医学技术论文模板(10篇)

导言：作为写作爱好者，不可错过为您精心挑选的10篇医学技术论文，它们将为您的写作提供全新的视角，我们衷心期待您的阅读，并希望这些内容能为您提供灵感和参考。

篇1

1)亲和力高、特异性强。适配体与靶标之间，凭借彼此互补的三维结构，相互作用后形成牢固稳定的复合物，其解离常数通常能达到pmol/L～nmol/L的水平，并且能分辨出靶标结构上细微的差别。

2)库容量大，识别范围广泛。SELEX技术的靶标远远多于经典的抗原抗体结合反应，除了有蛋白质、核苷酸分子外，还可以是糖类、氨基酸、维生素、抗生素、金属离子、有机染料，甚至可以是细菌、病毒、寄生虫等完整的细胞或组织，几乎囊括了自然界中的全部物质。

3)合成容易，获得方便，易于修饰。适配体的体积比传统抗体小，筛选过程简便、周期短，对实验室的要求不高，并具备自动化控制的巨大潜力。经过化学合成和修饰以后可保持原生物活性不变，还可以增强其稳定性并增加其他新的化学性质，参加多类反应。标记了荧光、生物素和纳米金颗粒之后，发展出了诸如分子成像技术等疾病诊断新方法。

4)重复性好，纯度高。整个筛选和制备的过程在人为控制之下，所得到的适配体几乎没有生产批次之间的差异，便于日后的大规模生产和应用。的化学性质更稳定，不易降解，对温度不敏感，保存时间长，即使变形也能在很短的时间内复性，利于室温下运输。

5)分子量小、稳定性高。相对于抗体或酶，适配体的化学性质更稳定，不易降解，对温度不敏感，保存时间长，即使变形也能在很短的时间内复性，利于室温下运输。

6)应用便捷。SELEX技术所获得的适配体又被称作是核酸型抗体，其优于传统抗体的性质是没有免疫原性，因此便能获得一些低免疫原性甚至无免疫原性靶分子的适配体。并且还省去了传统抗体制备过程中的动物实验，而直接从体外文库中获取。而且适配体更容易通过细胞膜，并且没有毒性，利于检测细胞内的靶分子和实现多层次的调控，并能较快地被机体清除代谢掉，经过特定的化学修饰后，还可使半衰期延长，稳定性提高，便于科学研究和疾病诊治。

2SELEX技术的发展

目前SELEX技术出现了一些新的筛选方法，越来越多的与各种标靶相对应的适配体被筛选出来。如毛细管电泳法、硝酸纤维素膜过滤法、磁珠分离法、亲和色谱法、Non-SELEX技术、无引物PCR-SELEX技术、微流体SELEX技术、生物芯片SELEX技术、原子力显微镜等各种新的模式也被应用到适配体的筛选中。同时还出现了SELEX技术与定量PCR，SEL-EX技术与流式细胞仪、SELEX技术与ELISA的联合应用，更是极大的提升了筛选的效率和准确性。

2．1消减SELEX技术消减

SELEX技术是一种经过改良的SELEX技术。以完整细胞为靶标的消减SELEX技术，是在筛选过程中以完整的细胞作为靶标，并消减掉能与已知或未知的共有靶标结合的配体，经过消减后的次级随机文库再投入到特异靶标的筛选中。它的意义在于可以实现从两组高度同源的完整细胞中，筛选出针对其中一种细胞的特异性适配体。这项技术可应用于发现新的肿瘤细胞识别结构，还可进一步作为“生物导弹”，独立完成靶向治疗或携带药物，未来将会在肿瘤的治疗中发挥巨大的功效。

2．2自动化SELEX技术

传统的SELEX技术过程需要完成一套重复繁琐的操作，使得筛选相对耗时耗力。自动化SELEX技术的建立可以简化筛选过程，节约时间和物品的消耗，实现高通量和限定范围，达到同时筛选多个靶分子的效果。自动化SELEX技术离不开现代分离仪器的配合，后者的发展推动了前者的进步。2001年Cox等使用Biomek2000自动化工作站成功筛选到了溶菌酶的特异性适配体，通过这种自动化筛选平台，不到2d就完成了12轮的筛选。

2．3导向SELEX技术

适配体的特异性是整个SELEX技术的核心所在，为了提高适配体的特异性和稳定性，可将已知的能与靶标非特异结合的分子掺入到文库中或预先与靶标进行混合后再筛选，这样可获得只与靶标特异结合的适配体。2002年Hamm等将此技术与抗个体基因型的方法联合运用，成功获得了特定激酶抑制剂的特异性RNA适配体。Martell运用特殊的导向SELEX技术，从随机表达盒杂交文库中筛选到了能与E2F蛋白具有高亲和性的RNA适配体。

3SELEX技术在医学中的应用

3．1SELEX技术在基础医学研究中的应用

依据核酸适配体具有与靶物质高特异性结合的能力，可以帮助我们寻找到疾病的发病机制。Roulet等提出把SELEX技术同基因表达串行分析手段联合应用，并通过自动化的序列提取工艺，建立转录因子结合位点的定位模型。通过对转录因子适配体文库中的某一序列进行测序，可了解该蛋白结合位点的特异性，探寻一些以前在基因组中从未研究过的结合位点，掌握在不同的核苷酸位点上非独立碱基出现的先后顺序，为阐明其结合机制提供一些线索。Bian-chi等采取SELEX技术发现，TRF1二聚体在端粒上有两个相同的识别半位点，它们的距离可以变化，且两个半位点的顺序方向没有区别。这为探索端粒长度的调节机制提供了新依据。

