科技服务的发展提供强有力的人才保障。
4 结语
濮阳市气象部门须高度重视气象科技服务工作,建立完善相关制度,加强气象科技服务队伍的建设,不断创新服务方式,开发研制出气象科技服务新产品,以更好满足社会公众的需求,从而进一步推动气象科技服务的可持续发展。
5 参考文献
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中图分类号:O657.63 文献标识码:A
孔雀石绿(Malachite green,MG) 化学式为C23H25N2Cl,相对分子质量为364.92,曾在水产养殖中常用来预防和治疗受精卵和成鱼的水霉病、腮霉病和小瓜虫病等,以及用于活鱼运输、池塘暂养过程和环境的消毒[1~2]。自从20世纪80年现孔雀石绿具有潜在的致癌性,美国、日本以及英国等许多国家已禁止其用于水产养殖业。我国农业行业标准NY5071—2002《无公害食品渔用药物使用准则》中已将孔雀石绿列为禁用药物。虽然MG 在水产养殖中的违禁使用情况越来越少,但由于其曾经被广泛应用,已对环境造成了严重污染,水产品中被查出含有MG 的事件也时有发生。水体中存在的痕量MG 有可能引起了水产品的二次污染[3~5],因此建立水体中MG及其代谢物LMG的检测方法是很有必要的。
1 实验部分
1.1 主要仪器设备和试剂
Acquity UPLC-XEVO TQ MS型超高效液相色谱串联质谱仪(美国Waters公司);A120S型万分之一天平(德国Sartorius公司)。
孔雀石绿(MG)和隐性孔雀石绿(LMG)标准品均购自德国Dr. Ehrenstorfer公司;乙腈、甲醇、甲酸均为色谱纯(美国Fisher公司);乙酸铵为优级纯(天津科密欧);Oasis MCX固相萃取小柱( 美国Waters 公司,150 mg/6mL);实验用水为美国Milli-Q去离子水发生器制备的高纯水。
1.2 标准溶液的制备
准确称取孔雀石绿(MG) 和隐性孔雀石绿(LMG)标准品适量,用乙腈溶解,配制成质量浓度为100μg/mL 的标准储备液,根据需要用流动相将混合中间标准溶液稀释成浓度为0.25μg/L、0.50μg/L、1.00μg/L、2.00μg/L、5.00μg/L、10.00μg/L、25.00μg/L的混合标准工作溶液,现用现配。
1.3 仪器分析条件
1.3.1 液相色谱条件
色谱柱:Waters BEH C18(1.7 ?m,50mm×2.1mm);柱温:30℃;流速:0.5mL/min;进样量:10?L;流动相A:乙腈;流动相B:含0. 1%甲酸的5mmol/L的乙酸铵水溶液。梯度洗脱程序:0~1.0min,10% A~60% A;1. 0~3. 0min,60%~100% A;3.0 ~4.0min,100%A,4 ~4.1min,100% A~10% A,4.1~5.0min 10% A。
1.3.2 质谱条件
离子源:电喷雾离子源(ESI+);扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测(MRM);毛细管电压:3.2kV;离子源温度:150℃;去溶剂气温度:500℃;去溶剂气流量:1000L/h;定性、定量离子对及碰撞能量见表1。
1.4 样品处理
1.4.1 水样采集
分别从水面表层、水面下约0.5m 、水面下约1.5m处采集养殖区池塘水,水样采集后,混合均匀,24h内测定。
1.4.2 水样净化
准确量取25mL待测水样,过0.45?m水系滤膜除去固体悬浮物后转入100mL锥形瓶中,加入0.5mL甲酸使水样甲酸体积分数为1%,摇匀。将酸化后的水样全部通过已活化好的MCX固相萃取小柱(使用前用5mL甲醇、5mL水活化),待水样全部过完后,依次用3mL 2%(V/V)甲酸、3mL水、3mL甲醇淋洗,弃去淋洗液。真空抽干后,用5mL乙酸乙酯-甲醇-氨水(体积比为50:45:5)洗脱进行洗脱,收集洗脱液于40℃条件下用氮气吹干,用初始流动相定容至1.0mL,过0.22?m有机系滤膜后,上机进行分析检测。
2 结果与讨论
2.1 色谱和质谱条件的优化
MG和LMG属于三苯基甲烷类化合物,具有弱碱性,因此选择ESI正离子模式,加入0.1%的甲酸有助于目标物离子化。色谱条件摸索中发现,只加入0.1%甲酸MG和LMG的保留时间非常接近(分别为1.34min、1.42min),加入5mmol/L的乙酸铵后,LMG保留时间延长为2.17min,同时LMG离子响应强度也有所增强,因此本实验选用含0. 1%甲酸的5mmol /L 乙酸铵水溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱。
2.2 方法的线性关系与检出限
按照1.2节标准溶液配制方法,配制系列不同浓度的混合标准溶液进行测定,取其峰面积(Y)与浓度(X)作线性回归,线性关系和相关系数见表2。在本法测定条件下,采用3倍信噪比(S/N=3)计算水体中MG和LMG的检出限均为0.01μg/L。
表2 MG和LMG标准曲线的线性关系和相关系数
名称 线性范围/(μg/L) 线性方程 相关系数r
MG
LMG 0.25~25
0.25~25 Y =3581.3X + 5.138
Y =2356.7X + 8.365 0.9990
0.9993
2.3 方法的回收率与精密度
采用在空白样品中添加标准溶液的方法,在采集的水样中添加一定体积的标准溶液,使水样中MG和LMG含量分别达到0.02μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L 3个浓度梯度,每个梯度进行6次重复试验,按照本方法处理后进行测定。结果表明,MG和LMG 3个浓度梯度的回收率为80.6%~92.7%,相对标准偏差为3.29%~8.23%。因此,MG 和LMG在水体中的加标回收率相对标准偏差均能达到检测要求,说明本方法具有较高的准确度和精密度。
3 结语
本文建立了超高效液相色谱串联质谱法检测水体中孔雀石绿(MG)和隐性孔雀石绿(LMG)残留量的方法。该方法具有选择性高、步骤简单、分析快速的特点,检出限低、回收率高、精密度良好,可作为环境水体中痕量孔雀石绿(MG)和隐性孔雀石绿(LMG)残留量检测的参考方法。
参考文献
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1引言
芥子气(HD)是一种糜烂性化学毒剂,化学名为2,2′二氯二乙硫醚,可通过吸入、皮肤和眼睛暴露等方式中毒,造成皮肤、眼睛、呼吸道等出现不同程度的损伤[1,2\]。两次世界大战以及80年代爆发的两伊战争中都使用了大量HD,造成了大量军民伤亡[3~5\]。侵华日军战败后在中国境内遗弃了大量包括芥子气在内的化学毒剂,长期以来对环境以及附民都造成了严重危害[6,7\]。1997年OPCW并生效的《化学武器公约》(CWC)严格禁止了HD的生产、储存和使用,但至今其销毁工作还未完成;同时由于HD容易生产、性质稳定,一旦被不法分子利用,还会极大地威胁公共安全。因此,有必要发展并建立灵敏、可靠的分析方法对HD染毒样品进行准确鉴定,对违约使用的调查取证、染毒人员的诊断救治都具有重要意义[8\]。
HD含有两个亲电中心,进入生物体后迅速分布于各组织中,发生代谢反应可能生成水解氧化产物、β裂解产物和大分子加合物等一系列化合物[9,10\]。这些代谢物按照其来源及特点分为两类:小分子游离代谢物和大分子加合代谢物[11~13\]。小分子游离代谢物包括硫二甘醇(TDG)、硫二甘醇亚砜(TDGO)及芥子气亚砜(SMO)等水解、氧化产物,以及与谷胱甘肽加合后经β裂解酶作用产生的1,1′磺酰基双\[2(甲基亚磺酰基)乙烷\](SBMSE),1甲基亚磺酰基2\[2(甲硫基)乙基磺酰基\]乙烷(MSMTESE),1,1′磺酰基双\[2S(N乙酰半胱氨酰基)乙烷\](SBSNAE)等β裂解产物(如图1所示)。在小分子代谢物中,虽然文献\[5\]报道了在生物体内检测出痕量的内源性TDG和TDGO,但在HD染毒的生物医学样品中,TDG与TDGO的浓度显著升高,而且这些化合物均具有HD的结构特征,因此,这些小分子代谢物均可作为HD生物标识物[11\]。与大分子加合物相比,小分子标识物在芥子气暴露后很快出现在体液中,能够在体内存在数日至两周,并且具有检测快速的优点,是染毒早期快速诊断的理想标识物。
对于HD小分子标识物的分析,大多采用GCMS/MS或LCMS/MS等技术分析其衍生产物或原体[14~17\],但由于不同标识物的性质差异,这些报道大都只针对单个或两个标识物进行分析。但HD染毒剂量、方式以及染毒时间的不同所产生的生物标识物也不尽相同[16\],因此,所建立的方法应能更广泛用于标识物和样品的分析。直到2013年,Li等[18\]报道了将血浆蛋白沉淀后直接进行LCMS/MS的分析方法,可同时检测7种HD游离代谢物。方法制备简单、耗时短,取得了较好的结果。但该方法中血浆经蛋白经沉淀直接分析,基质依然复杂,背景中存在大量干扰峰,分析大量样品后会造成色谱柱压升高、响应降低、仪器稳定性变差等问题。
针对以上情况,本研究引入SPE制备方法,并优化了UHPLC的梯度洗脱程序,建立了血浆中6种HD标识物(TDGO,SBMSE,SBSNAE,TDG,MSMTESE和SMO)的UHPLCMS/MS定量分析方法。实验结果表明,本方灵敏度高、选择性好、样品基质纯净,大批量样品分析响应稳定、重复性好。JP
2实验部分
2.1仪器、材料及试剂
1290超高效液相色谱系统(美国Agilent公司);6460型三重四极杆串联质谱系统(美国Agilent公司);Centrifuge5424型高速离心机(德国Eppendorf公司);NEVAP111型氮气吹干仪(美国OrganomationAssociates公司)。
HD、TDG、TDGO、SMO、SBMSE、MSMTESE及SBSNAE(均由本单位合成,NMR分析纯度>95%);HLB固相萃取柱(500mg/6mL,美国Waters公司);水、甲醇、乙腈(色谱纯,美国Honeywell公司);甲酸铵(美国RoeScientific公司);健康人血浆部分由北京红十字中心提供,部分来自于本实验室的自愿者。JP
2.2安全措施
所有涉及到芥子气的操作,如取用、配制和染毒过程均需要佩戴相应的防护器材,并在通风良好的状况下进行;以NaOH乙醇(1KG-3∶KG-510~1KG-3∶KG-511,V/V)混合溶液作为洗消剂,各种直接接触芥子气的实验器材在使用后立即洗消。
2.3染毒及加标血浆的制备
用乙腈配制1.0mg/mLHD标准工作液,吸取4.0μL标准工作液,加入4.0mL空白血浆,混匀、37℃振荡反应12h,得到1.0μg/mLHD染毒血浆储备液。用纯水配制6种HD标识物的混合标准液,各标识物浓度均为100μg/mL,用空白血浆稀释为0.01~500ng/mL的加标血浆。以上储备液均于
20℃保存。
2.4样品制备
参照文献\[18\]方法对血浆样品进行蛋白沉淀。0.5mL血浆中加入2.0mL乙腈甲醇(4KG-3∶KG-51,V/V),涡旋混匀,6100r/min离心5min,移取上清液。向沉淀中继续加入1.0mL乙腈甲醇(4KG-3∶KG-51,V/V),涡旋混匀、12200r/min离心5min,将两次的上清液合并,氮气吹干,1.0mL纯水复溶,离心收集上清液,加入60μL1.4%氨水准备进行SPE。
先后用5mL甲醇、12mL水和5mL1.4%氨水平衡HLB柱;上样,分别用3mL1.4%氨水和2mL2%甲醇1.4%氨水淋洗;最后用4mL含2%甲酸甲醇进行洗脱;浓缩洗脱液至近干,加入0.15mL纯水复溶,离心后取上清液进行LCMS分析。