3．2SELEX技术在疾病诊断中的应用

肿瘤细胞及其标志物的早期检测对于肿瘤的诊断及预后极为重要，目前已经筛选出多种肿瘤的特异性适配体，例如急性髓系白血病的适配体KH1C12、急性淋巴细胞白血病的适配体sgc8/sgc3/sgd3、恶性胶质瘤的适配体GBI-10、Burrkitt淋巴瘤的适配体TD05、非小细胞肺癌的适配体S1/S11e/S15、小细胞肺癌的适配体HCA12/HCC03/HCH07/HCH01、乳腺癌的适配体KMF2-1a、结肠癌的适配体KDED2/KD-ED7/KDED9/KC2D3、小鼠肝癌的适配体TLS9a/TLS11a、卵巢癌的适配体DOV3/DOV4/DOV6。它们可以特异地识别肿瘤细胞，仅需少量肿瘤细胞即可实现准确的鉴别和分型。将适配体与纳米颗粒结合后通过比色检测，观察颜色的变化即可判断有无靶标细胞。这个实验非常敏感，样本中的靶细胞数超过百个即可检测出来，还不需要昂贵的检测设备和待检靶标的标记与修饰。因此，有可能成为常规筛查活体标本中新生肿瘤细胞的一种新方案。与此同时肿瘤细胞的分子成像技术也已经问世，它能够从细胞水平对生物过程进行可视化描述及测量，不仅能定位病灶，观察某些影响肿瘤细胞行为的生物过程，还能观察肿瘤细胞对药物的反应。Kim等研究将前列腺特异性膜抗原(PSMA)的特异性适配体与金纳米材料结合后，带有PSMA的前列腺癌细胞便能够被特异性地标记出来，将其作为造影剂应用在前列腺肿瘤的影像学诊断中，比传统的造影剂显像时间更持久，毒副作用更小，应用价值更显著。SELEX技术还在血液的生化检查方面，显示出一定的应用前景。用其检测血液中的某些靶分子，将比传统方法更特异和高效。脑尿钠肽(BNP)常被临床上用来评价急性心力衰竭或急性呼吸窘迫症患者的病情和预后。Lin等采用SELEX技术的原理，筛选到了能与BNP特异结合的适配体。在微流体试验模式下，被荧光标记的适配体可以快速测出血液中BNP的浓度，比放射免疫分析法或是免疫分析技术更精确、更经济。C反应蛋白(CRP)是机体在应激状态下生成的一种非特异性的急性时相反应蛋白，CRP与冠状动脉粥样硬化、心肌梗死等心血管疾病具相关性。Bini等开发出了一种带有光化学性质的CRP特异性适配体，当血液中的CRP浓度超0．005mg/L时就能被检测出来，敏感度非常高。这一成果为新型CRP诊断试剂的研制奠定了基础。SELEX技术还被应用在病原微生物的检测，其能克服传统检测方法在特异性和敏感性上的缺陷，为新型检测试剂盒的开发提供有力支持。例如结合分支杆菌的特异性适配体CSRI2．11检测过程比传统的培养鉴定法更省时更敏感;丙型肝炎病毒的适配体ZE2可结合酶联免疫吸附试验实现丙型肝炎的早期筛查，不受抗体检测时窗口期的制约;疟原虫乳酸脱氢酶的适配体PL1在临床实践中，可以很好的区分患者是否感染了出间日疟原虫或恶性疟原虫。

3．3SELEX技术在疾病治疗中的应用

SELEX技术在疾病治疗中的功效越来越来受到人们的重视。适配体在体内与靶分子结合，理论上可以对靶分子的生理功能和代谢过程产生影响，靶分子也会因此发生信号传导的改变甚至丧失原本的功能，直接或间接阻断疾病发生进程。以此开发的靶蛋白功能阻断剂，日益显示出其巨大的潜力。全球首个适配体药物是2004年由美国食品和药物管理局批准上市的哌加他尼钠，可用来治疗老年性黄斑变性。SELEX技术在凝血系统疾病的治疗上具有一定的意义，已找到了可用作抗凝血和抗血栓药物的适配体REG-1，其结合的位点是凝血酶的肝素结合位点以及纤维蛋白原结合位点。在治疗免疫系统疾病方面，也已获得了具有药物开发潜力的特异性适配体，如可用来拮抗自身抗体已达到治疗系统性红斑狼疮的适配体，还有能刺激T细胞释放的4-1BB的适配体。对于肿瘤的治疗，基于SELEX技术研制的适配体药物更是走在前列，进入到了临床试验阶段。如对实体瘤和复发性急性髓样白血病有良好疗效的AS1411，更出现了连接金纳米棒的适配体，用作肿瘤靶向光热治疗。适配体药物作为抗病毒药，也展现出良好的前景，比如用来抑制狂犬病病毒的复制和干扰艾滋病病毒的体内合成。除此以外，核酸适配体还可作为运输工具，特异性地把药物运送至靶标细胞或组织达到定点清除的治疗效果，研究比较成熟的有装载着阿霉素，用来杀伤前列腺癌细胞的复合适配体药物。

篇2

某一系统疾病的临床诊断过程以泌尿系统疾病为例，在临床上，泌尿系统疾病涉及肾上腺、肾脏、前列腺、输尿管、膀胱、尿道等部位，泌尿外科医生的临床诊断思维在形成过程中除了应具备大量的医学专业知识之外，还要具备认识客观事物的正确思维方法。疾病是一个客观事物，人们对客观事物的认识，即对疾病的认识，都要通过感性认识上升到理性认识。临床诊断要经历初步诊断、会诊、确诊等几个阶段，这个过程是泌尿外科医生对所获得的泌尿系统疾病信息进行临床思维，并进行分析、判断、推理，最终将信息形成疾病诊断的过程。正确处理医学影像高新技术与临床诊断思维的关系医学影像高新技术使外科医生的视野扩大了，并克服了过去脏器诊断的模糊性。随着医学技术的发展，CT、核磁共振等已成为肾脏等腹膜后器官检查的重要工具，而医学影像高新技术在各科中的广泛应用，极大地提高了诊断水平。医学影像高新技术的进步，不但使医生得到了对疾病的深层次认识，也使其对临床思维方式提出新的要求。例如，CT、MRI在成像手段上具有很高的创造性，它集计算机、物理学、生物工程学等于一身，形成了影像数字化。其高分辨及薄层技术可以对局部较微细的结构进行分析，从而对临床产生深刻的影响。事实上，诊断手段越先进，越要发挥人的能动性和创造性，越要求影像专业的各科医生具有更高的综合判断能力。所以，面对大量的影像高技术参数，临床理论思维方法要求更完善、更全面，就越要求各科医生具有更高的综合判断能力和临床水平。

在疾病诊断过程中，处理好医学影像传统技术与医学影像高新技术的关系

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二、新兴美容整容行业的发展方向

医学美学,作为医学领域中一个新兴的独立的系统科学，是医学和美学原理交叉的学科。“要求学生掌握的是如何实施对人体的美学研究、美学维护、美学修复和再塑人的健康之美”现代医学美学的兴起与和医学审美的更高层次发展，促进了研究与实践并取得显著成果。但是目前也出现了各种问题，出现了很多整容美容事故，主要原因是不了解美学规律，不遵循美学规律地乱动刀子。

三、数字媒体介入前两者结合中的运用前景

（一）、教学中的运用。对整个专业知识体系的实践教学环节进行了改革创新,结合多媒体、投影仪等教学工具，利用计算机采集图像数据、计算机图像处理技术,配合摄像机及相应测量用软件,作为测量分析用具,启用医用美学等软件虚拟测查数据结果。使教学更直观更具体化。

（二）是与客户交流的运用，面向特定的群体发展到面向特定的一个人、一个家庭的阶段。即是精确化传播阶段，能和受众（客户）保持一对一互动，受众能较易获得个性化信息，并能通过先进的媒体及传播技术经济地、方便地满足不同受众的个性化需求。