2.5液相色谱质谱分析条件
色谱条件:ZorbaxEclipsePlusC18色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm,美国Agilent公司);流动相A为5mmol/L甲酸铵溶液,B为含5mmol/L甲酸铵的甲醇溶液;洗脱梯度:0~2.5min,5%~10%B;2.5~5.0min,10%~100%B;5.0~8.0min,100%B;8.0~8.1min,100%~5%B,运行3min;流速0.3mL/min;柱温40℃;进样体积10μL。
质谱条件:在ESI+模式下采用MRM方式扫描,应用4个时间段扫描6个目标物的定量及定性离子对,0~1.75min扫描SBSME和TDGO;1.75~3.60min扫描SBSNAE和TDG;3.60~4.65min内扫描MSMTESE;4.65min后扫描SMO。毛细管电压4.0kV,离子源温度350℃;雾化气压力35psi;碰撞加速电压3V,权重为1/x。其它参数见表1。
3结果与讨论
3.1固相萃取条件的选择
与文献\[18\]相比,针对血浆基质的复杂性,增加了固相萃取步骤,目标是进一步除去基质中的背景干扰物,使制备后的样品更加纯净,提高检测灵敏度和定量稳定性。6种化合物的极性顺序为TDGO>SBMSE>SBSNAE>TDG>MSMTESE>SMO,其中TDGO与SBMSE,SBSNAE与TDG,MSMTESE与SMO的极性相近,因此,选择3种化合物SBMSE、TDG和MSMTESE进行血浆加标(浓度均为10ng/mL),考察了BondElutePlexa(60mg,3mL),SampliQPSDVB(500mg,6mL),HLB(500mg,6mL),以及HLB(60mg,3mL)JP4种SPE柱的富集效果,结果见图2。
BondElutePlexa柱的填料为疏水性的二乙烯及苯基聚合物,主要用于富集弱极性化合物,而SBMSE及TDG等目标物的极性相对较强,因此回收率低。而PSDVB柱的填料为聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物,适用于从水溶液中提取极性芳香化合物,如苯酚等,不适于本文目标物的富集。HLB采用二乙烯苯和N乙烯基吡咯烷酮的亲水亲脂两性填料,可富集的化合物极性范围更宽。此外,还考察了60mg小柱床的HLB柱,以期在不损失回收率的情况下,减少背景干扰,但实验结果表明60mg的SPE柱的容量有限,回收率偏低,不适于0.5mL血浆样品的富集。因此,经比较,本实验最终选择回收率最高的HLB(500mg/6mL)柱对6种HD标识物的加标样品进行SPE纯化。
目标化合物都显弱碱性,加入60μL1.4%氨水,目的是降低目标化合物的极性,增强与HLB柱填料疏水基团的结合。经过比较考察,最终选择先用3.0mL1.4%氨水淋洗残留在柱上的杂质,再用2.0mL含1.4%氨水的2%甲醇淋洗柱子上非特异性结合的极性干扰物。此外,向洗脱液中添加2%甲酸是为了降低目标物在HLB柱上的结合力,使其更容易被洗脱。实验结果表明,SPE在有效富集目标物的同时,除去了血浆基质中的大量背景干扰,色谱图基线干净(图3),延长了色谱柱的使用寿命。
3.2UHPLCMS/MS方法的优化
根据6种化合物的理化性质及三重四极杆质谱的特点,在ESI+模式下应用Masshunteroptimizer件对每一个目标化合物的分析参数进行优化,结果见表1。为了在较短时间内获得良好的分离效果,对洗脱程序进行优化。由于TDGO和SBMSE这两种化合物极性很强,所以在前2.5min内没有采用等度平衡程序,目的是将目标物与基质中的强极性背景化合物进行分离,减少干扰;MSMTESE和SMO在色谱柱上保留较好,为了缩短分析时间,采用快速梯度洗脱程序对目标物进行洗脱。在优化的洗脱条件下,6种HD标识物在6min内均有较好的分离(图3),TDG和SBSNAE的保留时间重合,可通过MRM离子对m/z的差异进行区分。此外,本研究采用4个时间段同时分析6个HD代谢物的12个MRM离子对,使每个峰能获得定量分析所需的足够扫描点数,改善峰形和灵敏度。
3.3方法学考察
3.3.1专属性在最佳色谱质谱条件下,测试溶剂空白(纯水)、空白血浆、加标血浆(6种标识物浓度均为50ng/mL)和HD染毒血浆(100ng/mL)样品。溶剂空白中未检出任何相关化合物(图4A),表明仪器系统中没有相关背景干扰。空白血浆中仅检测到少量内源性TDGO和TDG(图4B),浓度分别为2~8ng/mL和0~5ng/mL,与文献[5]报道一致。50ng/mL加标血浆样品中6种化合物的响应良好(图5A)。在100ng/mLHD染毒血浆中发现了显著高于空白血浆的TDGO和TDG,可以作为HD染毒依据(图5B)。在体外染毒血浆样品中没有检测到SMO的原因是在低浓度染毒时HD主要发生水解反应,自身氧化反应很少[8\]。β裂解产物是由HD与谷胱甘肽的加合物在β裂解酶的作用下而生成,但谷胱甘肽主要存在于血细胞中,离心后的血浆中谷胱甘肽含量极少,所以未检测到。但是,在真实染毒患者体内,HD既可能发生水解、氧化反应,还可能与血液中的谷胱甘肽充分反应后释放出β裂解产物,染毒人员血液经离心得到的血浆中可能存在水解氧化及β裂解标识物[18\]。因此,本方法依然可应用于真实HD染毒患者体内代谢后的血浆样品分析。4种样品的MRM色谱图比较结果显示,空白血浆中除低水平的TDGO和TDG内源性本底外,无其它干扰物,表明本方法专属性较好。
3.3.2线性范围、方法检出限及定量限为了降低基质效应对检测准确度的影响,本研究采用基质标准曲线外标法进行定量分析。将浓度为0.01~500ng/mL的加标血浆按照2.4和2.5节进行处理分析。以目标物的浓度和峰面积进行线性回归,权重为1/x,绘制定量标准曲线。以响应显著高于空白血浆且信噪比为3对应的浓度作为方法的检出限(LOD),信噪比为5且相对标准偏差(RSD)低于20%所对应的浓度作为方法的定量限(LOQ)[18\],结果见表2。6种目标物均有较宽的线性范围,SBMSE、SBSNAE和MSMTESE的检出限与文献\[18\]报道一致,而SMO、TDG与TDGO的灵敏度比文献值提高了5~10倍(表3)。
3.3.3加标回收率与精密度对5,150和450ng/mL的加标血浆质量控制样品(LQC,MQC和HQC)进行平行处理并分析,每个样品重复测定5次。计算各目标化合物的精密度和回收率,结果见表4。6种化合物的回收率在86.5%以上,RSD
3.4HD染毒样品分析
CM(42OPCW在2015年第5次生物医学样品分析演练中提供了6份怀疑HD中毒人员的血浆样品CM)LM
(A~F),和1份空白血浆(M)。采用所建方法对所ZH(有
样品进行定性及定量分析,检测结果见图6。在C样品中检测到的TDG及TDGO与血浆基质M一致,所以确定C样品为空白血浆;在A,B,D,E和F样品中都检测到高于内源水平的TDG与TDGO,根据检测得到TDG与TDGO的含量大小,得出样品染毒浓度顺序为F>A>E>D>B。OPCW的结果中C为空白血浆,A,B,D,E和F分别为100,10,40,50和150ng/mLHD染毒血浆,说明本方法的CM(21*3/4检测结果与OPCW官方提供的染毒信息一致。空CM)ZH)
白血浆中内源TDG与TDGO的分析结果表明,HD对血浆的染毒浓度在10ng/mL以上时,可利用TDG和TDGO作为标识物进行HD的溯源性分析,而之前未有此方面报道。另外有意义的是,本方法检测到的TDG与TDGO的浓度和与HD染毒浓度(10~150ng/mL,OPCW提供)呈良好的线性关系,这使得依据检测染毒血浆样品中标识物的浓度检测实际HD染毒浓度成为可能,但由于代谢物的浓度还与染毒时间密切相关,特别是在体内染毒情况下,因此,代谢标识物与染毒浓度之间的关系还需要进行深入探讨。
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、
1 引 言
在发酵业中,葡萄糖作为发酵液的主要碳源,其用量直接影响产品质量,所以对发酵液中葡萄糖浓度的检测是十分必要的[1]。酶类生物传感器的诸多优点使其广泛应用于发酵过程中葡萄糖浓度的检测。葡萄糖生物传感器多为固定化酶电极[2~4],由于发酵工艺的高温蒸汽灭菌过程使固定化酶生物传感器无法在线使用。本研究组在前期研究中提出了一种用“酶液”代替固定态“酶膜”的方法,并研制出采用酶注射结构的葡萄糖生物传感器,可基本满足实际需求,但是还存在检测时间过长的问题[5,6]。2015年,本研究组对此类生物传感器进行机理建模,建立了酶注射式葡萄糖生物传感器的机理模型,此模型表述了整个反应的机理,同时也对检测方法提供了机理模型[7],为改进检测算法、降低检测时间提供了理论基础。
酶注射式生物传感器主要针对发酵领域中葡萄糖浓度的检测,其检测步骤为:首先利用葡萄糖标准液进行标定,再对发酵液中的葡萄糖浓度进行检测。但是生物传感器易受温度影响[8~10],在实际测量时,由于发酵液的温度是变化的,且通常与室温状态下的标定液温度不同,导致标定结果不准确,从而使测量结果产生误差。而且每次测量都需要标定,不仅操作繁琐,而且也不利于实现在线检测。
本研究主要针对酶注射式葡萄糖生物传感器在实际使用中因为标定液与被测液的温度不同而引起的测量结果不准确问题,利用热力学与酶促反应动力学提出一种新的检测方法。首先利用动力学建立酶注射式葡萄糖生物传感器浓度检测机理模型,再利用阿伦尼乌斯公式建立温度与动力学模型中未知参数之间的关系,并将此关系代入该模型中建立基于温度的浓度检测新模型,根据实验数据通过数据拟合确定了基于温度的浓度检测模型中的参数值,得到检测新模型。利用新模型提出了一种以反应混合液的温度和反应初始电流斜率推导葡萄糖浓度的检测方法。分别利用动力学模型检测方法与温度模型检测方法进行实验,检测结果表明,基于温度的检测方法在温度变化的情况下具有更好的稳定性,检测准确性也优于原检测方法,同时改进后的检测方法避免每次测量前人工标定所需的拆卸步骤,更加有利于在线使用。
2 浓度检测动力学模型建立
酶注射式生物传感器[5]反应池中发生酶促反应,由米氏方程可知,葡萄糖发生酶促反应时,首先生成中间络合物,中间产物分解产生H2O2,H2O2在铂电极处分解产生电子,其反应机理:
E+Sk1k
该机理模型中,指数部分存在的原因是由于在反应初始中间络合物的逐渐形成而引起的; 但根据米氏方程,底物与酶发生反应生成中间络合物的可逆反应会瞬间达到平衡,短时间内络合物浓度保持不变,使得H2O2的浓度增加速率是不变的,所以可省略指数部分。H2O2生成速率以线性形式增长,而电子由H2O2分解得到,即电流可表示为I=neD PEFP,其中, ne为反应过程中交换电子数, D PE为H2O2扩散系数, F为法拉第常数[7]。故可知其电流变化初始斜率为:
本研究组前期工作中建立的酶注射式葡萄糖生物传感器检测方法基于公式(3)所得,称为动力学模型检测方法:首先利用酶注射式葡萄糖生物传感器得到已知葡萄糖浓度为[S1]、[S2]的两种标准液的反应电流初始斜率K1、K2,并利用公式(3)确定浓度检测动力学模型中的参数C和Km; 测量待测液,得到反应过程中电流的初始斜率K; 最后将已标定的参数C、Km以及初始斜率K代入公式(3),得到待测液的葡萄糖浓度[S]。简单概括为:首先利用葡萄糖标准液标定葡萄糖生物传感器浓度检测动力学模型中的参数C和Km,之后利用已知模型进行待测液的检测。
在实际使用中,标准液处于室温状态,与发酵液温度之间存在温差。而参数C和Km中存在反应速率k1,k