（三）推广传播的运用。大众传播、分众传播，与精确化传播相对应。在互联网、社交网站中使用网页、广告等媒体市场推广体系，最大化数字媒体的营销效果。

四、数字媒体介入美学教学实践的改革

（一）美学基础知识体系的完善

1、既要了解美学基础知识，又要了解医学基础知识。美学主要包括美学基础知识和基本技能、人体整体美学与各部位美学分析评价技能。医学美学主要包括实践指导手册、医学美学概论实训教程等。通过综合课程体系学习，巩固美学和医学美学理论课程的基本知识和基本概念。

2、要配有专门的美学与医学美学实践教学画室和实验室，配备各种实践教学器材。

（二）软件与工具的广泛使用

利用图形软件平面与3D结合，有效地进行人体美学测量，分析与评价的技能应用与实施于临床。选用计算机、摄像机、自制摄像用头部固位架、图像采集卡、相应测量用软件,作为测量分析用具,尺子、量角规等，整形美化软件。

（三）课程教学实践改革

在讲解分析中，多与医生交流医学美学的理论与原理，结合临床实际，分析事物与美学的关系及其成因，进行分析并提出措施或建议，培养学生对美学与医学美学理论原理的应用能力。

1、集体讲解，多媒体播放，与医生共同讲解相关解剖知识，养成科学的观点去看待和解决问题。如头面部的三停五眼分析与测量，对比例不协调除了使用化妆技术可以改变，还需要微整形或者手术整形改变，需要向医生咨询以及完全了解问题的解决。如，瘦脸针、除皱针的恰当使用。

2、素描示范步骤和范例作品讲解。用素描方法描绘照片和写生对象，只有掌握了艺术手段熟练处理问题的能力，才能更好地运用进行计算机图形软件处理出需要的效果。艺术手段和计算机的修改可能更加随心所欲，但是医学要遵循规律，是需要将对象的个性与标准规律反复进行比对。审美的修养显得十分重要。如。教师先分析对象特征，再示范观察方法、比例、结构，表现基本手法，再让学生分组练习，教师同时进行巡视指导，培养学生动手实践能力和创新能力。

3、利用各种软件分析真实照片和虚拟美容整形效果，比较各种数据在审美的差别，认识解剖知识的重要性突出计算机的运用能力和动手能力的培养，启发学生自己动手，使实践教学具有规范的动手能力和临床实践操作技能。如，打开photoshop软件，将搜集到的照片导入，拉开辅助线，选中钢笔路径作为倾斜铺助线和修改的描画。点击标尺工具进行测量。然后采用人体模型测量或者同学之间互相进行测量，写出实验报告，将最后得出的结果做出虚拟效果图。用VPSS、IFACE等软件，目前这些软件还不够强大，需要结合photoshop软件使用，最强的是韩国的3D整形软件syncromaxplus，需要加强对3D软件的学习，制作出更真实性的3D效果图。可以很有效的帮助整形医生的手术。

4、实践课堂案例式教学。就美学与医学美学课程教学及教育过程中的有关典型问题，或学生关心的现实生活中的见闻，或学生自己容貌方面的忧虑烦恼等，作为实践课堂案例来进行教学。例如，比较典型的东西方数据差别，加强民族审美意识，不盲目整形。

五、专业实践、企业实习

实行产学结合，在全省范围内确立了教学实习基地，让学生到实习基地去见习实习学习，如参与美容医院的各种美容治疗或美容手术的实习见习，实习见习各阶段写出美的切身体会与实验报告。参加美学与医学美学讲座、学术交流等活动。让学生熟悉美容业的生产、建设、管理、服务工作，为美容第一线职业岗位输送高素质的应用型人才打下基础。

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2医学院校生物技术专业临床医学教学现状和问题

2.1课程体系和教学内容完全照搬临床医学专业本科教育

课程体系和教学内容是培养目标的直接反映，是培养人才素质、提高教学质量的核心环节。生物技术专业临床医学课程体系和教学内容，应该紧贴生物技术专业实际需求，有针对性地进行设置。然而，目前大部分医学院校生物技术专业临床医学课程体系和教学内容完全照搬临床医学专业本科教育，将内科、外科、专科教学内容按照病因、临床表现、病理、诊断、治疗、预防等毫无取舍地灌输给学生，呈现教师教学无特色、无重点、无思路，学生学习无方向、无兴趣的状态。这与学科设置初衷和社会人才需求脱节，不能培养学生的自主学习能力及创新能力，没有达到预期效果。

2.2课程目标不明确，考核要求不严格

目前大多数医学院校对生物技术专业临床医学教学不够重视，没有真正意识到临床医学对该专业学生今后发展的重要意义。医学院校生物技术专业临床医学课程目标应该是：使学生具有一定临床思维，了解临床医学前沿和需要，并能在医学发展和临床需求中找到生物技术的落脚点、发力点，运用所掌握的生物技术理论知识和技能，从事相关领域的科学研究、技术开发，最终为医学问题的解决开辟新思路、提供新方法。但是目前医学院校对于生物技术专业临床医学课程目标认识比较模糊，在教学过程中需要学生掌握哪些内容、掌握到什么程度没有一个明确的标准。考核过程较为敷衍，甚至没有考核，使临床医学课程开设存在“鸡肋化”的危险。

3医学院校生物技术专业临床医学教学内容

医学院校生物技术专业人才培养，在强调基本素质共性的基础上，应该有不同的培养类型和专业方向。医学生物技术专业临床医学教学内容必须体现职业生涯发展目标，尊重学生多样性选择。目前的教学内容和课程体系不能完全符合专业发展和人才培养需要，不能完全适应现代医学发展需要，不能完全考虑到多样化、个性化、专业化，因此有必要对医学院校生物技术专业临床医学教学内容进行改革。

3.1紧贴实际，重点突出

临床医学是医学生物技术的出发点和落脚点，在课程设置上除了要整体介绍临床医学概况外，重点是要筛选出能够体现生物技术学科发展价值以及与生物技术知识有交集的内容，体现出医学生物技术特色和资源优势，如临床诊断的新方法，基因诊断、基因治疗技术在肿瘤及其他疾病中的应用等；而疾病的临床表现、物理诊断及常规治疗方法等内容应该淡化。这样才会贴近生物技术专业实际，更好地激发学生学习热情，避免浪费学生有限的精力。

3.2以临床问题为向导，以临床难点为突破

医学生物技术发展动力就是临床问题。医学生物技术的发展已为我们解决了一个又一个医学难题，开辟了新思路，提供了新方法，已有很多成熟的、新兴的生物技术应用于临床实践。因此，应将目前临床上亟待解决的问题和需要突破的难点贯穿在教学中，引起学生的思考和学习兴趣，从而更好地把生物技术和临床医学结合起来。