1,k2,所以C和Km会受温度的影响。这样就导致了在存在温差的情况下,室温状态下标定的参数C和Km并不能用于待测液的检测。本研究利用温度改进检测方法,消除了温度对测量结果的影响。
3 基于温度的浓度检测模型研究
3.1 基于温度的浓度检测模型
式中a、b、lna′, lnb′均为定值,未知量为温度T以及反应初始电流斜率K。基于此模型,得到改进后检测方法,称为温度模型检测方法:生物传感器对待测液葡萄糖浓度进行检测,得到反应的初始电流斜率K′; 与此同时,通过反应池中的温度传感器得到混合液的温度T′; 之后利用公式(6)将得到的初始斜率K′与T′同时代入,以得到被测葡萄糖浓度[S′]。
3.2 基于温度的浓度检测模型参数测定
3.2.1 实验设计 为确定公式(6)中的参数a、b、lna′、lnb′,设计如下实验:
实验原理:利用公式(4)、(5)可以分别得到C和Km与温度T的另一种关系表达式: lnC=b′T+lna′、lnKm=bT+lna。由此可知, lnC与lnKm分别与1T成比例关系。首先在不同温度下利用酶注射式葡萄糖生物传感器得到不同葡萄糖糖浓度的反应初始斜率; 再利用公式(3)得到不同温度下的动力学模型参数C和Km; 分别对lnC\,lnKm与1T进行数据拟合,最终得到a、b、lna′\,lnb′的值。
3.2.2 仪器与试剂 酶注射式葡萄糖生物传感器(自制); 金属浴加热器(一恒 TU.100C); 不同浓度葡萄糖溶液(分析滴定用标准溶液); 葡萄糖氧化酶(Solarbio); 缓冲液(山东省科学院生物研究所)。
3.2.3 实验方法 根据北京某发酵厂数据可知,一般发酵液温度约为30℃,其中个别发酵过程因工艺要求会出现温度略高于40℃的情况。为了尽可能包含实际生产中多种发酵工艺的不同温度要求,本实验分别在25.0, 30.0, 35.0和40.0℃下利用酶注射式生物传感器得到葡萄糖浓度为1.5, 2.5和3.0 mg/mL的反应初始斜率: 首先利用金属浴加热器加热葡萄糖溶液、葡萄糖氧化酶溶液以及缓冲液到设定的温度,以此模拟实际反应过程中反应池中的温度,利用酶注射式葡萄糖生物传感器进行反应过程中初始斜率的测量。
3.2.4 模型参数的测定 表1为在不同的温度条件下由酶注射式葡萄糖生物传感器测得的不同浓度的葡萄糖溶液的反应斜率。从表1可知,在温度与葡萄糖溶液浓度不变的情况下,生物传感器得到的斜率不同,这是由于酶促反应产生的电流为nA级别,易受干扰,三电极电路及放大滤波电路设计不合理造成传感器稳定性差,此处通过多次测量的方式使其相对偏差在3%内,以保证检测结果的可靠性。
根据公式(3)推导可得到1[S]=CKm×1K×1Km,利用此方程进行数据拟合得到不同温度下动力学参数力学参数C(nA/S)与Km (mg/mL)的值,见表2。
4 实验验证
4.1 系统检测流程图
别泵入到定量环中进行定量,之后利用缓冲液将其压入反应池中进行反应,三电极检测电路检测其反应初始电流斜率,同时温度传感器检测反应池中混合液的温度,最后将得到的两参数传递给上位机进行浓度的计算与显示。
4.2 实验结果与分析
利用酶注射式葡萄糖生物传感器测量浓度为1.5和2.5 mg/mL葡萄糖溶液,得到斜率,并分别用温度模型检测方法和动力学模型检测方法进行数据分析(表3),得到检测结果的回收率,回收率表示测量值与真值的接近程度,其计算公式为:P=1-|yi-y|y×100%, 式中,P为回收率, yi为测量得到的葡萄糖浓度值, y为实际葡萄糖浓度值。
用动力学模型检测方法进行数据分析,系统在室温下进行标定,随着反应时混合液的温度与标定时的温差增大,测量结果的回收率逐渐降低; 而用温度模型检测方法进行数据分析,其回收率检测结果会维持在一定范围内,不会随着温度的改变而变化,这是由于每次检测都会根据温度重新计算浓度检测动
力学模型中的C和Km,降低了温度对检测结果的影响。说明温度模型检测方法减小了由温度变化而引起的误差,提高了实际测量中测量结果的回收率,同时减少温度影响,也增强了其稳定性。
验证结果表明,当温度改变时,温度模型检测方法能较好地维持其检测结果的回收率,而动力学模型检测方法由于标定液与待测液温度不同使得检测的精确度受到严重影响,说明温度模型检测方法能更好地消除温度引进的误差,使得测量结果更加准确、可靠。
5 结 论
针对应用于发酵工业中的酶注射式葡萄糖生物传感器在实际使用时,标定液与待测液温度不同而导致检测结果不准确的问题,以及为简化反复标定的繁琐步骤,进行实验研究。通过利用Arrhenius equation建立了温度与原浓度检测动力学模型参数的关系,并利用此关系改进了目前已有的检测方法,避免了在发酵领域使用时温度引起的误差,同时省略标定部分,更加有利于实现发酵工业中的自动化控制。通过实验验证可得到,基于温度模型的检测方法能减小温度对检测结果引起的误差,同时也增强了此传感器的稳定性,能更好地提升传感器的性能。将改进后的传感器直接与发酵工业中的发酵罐相连,独特的酶注射式结构使得可以忽略高温灭菌引起的酶失活问题,同时,利用新的检测方法,更有利于在线检测、控制补料一体化的发酵操作系统的实现。
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工作开展情况
(一)领导高度重视,组织保障落实有力
一是完善组织机构。
为抓好“七五”普法工作,XX镇成立了“七五”普法工作领导小组,由镇党委书记担任组长,镇党委副书记、镇长任副组长,其他班子成员为小组成员,负责“七五”普法工作的研究和决策。领导小组下设办公室,配有专门联络员具体负责普法日常工作。
二是制定工作方案。
结合上级文件精神及镇情实际,领导小组研究制定了《XX镇“七五”普法规划》,明确了主要目标、主要任务、对象和要求等,为深入开展“七五”普法提供了路线图。
三是建立考核机制。
坚持和完善普法、依法治理工作考核评估机制,将普法、依法治理工作纳入镇党委、政法重要议事日程,推行“谁执法谁普法”、依法治镇工作与综治维稳、平安建设工作统一部署,统一检查考评,有力促进我镇普法、依法治理工作规范、有序开展。
(二)依托重点工程,法治文化建设有力
一是大力实施农村“法律明白人”培养工程。
制定了《关于在全镇农村实施“法律明白人”培养工程工作方案》,利用3-5年的时间,分步骤、分阶段实施农村“法律明白人”培养工程,推动农村形成办事依法、遇事找法、解决问题用法、化解矛盾靠法的浓厚氛围。截止目前,通过集中培训、送法下镇、法律明白人网校培训等方式,我镇已培养农村“法律明白人”2000余人,培养骨干“法律明白人”248人。
二是加强村级法治宣传阵地建设。
积极营造浓厚的法治氛围,通过微信、宣传栏、横幅等载体做好法治宣传工作。同时在各村书写法治宣传标语、建设法治宣传长廊、法治宣传栏,定期更新维护宣传内容,为广大人民群众搭建了学法、
用法的平台。
(三)紧扣重点对象,普法宣传深入有力
我镇积极紧扣法治宣传教育重点对象,发挥示范效应,带动和促进全民法治宣传教育。
一是抓住领导干部这个“关键少数”,积极发挥领导干部带头学法、模范守法引领作用。
健全完善党委中心组会议和镇党政联席会议学法制度,实现党政干部学法经常化、制度化。重点在机关、站所干部中开展学法用法活动,将镇干部作为法治宣传教育工作的重点对象,坚持领导干部法治讲座制度、行政执法人员法律知识培训制度,不断创新学法形式,增强学法用法的效果。健全完善重大决策合法性审查机制,积极推进政府法律顾问制度,聘请了谢凤香同志为镇政府及各村常年法律顾问,为镇党委、政府、村委提供法律咨询。
二是从青少年抓起,引导青少年从小养成学法、守法好习惯。
组织开展“法治进校园”活动,充分发挥学校法治教育的主渠道作用,完善青少年法治宣传教育相关制度,加强法治课教师、法治副校长、法治辅导员的配备管理,充分利用开学第一课、主题班会、国旗下讲话开展青少年法治教育。开展校园欺凌现象专项治理,加大对校园暴力犯罪的惩处力度,坚决维护学校稳定,有效保障学生安全。
存在的问题
我镇“七五”普法工作虽然取得了一定成效,但也还存在一些问题:一是个别单位对普法工作重视不够,对法治建设的思想认识不到位,开展普法工作的主动性不足。二是普法宣传创新性不足,宣传形式以传统手段为主,需要进一步拓展思路,研究一些让群众更易接受、更喜闻乐见的宣传手段。三是普法宣传力度还不够,宣传队伍力量薄弱。
三、下步工作打算
(一)深入推进“法律明白人”培养工程,邀请专业法律人才进行专业授课,提高集中培训效果;
二、深入学习宣传贯彻党的四中全会精神。按照党的四中全会《决定》中关于加大全民普法工作力度的要求,走进基层、深入群众,结合普法工作,大力宣传我国的根本制度、基本制度、重要制度,促进广大干部群众把思想和行动统一到全会精神上来。
三、深入开展宪法法律和党内法规宣传教育活动。各部门各单位常态化学习宣传宪法,普法办精心组织2020年度“12.4”国家宪法日和宪法宣传周宣传活动。各单位根据工作职责开展送法进企业、进农村、进机关、进社区、进网络、进景区景点活动。
四、深入开展肺炎疫情防控法治宣传教育工作。进一步贯彻落实关于坚决打赢肺炎阻击战的一系列决策部署,针对疫情防控工作中热点问题,采取多种形式组织开展传染病防治法等法律法规宣传和以案释法活动,为疫情防控提供法治保障,营造良好舆论氛围。
一、组织领导和保障能力得到加强。
为切实加强“七五”期间的法治宣传教育工作,加强对普法依法治理工作的组织领导,我馆将普法工作作为一项长期性工作来抓,制定了《县档案局档案七五普法规划》,建立了以馆长为组长,分管领导为副组长,相关股室为成员的普法领导小组,指定专人具体负责日常工作,并根据人员岗位变动,及时调整了小组成员,负责普法工作信息的及时沟通,保障了全馆上下普法工作的顺利、有序、有效衔接,为普法工作奠定了坚实的组织基础。普法领导小组负责对“七五”普法工作进行统一安排部署,决定七五普法工作中的重大事项,并将普法依法治理工作纳入重要议事日程,纳入了党支部和职工政治学习计划、纳入了年度工作目标考核。克服人员、经费困难,尽最大努力保证了普法工作机构、人员、工作经费三落实,确保了档案系统“七五”普法工作的顺利开展。制定了《县档案局“七五”法治宣传教育规划(2016—2020年)》和年度工作实施意见,按时对工作开展情况进行自查总结,制定了档案法制宣传相关制度,宣传方案,印发了《档案法》、《档案法实施办法》等法制宣传资料,组建了一支由业务骨干和执法人员构成的档案法宣讲队伍,对全县的档案普法工作进行宣传指导监督,对好的做法和经验进行了推广和宣传,并按时做好普法档案资料的收集、归档。
二、“七五”普法制度健全、管理规范。
积极推行法制宣传教育工作领导责任制,建立了领导班子学法制度、干部职工学法制度、重大事项集体讨论决策制度、重大事项决策前法律咨询制度、行政执法责任制考核评议制度、行政执法过错责任追究制度、行政执法公示制度、执法人员管理规定等制度。从制度上约束和规范干部职工行政行为。要求全体干部职工严格依法办事,不允许出现违反规定的做法。在工作中必须符合法律政策的要求,结合单位工作的实际情况,为各项法律法规的落实提供保证。
三、突出重点,多渠道开展普法教育
1、领导带头、认真组织干部职工学法。为调动大家参与学习的积极性,我馆坚持并完善各种学习制度,坚持集中学习和自学相结合,尽力化解工学矛盾,努力提高领导干部、工作人员和执法人员的法制意识,增强依法行政能力。组织征订了“七五”普法读本、《行政强制法》宣传挂图、《社会保险法》等法律法规、廉政建设学习资料及档案法律规范等资料,设置“法律图书角”,不断增加“七五”普法所学的法律、法规内容,方便干部职工开展自学。充分利用每周二五的政治及业务学习时间进行相应辅导学法,认真学习十、报告、新时代社会主义思想理论,《宪法》、党的方针政策及《档案法》《机关档案工作条例》《省〈中华人民共和国档案法〉实施办法》《省国家档案馆管理办法》《会计档案管理办法》《城市社区档案管理办法》《村级档案管理办法》《省档案“七五”普法读本》等档案法律法规和规章,完成了规定的学习时间。通过学习,从而达到提升人员素质、不断改进服务技能的良性循环,实现机关内部日常管理科学化,法治化。