3.3着眼前沿，广泛涉猎

生物技术专业临床医学教学内容需要不断更新和发展。临床医学的最前沿往往与生物技术的发展密不可分，因此要把临床医学中最新的焦点和热点引入教学中，让学生体会医学生物技术对现代医学发展的重要性，增强荣誉感和使命感。同时，临床医学不断进展的案例也是很好的教学事例，让学生了解前辈们是如何发现问题、分析问题、解决问题，并推动医学科学向前发展的。但也要照顾到医学发展的冷门分支，给学生拾遗补缺的机会，在大家忽视的老问题上做出新文章。

4医学院校生物技术专业临床医学教学模式

生物技术专业临床医学教学模式应该有别于临床医学专业，要更加突出多样性、灵活性和自主性，最大限度调动学生积极性，将课程的作用发挥到最大化。

4.1课堂教学与课外教学相结合，选修和必修相结合

压缩课堂教学时数，将教学主战场放在课外，把更多的时间交给学生进行自主学习。增加选修课数量，鼓励学生选择自己感兴趣的方向进行探索。生物技术专业将来不从事临床医疗工作，对临床医学知识的学习应该是有重点和有取舍的，这个选择权不应掌握在教师手中，而应留给学生。让学生在课外通过文献查阅、学术会议、网络交流等多种形式，学习对未来职业发展有帮助的医学知识。

4.2大师进讲堂，将导师范围扩展至临床学科

师资队伍建设是实践教学体系改革的关键。目前生物技术专业临床医学师资结构中，中级职称教师比例偏高，真正的大师偏少。应该把临床医学的“大腕”请进讲堂，因为生物技术专业的导师往往更重视具体的新技术、新方法，而对临床医学前沿需求知之甚少，缺少宏观思路和顶层设计。这些可由临床导师很好地补充，他们扎根临床数十年，对疾病的发生发展、治疗的难点要点有更全面、深入的认识。要鼓励学生参与到临床导师的科研课题及科技创新活动中，使其不仅对原有理论知识和技术有更清晰的认识，还锻炼了临床科研思维能力；使学生能更准确地把握现代医学发展的脉搏，找到自己感兴趣、能钻研、有出路的研究方向，对未来职业发展进行合理的规划。

4.3启发为主，传授为辅

生物技术专业学生将来主要从事科研工作，应该是临床医生的益友良师。其临床医学教学不应以传授方式为主，而应采取引导、启发的方式，加入讨论及案例教学，让学生自己思考问题，用专业特长来分析问题、解决问题。强化学生创新思维和综合能力培养，在教学环节中启发学生自主学习和自由学习。在教学方法和教学手段改革中，坚持理论联系实际、基础联系临床的教学理念，强调教学过程的“四结合”：密切结合科研，密切结合临床，密切结合实践，密切结合新进展。

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    二、生物医学技术与体育科学的发展

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(2)“粉笔+黑板”的教学模式，由于教学手段单一、呆板，课堂气氛死板、沉闷，不利于激发学生的想象力和创造力，学生的听课积极性不高，教师的创造性思维也受到了抑制，容易使教师因循守旧、不思改进，一本教案用几年，以至知识老化，创造性思维枯竭。

(3)医学教学素材众多，难以长期保存。

(4)医学知识繁琐、复杂，课堂上老师苦于难把大量的知识传授于大家，多数老师一味填鸭式的讲授，不仅不会增加学生学习的效率，还会使学生产生厌烦情绪。学习资源和信息。

2多媒体技术在医学教学中的重要性

(1)计算机多媒体技术把枯燥无味的知识形象、满足不同学生的不同需要，使得学生在一定时间内尽可能获取更多的知识。

(2)多媒体技术可以节省板书时间，大大提高了课堂效率，还可以增加与老师沟通互动的机会。

(3)多媒体技术的应用改变了传统医学教学过程单调枯燥的局面，完全可以在课下依靠网络加强学习，而且多媒体技术实现了资源的共享，为学生提供了更多的

3多媒体教学在医学教学中应注意的事项

多媒体教学在医学教学中产生了重大的变革，但是，应用多媒体时，应将多媒体作为教学的助力，不能成为教学的绊脚石。所以，使用多媒体技术时，应注意以下几个方面。

(1)避免遏制学生的想象力。这就造成教师在课堂上过多的进行电脑操作，引导学生按照课件的指示进行学习，在一定程度上抑制了学生的想象力。

(2)避免重回填鸭式教学。多媒体技术的广泛应用使教师的板书量大大减少，造成学生没有足够的时间进行思考，导致教师无法全面的掌握学生学习的具体情况，对于教学中存在的问题不能及时发现和改正。

(3)避免过度依赖多媒体教学，使教师学生之间失去互动性。学生也不会再认真地去做笔记，整理自己的学习思路和知识体系，而是变得更愿意去依赖拷贝教师的教学资料。

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VEGF为血管内皮细胞增殖的分裂原,是一种肝素结合双链糖蛋白,是目前已知最强的血管生成刺激因子。VEGF家族具有众多成员,包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D及胎盘生长因子。VEGF家族众多成员中,VEGF-A在血管生成中的作用最重要,是血管生成过程的主要介导者。许多研究已证实,VEGF存在于人卵泡液中,且与卵泡液的聚集及卵泡膜血管生成密切相关,是介导卵巢功能的重要信号分子。女性自然周期和促排卵周期中,在促性腺激素的作用下,卵巢局部可产生VEGF,且卵泡液中VEGF浓度明显高于血清VEGF。血清及卵泡液中VEGF表达增高的意义在于通过诱导卵泡周围微毛细血管生成,使卵泡有更多机会得到血液中FSH和LH,刺激卵泡的发育和成熟。同时,在VEGF的刺激下,卵泡壁可形成丰富毛细血管网,有利于卵泡从血液中吸收大量的必需营养物质促进自身生长。研究表明,从窦性卵泡到成熟卵泡的颗粒细胞、从中等大小卵泡到排卵前卵泡的卵泡膜细胞上,VEGF表达强度随着卵泡发育而增强。因此,排卵前VEGF升高可能间接地反应了颗粒细胞和卵泡膜细胞的增殖和成熟,是反映颗粒细胞和卵泡膜细胞分化成熟的重要生物学指标。通过研究VEGF与女性生殖的关系,发现发育中的卵泡颗粒细胞可合成VEGF并以旁分泌的方式释放到卵泡液中,诱导卵泡周围血管的生长。卵泡液VEGF水平与卵母细胞的成熟有关,卵母细胞成熟率随着VEGF水平的升高而升高。当卵泡液VEGF水平保持在一定范围内时,卵母细胞具有较高的受精率、卵裂率及妊娠率。当卵泡液VEGF水平较低时,卵泡膜血管生成减少,血管通透性下降,卵母细胞内功能完善的线粒体数减少,卵母细胞ATP含量下降,从而使卵子成熟过程中的各种生物学过程效率降低,影响卵母细胞质量及其后续发育能力。文献报道,VEGF在卵泡液的作用主要表现为,在卵泡期受HCG的调节,增加卵泡膜及卵泡壁血管内皮细胞的通透性,促进卵泡液的聚集,为卵泡液各种细胞因子前体物质的运输和激素的合成提供条件,同时在黄体形成时促进毛细血管网的构建。

2、血管生成素(Angiopoietin,Ang)

Ang是一种具有4个成员的促血管生成因子,分别为Ang-1、Ang-2、Ang-3和Ang-4。学术界对Ang-1、Ang-2的研究较多,Ang-1可与内皮细胞所表达的酪氨酸激酶受体Tie-2结合,从而促进新生血管生成及稳定;而Ang-2虽也能与Tie-2结合,但却不能诱导Tie-2受体的磷酸化,而是竞争性地引起Ang-1与Tie-2的结合减少,使血管通透性增加及稳定性下降,为Ang-1的天然拮抗剂。Ang-2可与VEGF发挥协同作用,抑制血管重构过程中Ang-1所导致的过度分支。当有VEGF-A存在时,Ang-2可促进生长因子向血管内皮细胞靠近,有利于血管生成;当无VEGF-A存在时,可促进内皮细胞凋亡,使血管退化。有关人卵泡液Ang-1及Ang-2的表达尚不清楚。但有部分早期研究表明,在早期卵泡发育过程中,Ang-1表达相对VEGF和Ang-2较丰富;晚期排卵前卵泡VEGF和Ang-2明显上调且持续表达,从而促进了卵泡血管的生成和稳定。而在非优势卵泡中,Ang-2持续表达且处于主导地位而VEGF表达缺失,从而使卵泡血管退化,抑制卵泡进一步发育。动物实验表明,Ang-2在大鼠的闭锁卵泡中表达十分丰富;Ang-1和Ang-2也表达在大鼠的各级卵泡膜细胞中,且在成熟卵泡中的表达量显著高于次级卵泡,而在小猿的囊状卵泡膜中Ang-2并不表达。羊卵巢中,Ang-2表达于颗粒细胞及各级卵泡细胞膜上,且在卵泡细胞上的表达明显高于颗粒细胞。在牛各级卵泡和闭锁卵泡细胞中均检测到血管生成素及其受体,但在成熟卵泡中的表达量最低。进一步研究发现,在牛卵泡中注射Ang-2可使孕酮升高,而注射Ang-1后同时还可使雌激素水平上升。在牛的整个排卵过程中均有血管生成素及其受体的表达,其中Ang-1在排卵期表达升高而Ang-2的表达明显下降。这与大鼠排卵期血管生成素的表达正好相反,大鼠排卵期Ang-2的表达会明显升高。另有研究发现,在大鼠排卵前给予外源性Ang-2时可干扰正常的排卵过程,阻止排卵。由此推断,血管生成素可能通过调节卵泡血管生成及与卵泡细胞和颗粒细胞膜受体结合影响哺乳动物卵泡的发育,但具有种属差异,很难直接推断其在人类生殖过程中对卵泡发育的影响。

3、基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)

MMPs是一类能水解血管基底膜和细胞外基质,从而间接促进血管生成过程的蛋白水解酶家族。MMPs可在血管生成过程中间接帮助血管内皮细胞向血管出芽部位迁移,为血管新生提供足够的空间。MMPs家族有众多成员且在体内作用各不相同,其中与其蛋白水解活性关系最为密切的是MMP-2和MMP-9。研究表明,MMP-2通常在初级滤泡、窦前卵泡、小窦状卵泡及排卵前卵泡中的颗粒细胞表达,而MMP-9则在发育良好的窦前卵泡、窦状卵泡及排卵前卵泡膜细胞表达,提示MMP-2和MMP-9参与整个卵泡的生长发育和排卵过程。在人类正常卵泡发育过程中,卵泡在发生排卵前的两个星期内约发生400次扩张,这就需卵泡基底膜及细胞外基质同时发生相应的重塑。而卵泡液MMP-2和MMP-9可水解卵泡壁血管外基质,促进血管内皮细胞迁移而加速血管生成,从而为卵泡的发育提供丰富的血液供应。同时也通过水解细胞外基质为卵泡壁的不断扩张创造了有利条件。有研究发现,MMP-2表达于正常卵泡液中且具有明胶酶活性,而在PCOS患者卵泡液中,其性质表现更活跃。此外,MMP-2同时在人类黄体生成过程中扮演着重要的角色。通过动物实验发现,除MMP-2和MMP-9外,MMP-14在卵泡生长发育过程中具有十分重要的作用。但由于研究所需的组织很难获得,对MMP-14在人类卵泡生长发育过程中的准确作用及在卵巢组织中的定量表达仍很难得到证实。同时也很难做到对发育中的卵泡和排卵时的卵泡中两者的表达进行比较。研究发现,MMP-14和MMP-2均参与卵泡生长发育和卵泡液的形成过程。由此可见,基质金属蛋白酶是人类卵泡发育成熟的重要调控分子,有必要对其在卵泡不同发育阶段的表达进行进一步定性和定量研究。

4、活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)

ROS是细胞内氧代谢所产生的正常物质,如超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢等。高水平ROS具有细胞毒性作用,并可诱导细胞凋亡,参与机体多种疾病的发生。但低水平的ROS作为信号转导分子,可介导内皮细胞的增殖和迁移而刺激新生血管生成。ROS源自线粒体电子传递系统、细胞色素p450、黄嘌呤氧化酶、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶、一氧化氮合酶(NOS)等,其中NADPH氧化酶是细胞内ROS的重要来源。NADPH氧化酶抑制剂DPI可通过抑制由生长因子(如VEGF、FGF等)诱导的内皮细胞的增殖和迁移,提示NADPH氧化酶产生的ROS可促进内皮细胞发生增殖和迁移,是其发挥生物学效应的必需信号分子[16]。卵泡液中ROS主要来自于颗粒细胞,在卵泡的发育过程中,随着卵泡的不断生长,卵泡内氧含量逐渐降低而O2-逐渐增加,卵泡液ROS的增多并不影响颗粒细胞的增殖,反而卵泡内的缺氧环境和ROS的表达可能在颗粒细胞和卵泡壁血管生成中起重要作用。研究表明,卵泡液ROS在一定浓度下对卵母细胞的基因表达起着重要的信号转导作用,当ROS与未拆除颗粒细胞的卵母细胞共培养时,仅出现一定程度的卵母细胞成熟率降低,并无核的损伤表现,而当ROS与拆除颗粒细胞的裸卵共培养时,卵母细胞DNA碎片及caspase-3活性显著升高,发育能力大大降低。同时研究发现,未拆除颗粒细胞的卵子内谷胱甘肽含量明显高于拆除颗粒细胞后裸卵中的表达量,这表明颗粒细胞是ROS作用于卵母细胞的主要屏障,可防止卵泡液中过多的ROS对卵母细胞的毒性作用,其机制可能与影响卵母细胞内钙离子的储存结构、干扰钙离子的动态平衡以及引起卵母细胞减数分裂停滞和降解有关。因此,卵泡液ROS的表达在卵泡过程中具有双重影响,一方面ROS可诱导卵泡膜血管的重新构建,丰富卵泡的血液供应,促进卵泡的发育;同时高浓度ROS也会通过相应的信号转导途径,对卵子的成熟和后续的发育潜能带来不利影响。