2、加强全县档案工作人员教育培训。按照“谁执法、谁普法”要求,结合档案业务指导检查工作,强化全县档案工作人员法制知识的宣传培训,组织县机关、企业参加省档案局业务培训,每年举办1-2期县级机关档案业务培训,对机关档案人员进行了“零距离”指导,“面对面”解决实际问题,提升了基层档案人员档案法制意识和业务水平。
3、主题教育取得成效。按照县普法宣传教育总体部署,紧密结合档案工作实际,积极开展普法主题教育活动和“12.4”法制宣传活动。结合“扶贫帮扶”、档案执法检查、档案培训、“6.9”国际档案日等活动,组织人员深入基层进行党规法纪宣讲,参与县上大型普法活动,在醒目的位置悬挂宣传标语,向全县群众散发《中华人民共和国档案法》、省《中华人民共和国档案法实施办法》、《省行政村档案工作暂行办法》、《省重大建设项目档案管理办法》等普法资料共计5000余份。组织全县机关单位工作人员参加了党建、普法、档案法律法规知识有奖竞赛等活动,在全县广泛普及了档案法制观念,进一步提高了社会档案意识和档案法制观念,产生了良好的社会效果。
4、充分利用新媒体开展法制宣传教育。除了传统的设立宣传墙报、宣传栏、指导、咨询、发放宣传资料等形式的宣传手段,我馆还注重利用网络进行法制宣传,在微信、QQ群中上传档案法规、涉民文件、普法活动、档案业务信息等相关内容学习文件,丰富了普法工作的内容和形式,增强了大家做好普法工作的积极性。
四、围绕中心,开展普法宣传
1、坚持普法与做好本职工作相结合,促进档案事业全面发展。紧密结合扶贫帮扶、抗震救灾、灾后重建、机构改革等重点工作任务,加强档案业务检查指导、培训、督查工作,大力开展民族政策、档案法规的宣传,进一步加强乡镇对村、寺庙档案工作的指导检查责任。每年至少开展开展一次档案执法大检查,对机关档案室规范化管理和特定业务档案工作开展情况进行指导督查。
2、推进社会主义法治文化建设。以宣传法律知识、弘扬法治精神、推动法治实践为主旨,积极推进社会主义法治文化建设,充分发挥法治文化的引领、熏陶作用,使人民内心拥护和真诚信仰法律。结合机关文化建设,鼓励工作人员结合实际,撰写普法文章和档案信息,向《档案信息》网站和门户网站上进行投稿,在政府信息公开中对档案法规、涉民文件、普法活动、档案业务信息等信息进行及时公示。全面落实行政权力规范运行和监督工作,及时清理上报行权清单,按照要求对行权运行情况纳入平台运行,接受监督。
五、加强整治,提高依法治理水平
1、加强档案执法队伍建设。为提高执法人员素质,积极组织单位职工参加省、州档案局及县委、县政府组织的各类政治、法制、业务和消防安全培训教育活动和网络执法人员培训,参加普法知识考试,保证了档案执法人员的数量和质量。逐步完善了档案行政执法责任制,提高了档案执法人员的法制观念、法律意识和执法水平,在档案执法过程中做到坚持亮证执法,依法行政,公平执法,在执法检查中认真进行“两法”宣传讲解答凝,树立了档案执法良好形象。
2、做好监督检查,落实监督责任。将普法的理念融入档案管理的全过程,通过加强宣传教育和监督考核,促进行为养成。加强政风行风建设,及时发现和纠正干部职工不规范行为,“七五”期间,我县无档案违法案件发生。
为加强对七五普法教育工作的领导,确保普法活动顺利实施,根据文件要求,成立了以局长为组长,副局长为副组长,各股室负责人为成员的2020年七五普法工作领导小组,并下设办公室在局综合办公室。在健全组织机构的同时,我们细化任务、明确分工,切实推进普法工作顺利开展。普法工作离不开学习资料,办公室在证订普法资料时,均以保证本部门本单位普法学习的需要为前提,干部学法读本的证订数均按照上级要求如数征订。同时,结合自身执法的实际,对业务学习用书做到人手一册。
二、明确任务,制订规划
为适应依法治理和普法工作的要求,进一步广泛深入地学习、宣传法律法规知识,特别是安全生产、项目招投标、工程建设安全等相关的法律法规知识,加强我县法制建设,全面推进各项事业的依法管理,同时,根据规划,结合实际,制定了年度普法工作计划,从而在时间上、制度上、措施上保证了七五普法工作的扎实开展,加强了普法工作的针对性和实效性。
三、精心组织,狠抓落实
自七五普法规划制定后,按照《规划》提出的总体要求具体部署,普法学习采取集中培训与自学相结合,面向全局干部职工以及群众,有计划、有步骤地开展了法律、法规、条例等的宣传教育活动,并取得了一定的实效。定期组织干部职工学法,并组织开展各类法制培训班,从各个层面保证了普法教育宣传工作的有效开展。
半年来,干部职工坚持自学法律,认真学习相关法律、法规和规章,交流执法程序中需要改正的地方和执法业务知识,不断提升执法业务水平;自觉增强依法行政意识,努力提高依法行政的水平和能力;在抓好各类普法工作的同时,我们还十分注重对部门法规规章的社会宣传和普及工作;以每年禁毒法制宣传日、世界环保日等一系列活动为载体,通过悬挂标语、设置宣传栏、接受群众咨询、发送宣传资料等形式大力宣传法律法规知识,发放宣传手册200余份,接待群众咨询200余人。
四、强化管理,依法行政
坚持每月组织干部两次学习日,其中,一次用于法制培训会,内容以常用法律法规为主,由各股室业务骨干任辅导员,把行政管理转变为依法管理,努力提高依法办事、依法行政水平;坚持每季度召开一次大会培训;对全体干部职工进行法律法规知识培训,依托群众工作开展坚持到联系点单位开展法制宣传活动,深入基层开展‘法制下乡’活动,提高广大农牧民群众的法律素质和社会化管理水平。