5、一氧化氮(nitricoxide,NO)

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射线照射到生物上，将发生复杂变化，大致分为4个阶段，即物理阶段、物理-化学阶段、化学阶段和生物学阶段。绘制动作按钮，用鼠标点击按钮一步步展示生物学变化过程，当射线照射到机体上，机体发生电离、激发，化学键断裂、产生自由基等。通过动作按钮，可依次展示效应过程，加深学生印象，从而更好地理解生物学效应发生过程。

1．2放射性测量仪器

讲解气体电离探测器和半导体探测器时，可应用动画显示这一过程：射线照射到物体上，物体受激电离，产生出正负离子对，在电场的作用下，离子到达电极，电路由断变通，通过电流边指针摆动变化反应射线的强度，形象地展示了这两种放射性测量仪器的工作原理。

1．3闪烁型探测仪

闪烁型探测仪是讲解的重点，用不同颜色的图示、文字阐述各类部件，如闪烁体、光导、光点倍增管、放大器、后续电子线路等。通过箭头图标，展示射线一步步的变化，从射线能变为光能，再变为电能，再为仪器捕捉，放大、分析、甄别。1．6常用测量仪器简介应用于体外放射分析常用的测量仪器很多，可将一些国产的射线探测仪的实物图片展示给学生，如γ放射免疫计数仪、液体闪烁计数仪，同时配以文字说明，分别介绍各类仪器的基本性能、适用特点，并对比各类仪器的优、缺点。

1．4放射性碘标记化合物

该章节需要介绍氯胺T法、乳过氧化物酶法等标记法，采用图标化学反应方程式展示碘标记到蛋白质上的过程，配以彩色文字说明，把艰深晦涩、难以理解的反应步骤简单明了地表示出来，提高学生学习效率。同时，用醒目的标志，提示标记时的注意事项，避免放射性污染。

1．5放射自显影

使用彩色文字介绍各类感光材料，如原子核乳胶、氚片、X线片等。用动画流程讲解自显影的过程，如曝光、显影、停影、定影等流程。用彩色截图展示各类自显影标本，如宏观自显影、光镜自显影和电镜自显影。

2多媒体技术应用于检验核医学教学中的优势

2．1突出了专业特点

检验核医学是医学检验学和实验核医学交叉的边缘学科，涉及核物理、放射化学、电子学、检验医学等，内容抽象、知识庞杂、理论深奥、重点难点多，仅仅采用传统的教学手段（如挂图、板书、幻灯片等），难以满足现代检验核医学教学的需要。采用多媒体技术，将图、文、声、动画等视听内容生动逼真地融于教学之中，创造一个理性认识与感性认识相结合的平台，把多学科知识串联起来，利用图像讲解抽象深奥的知识，可以成功解决检验核医学的教学难题。

2．2突出重点、难点，优化教学效果

检验核医学中，有一些专业特有概念，如契伦科夫辐射、康普顿-吴有训效应、俄歇电子等都是重点、难点，由于医学生缺乏足够的理工科知识，即便教师费力地讲解，学生依然如听天书。而应用多媒体技术后，能很好地揭示原子内外的奥秘，展示各种核反应时原子的变化过程，给学生以三维、立体的概念，取得事半功倍的效果。譬如，过去采用传统方法讲解契伦科夫辐射和俄歇电子，授课结束后，仍有近1/3的学生表示未理解。现在应用多媒体技术后，90%以上的学生表示理解了。通过多媒体技术，将检验核医学非常深奥抽象的理论知识具体化、形象化，便于学生理解掌握，突出了教学重点，优化了教学效果。

2．3有助于及时更新教学内容

现代检验核医学发展迅猛，新知识、新内容层出不穷，需要适时介绍给学生。多媒体技术具有信息量大的特点，可极大地丰富教学内容，通过结合网络资源，能及时快速地更新、补充检验核医学知识，充分满足学生的求知欲。现在涌现出的并得到广泛使用的新技术，如化学发光免疫分析技术、稳定同位素分析等，都可在第一时间介绍给学生。

2．4促进教师提高综合素质

应用多媒体技术后，不仅要求教师牢固掌握检验核医学基础知识，而且也要求教师熟悉多媒体教学手段，制作优质的多媒体课件。这就需要教师熟悉电脑技术、软件操作，具有一定的美工技能、艺术水平。通过多媒体教学提高了教师队伍的综合素质[2]。

3问卷调查实施

多媒体教学后，大多数学生反映良好，为了系统科学地评价多媒体教学效果，笔者进行了问卷调查。发放问卷244份，收回241分，回收率98.77%。问卷调查结果见表1。调查结果显示，绝大多数学生对多媒体教学评价很高，希望今后继续使用；大多数学生认为多媒体教学能激发学习兴趣，增加知识量、教学内容；但对突出重点、难点及针对性、启发性还有所欠缺。说明多媒体技术应用于检验核医学教学中取得了良好效果，发挥了重要作用，为学生所接受。

4多媒体教学存在的弊端

4．1课件质量有待提高

课件制作水平影响着教学效果，优质的课件是上好一堂课的必要条件，所以课件质量直接影响教学质量[3]。现代大多数课件以PowerPoint为主，需要准备优质的脚本和素材，搭好框架，明确层次结构。利用计算机技术，把文字、图像、声音、动画有机结合起来，注意人机互动以及幻灯片的连贯性。目前有些教师制作的课件过于简单，文字多、图片少，内容单一，仅仅是板书的“电子化”，导致课件质量不高，无法充分施展多媒体技术所带来的表现形式和丰富内容。同时，也有一些教师制作的课件过度追求形式花哨，增添了过多的视频、图片、声音等，导致喧宾夺主，使学生仅注意到花哨的动画和图像，而忽略了应学习的知识，反而影响了教学效果[4]。

4．2多媒体教学与实践教学结合不够

多媒体技术仅仅是教学的辅助手段，只起到强化教学效果的作用，而学生才是教学的主体，教师起主导作用。在多媒体教学过程中，往往出现课堂跟着课件走的现象，教师成了放映员，全部精力集中在课件上，成了操作员、解说员，无暇顾及学生，缺乏师生互动，降低了教师的主导性。学生思路也为课件所左右，难以调动其主动性。这样依据课件照本宣科的教学模式，完全偏离了初衷，又走向了“填鸭式”的老路，失去多媒体教学的优势。教师授课时，将多媒体技术与传统教学手段相结合，应把握课堂节奏，调动课堂气氛，随时观察学生的状况、表情、语言等信息，做到有张有弛。一堂优质课是一个师生互动过程，师生之间不仅有知识交流，还要有情感交流。

4．3过多依赖课件，忽视基本功

相较传统教学手段，多媒体是新技术，但新技术必须根植于传统教学手段上。如过多强调多媒体的应用，忽视教师教学基本功，缺乏生动、形象的讲解，教学将枯燥乏味。因此，在开展多媒体教学的同时，教师必须练好教学基本功，练好板书、讲解的艺术，学会处理各种紧急情况，在不同环境中能正常教学[5]。

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2、AP－PCR的技术方法和优缺点

2．1模板DNA提取和质量检测

模板DNA提取的方法有很多，应根据组织的不同和试验需要确定，但其基本的原理相同，都是通过酶或有机试剂裂解组织使核酸游离出来，然后通过有机溶剂或吸附柱纯化后提取。核酸的浓度和质量可通过UV分光光度计读取D260nm与D280nm的比值和1％琼脂糖凝胶电泳等检测来确定（Mohini等，2011）。目前已有很多商品化的核酸提取试剂盒可供选择，使用方便并可得到较高质量的模板（DNA或cDNA）。

2．2随机引物的选择

随机引物长度通常为10个碱基，GC的含量为60％～80％的寡聚核苷酸链，随机引物不仅核苷酸的排列顺序是随机的，而且所有引物的序列无直接相关性（韦莉萍，2001）。理论上，如果1条随机引物反应可产生x个独立的条带，那么a条随机引物同时参与反应就可得到xa2个条带，但多条引物同时参与反应会相应的增加结果的复杂性和不稳定性（Nandani等，2014）。随机引物虽然可用于所有物种，但并不是所有的随机引物扩增出来的结果都有意义，想要得到较为理想的结果仍需根据研究对象和研究目的进行引物的筛选和反应条件的优化，一般来说选择能产生中等复杂度的图谱的引物（Nandani等，2014）。

2．3AP－PCR扩增条件

AP－PCR也包括变性、退火、延伸的经典PCR过程。变性过程在94℃进行，一般来说预变性3～5min；退火温度在35～38℃，也可根据引物Tm值来确定，一般退火温度比引物Tm值低3～5℃；延伸温度在72℃，在此温度下Taq酶的合成效率约为2000bp／min（Kumari等，2013）。AP－PCR的试验条件、模板的质量和浓度及反应体系中Mg2＋的浓度等都可能对扩增的结果产生影响，想要得到较为理想的试验结果，反应体系的优化和试验操作的标准化是非常重要的（Mohini等，2011；Kumari等，2013；Babu等，2014）。

2．4AP－PCR的优点

AP－PCR延续了PCR的效率高、灵敏度高、样品用量少等优点，同时又兼有自身的优点：①不同种类的生物样品即可使用通用的随机引物进行基因分析（Welsh等，1991）；②可在对研究对象不了解的情况下进行基因多态性分析，从而对研究对象进行遗传分析和分类研究（Williams等，1990；Welsh等，1991）；③对于研究对象DNA样品量有限的情况也适用（Nandani等，2014）；④随机引物易获得，试验成本低，技术容易掌握，除此之外，可对AP－PCR产生的基因条带进行纯化和克隆，以便进一步分析（Ge等，2014）。

2．5AP－PCR的局限性

AP－PCR虽然具有很多独特的优势，但目前仍处于应用的探索阶段，其本身仍有局限性：①AP－PCR技术通常是对显性基因标记进行分析，这就意味着不能将纯合子与杂合子区别开（Babu等，2014）；②由于无明确的目的序列，如果发生扩增条带的缺失就无法得知是什么原因导致的，不利于对扩增结果的分析（Kumari等，2013）；③AP－PCR的结果分析需要专业的带谱分析知识，否则很难从结果中得到有意义的信息；④AP－PCR结果的重复性问题一直是限制其广泛应用的主要原因，由于其结果受DNA模板的质量、反应体系成分和反应条件的变化等因素的影响，其扩增产物的稳定性难以控制（Mohini等，2011）；⑤AP－PCR结果通过凝胶电泳来观察，但迁移率相同的谱带的核苷酸同源型不明等情形易造成干扰，有时电泳迁移率相同的片段并非同源，这就给结果分析带来很多不确定性（Nandani等，2014）。