五、存在的问题
贯彻执行七五普法规划的这半年来,虽然取得了一定成绩,但不可否认的也存在着一些问题与不足,主要表现在以下几个方面:一是法制培训的区域覆盖范围还有待加强;二是宣传方式有些单一、片面、内容覆盖面不广。
2、建立健全普法责任制,强化普法工作组织领导。按要求建立了我局普法工作责任制,明晰了我局统计普法责任主体,明确了统计法律法规宣传普及为主体,大力宣传宪法、基本法律法规、执法司法适用的法律法规并行兼重的统计普法重点任务,落实了权责统一、及时有效、普法并举、条块结合的普法工作原则。成立了以局长为组长,以分管人员和普查中心主任为副组长,其科室专业人员为其成员的统计普法工作领导小组。建立了以分管领导督办、普查办具体抓落实、相关专业科室分工合作的组织运作机制,并对关键点和重大时点的普法工作实施时间、人力、物力上的重点倾斜,为普法宣传工作提供了强力支撑。
3、架构联合普法宣传新模式。紧紧围绕普查(经济普查、农业普查、人口普查全国重大普查标准时点日和以“12.4”国家宪法日、“12.8”日统计法颁布纪念日)三个关键点集中宣传为主轴。悬挂横幅100多幅次,印放《致调查对象的一封信》、《统计法》、《农业调查要点》、《人口抽样变动调查制度》等知识宣传手册5000余份,营造浓厚的普法舆论氛围,提升重点对象的学法守法自觉性主动性。
为提高学校依法决策、依法管理水平,维护校园稳定,维护师生合法权益,保证教育方针的全面贯彻实施,学校特成立了以xx校长为组长的依法治校领导小组,制定了学校“七五”普法规划和年度工作计划,聘请了蒲亭镇派出所xx同志和法院xx同志为法制副校长,加强学生的法制教育,增强了师生的法制观念。
二、规范办学行为,依法管理学校
1、建立完善的领导体制,充分发挥集体的作用。凡学校有重大事项都经学校领导班子集体研究,再召集全体教师进行讨论,经全体教师通过后方才执行,坚持做到校务、政务公开。
2、健全学校安全管理制度。着重做好校园基础设施的安全检查工作,对存在安全隐患的地方进行彻底整改,切实消除安全隐患,确保师生的人身安全;加强校园的治安管理,学校实行领导带班、教师值班巡逻制度,确保学校良好的治安环境;加强学校消防和用电管理,定期检查消防设施和器材,及时更换老化电线,确保学校用电、用水安全;制定了安全方面的各项应急预案,确保在紧急状况下,师生能够迅速疏散,同时利用国旗下讲话、班会时间加强对学生进行安全教育,增强学生的自防自救能力。
3、认真执行国家课程计划,严格按照课程计划开设课程,做到开足、开齐课,特别是学校里的思想品德课,要求每位老师认真上好每节课。学校严格遵守上级主管部门规定的作息时间,不随意变动上课时间,不在假期里给学生补课。
4、加强学生思想道德教育、法制教育。以《小学生守则》、《小学生日常行为规范》为主线,开展形式多样、丰富多彩的活动,利用国旗下讲话,主题班会活动对学生进行思想、法制教育。在法制教育上做到了“四落实”,即有教师、有教材、有课时、有活动。
5、规范收费行为,切实治理乱收费现象。凡涉及向学生、家长代收费的,我校都严格按照财政、物价及上级教育行政主管部门核定的收费范围、收费标准执行,在执行过程中本着自愿原则,并在收费期间向学生、家长进行公示,维护了学校、教师在人民群众中的形象。
三、开展“法律进校园”活动,坚持品德教育与法制教育并进
1、采取课堂教育和集中宣传教育相结合的方式,推动学生学法的落实。一是制定好法制教育工作计划,明确课时安排,通过日常课堂教学加强对学生法制教育,推进学校法制教育计划、教材、课时、师资的“四落实”;二是要利用全国法制宣传日、全国安全教育日等特定时间,开展集中法制宣传教育活动,不断提升学校学生学法的效果。
2、采取“小手牵大手活动”,推动学生和家长互动式的法律学习。每月要求各班开展一次法制宣传教育班会活动,要求每个同学在班会上讲一个法制故事。课后每个同学回去给家长讲一个发生在你身边或所知道的遵纪守法小故事或违法必受罚的案例,让学生和家长一起来学法、用法,提高全民的法律素养。
3、采取灵活多样的教育方式,促进学生的学法用法。把法制教育与思想品德教育密切结合起来,把反面典型教育与正面教育、全面教育与个别教育有机结合,把法制教育与日常行为规范达标、依法治校结合起来。不断探索法制教育方式方法,增强法制教育的实效性和吸引力。近年来,学校通过开展法制讲座、法制知识竞赛、法制手抄报等生动活泼的形式,指导学生积极参加各种法制活动,在实践中增长法律知识。
4、以创建“平安校园示范学校”为契机,抓好学生普法教育。以创建工作为载体,加强对学生的安全防范教育,依法开展校园及周边治安环境的专项治理工作,从而实现教育队伍更加稳定、校园秩序更加优化、法治环境更加规范、安全管理更加完善的目标。①进一步明确学校安全目标,深入开展安全法制教育,举办专题讲座,提高全校师生的安全、防范意识;②加大综合治理工作力度,落实校园安全责任制;③建立联控联防长效机制,深入整治校园周边环境,严禁学生在课间出入校园,努力营造良好的外部环境④加大检查力度,坚持季度检查与平时检查相结合,重点对校园教学楼门窗、电路、体育设施等隐患进行检查,做到防患于未然。⑤加强与相关部门联合行动,加强对学生依法维护合法权益的指导。使青少年懂得用法律武器维护自身的合法权益,同不良行为作斗争,增强青少年自我保护意识和能力。
5、多渠道宣传,拓宽法律宣传学习的宽度和广度。在强化学法的前提下,加强了法律知识的宣传。学校的宣传橱窗,每学期都有法律知识的宣传和违法行为图片展。各班黑板报定期有法律知识的内容,并把此项内容作为班级考核、文明班级的评比的主要条件。
通过扎实开展上述“七五”普法宣传教育活动,我校“七五”普法工作取得明显成效:一是师生法律知识普及率达到100%,二是师生安全无事故、无辍学、无违法犯罪、无盗窃案件、无刑事案件等;三是师生的遵纪守法率达到100%,教育教学质量稳步提高。