3、AP－PCR技术研究进展

3．1AP－PCR技术自身的优化

近年来，不断有研究者对AP－PCR技术进行改进和优化，使其更具可操作性、实用性和更广泛的应用领域。刘刚等（2004）对AP－PCR进行了优化，建立了多重随机引物PCR（M－RAPD）技术，M－RAPD通过使用3条组合的随机引物在较高的退火温度下对肺炎链球菌、粪肠球菌和大肠埃希菌耐药菌株等的染色体DNA进行扩增获得了稳定的种株特异性的DNA指纹图，其所提供的基因信息要远多于传统的RAPD技术。Xiong等（2012）对AP－PCR进行了反应程序优化和随机引物中G／（G＋C）不同比例研究，结果表明，反应程序中从退火步骤到延伸步骤的时间延长，温度变化由3℃／s下降到0．3℃／s时，PCR产物条带明显增加，这可能是由于延长温度变化的时间可提高引物与模板结合的稳定性（Fu等，2000），在比较了随机引物中G／（G＋C）不同比例的PCR产物后发现，当G／（G＋C）比例在0．7时PCR产物的条带最多，也更适用于进行AP－PCR反应，因此反应程序的温度变化和随机引物中G／（G＋C）的比例可能也是影响AP－PCR结果的重要因素。Zou等（2003）报道了利用两步AP－PCR方法在微量DNA样品中扩增未知序列DNA并进行克隆。第1步PCR利用29个核苷酸序列的引物进行扩增，Ran5－29（5′－GTTCTACACGAGTCACTGCA－GNNNNNNNTGGC－3′），这一随机引物包括21个已知核苷酸序列部分，7个随机核苷酸序列和1个3′端TGGC的卡子结构，在随机序列前6个核苷酸序列构成了1个PstⅠ位点，其中3′端卡子结构在退火时可与含有GCCA位点结合，保证了随机序列可与GCCA上游的序列匹配，3′端TGGC的卡子结构可使引物与模板的匹配数增加7～11个核苷酸，PstⅠ位点决定PCR产物的长度，并保留1个黏性末端，保证了克隆的顺利进行。第2步PCR使用可与Ran5－29相匹配的19个核苷酸的Fix5－29（5′－GTTCTACACGAGTCACTGC－3′）作为引物，获得的产物进行纯化、克隆分析。结果表明这种策略可检测临床样本DNA的最小量在1pg，克隆灵敏度达到100fg目的DNA模板。这种方法较普通AP－PCR灵敏度更高，适用于样本量极少的临床样品检测。Clem等（2007）在对比了AP－PCR方法的不同扩增策略，在此基础上建立一种快速有效的检测不明病原的多重随机RT－PCR方法。在对血液样本进行过滤后加入了DNase和RNase消化，利用宿主基因对DNase和RNase敏感而衣壳保护的病毒对其不敏感的特点，去除宿主自身基因的污染。其利用单一十聚核苷酸为引物，引物序列为（V8A2）5′－VVVVVVVVAA－3′，V＝A、G或C，3′2个A提供了一个“lock”结构，引物中不含有胸腺嘧啶脱氧核苷酸（T）可避免发生引物二聚体，但这一结构不可避免的会影响引物与模板的结合。试验结果一旦监测到病毒的扩增产物即可通过鸟枪法克隆测序鉴定。这一方法对病毒的出现或重组进行快速监测和鉴定有很强的实用性，其检测灵敏度达到1000克隆／mL，应用这一技术成功从血液样品中检测并获得了3种独立病毒的部分序列。

3．2以AP－PCR为基础衍生的分子生物学技术

随着分子生物学技术的发展，单一的AP－PCR技术已不能满足研究的需要，因此为了克服AP－PCR的一些缺点在其基础上衍生出包括非序列依赖单引物PCR（SISPA）、简并核苷酸引物PCR（DOP－PCR）、DNA扩增指纹印记（DAF）、微卫星引物PCR（MP－PCR）等分子生物学技术。SISPA方法最早是由Reyes等（1991）建立起来的，其以AP－PCR为基础，非对称的单一引物与DNA模板的钝末端直接连接，随后经过若干循环的变性、退火和延伸后，模板的数量得到扩增，后经克隆、测序、分析得到基因序列。Breitbart等（2005）在SISPA的基础上建立了DNase－SISPA联用的方法，增加了样品过滤和DNA酶消化等步骤，成功的从人的血液临床样品中发现了新的病毒基因。Djikeng等（2008）在已有研究基础上进行了新的改进，在样品的处理中加入RNase酶以清除外源RNA的污染如核糖体RNAs。针对有polyA尾的病毒，在反转录过程中加入六聚核苷酸随机引物5′端加入一段病毒特异性引物序列，形成结合引物（FR26RV－N：5′－GCCGGAGCTCTGCAGATATC－NNNNNN－3′），同时加入连接polyT的引物（FR40RV－T：5′－GCCGGAGCTCTGCAGATATC－TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT－3′）以增加对病毒基因3′端的覆盖率。这种在六聚体随机引物连接一保守序列即病毒特异性引物，可增加对病毒基因5′的捕获，从而使SISPA的成功率大大提高。DOP－PCR技术是在AP－PCR基础上建立起来，其引物（DOP－ORI－Xho）由22个核苷酸组成，3′和5′端的特异核苷酸序列和中间的6个核苷酸构成的随机引物组成（Telenius等，1992）。由于随机引物的简并性，每个反应包含着数以千对的引物。DOP－PCR的反应程序包含2个不同的部分，前5个循环引物的3′端至少有12个连续的核苷酸与模板DNA相结合，对引物和模板的匹配度要求不高，在随后的30～40个循环里，扩增错配的几率会逐渐降低。初始反应产物将成为模板，用相同的引物进行扩增，扩增产物通过克隆测序即可获得基因序列（韩焘等，2013）。Csaba等（2002）打破了DOP－PCR只用同一种引物的传统，尝试了5条新的可用于反应的引物，使反应时间由原来的7～8h缩短为2h，缩短了变性过程的时间，在取得理想结果的同时，减少了扩增酶的用量，提高了DOP－PCR的效率和实用性。DAF是一种改进的AP－PCR分析技术，与AP－PCR技术不同的是，DAF使用的引物浓度更高，长度更短（约5～8个碱基），在PCR反应上只包含2个温度的循环，省去了延伸的步骤，使用聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过银染方法观察结果。DAF通常会产生非常复杂的带型，因此它所提供的谱带信息也比AP－PCR大得多（Caetano－Anolles等，1993）。Al－hag等（2007）应用DAF鉴定8株细胞系，研究结果表明，DAF可产生稳定的可供区分的PCR谱带。Ehsan等（2011）应用DAF技术对分离到的25株牛隐孢子虫进行亚型的鉴定，结果发现分离的25个虫株分属于为3个不同的亚型。MP－PCR是以AP－PCR为基础的分子标记技术。Ma等（1996）发现真核生物基因组中存在短串联重复序列，又称微卫星DNA或简单重复序列（simplesequencerepeats，SSR）。真核生物基因组中SSR的分布是随机的，大约每隔10～50kb就有1个SSR。SSR位点最常见是双核苷酸重复，即（CA）n和（TG）n，每个微卫星DNA的核心序列结构相同，重复单位数目10～60个。MP－PCR的引物是与SSR位点互补的二聚或三聚核苷酸重复序列，如其引物序列可是（TA）10或（CGA）6，扩增的是SSR之间不同长度的DNA序列，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率（Dawson等，2013）。MP－PCR克服了AP－PCR引物的不确定性，增加了PCR产物谱带的稳定性和针对性，该技术也已广泛应用于物种分子标记、基因图谱绘制和基因差异性分析等方面（Tian等，2014；Ding等，2014；Wei等，2014）。

3．3AP－PCR与其他分子生物学技术的联用

扩增片段长度多态性（AFLP）技术是将基因组DNA先用限制性内切酶切割，然后将双链接头连接到DN段的末端，接头序列和相邻的限制性位点序列，作为引物结合位点（Rikalainen，2013）。针对AP－PCR结果谱带核苷酸同源性无法确定的缺点，Tan等（2011）将AP－PCR与AFLP进行联用，利用2种方法各自的优势，在对可能含有未知病原的临床样品进行检测，以实验室确诊的登革1型病毒为阳性对照，首先用AP－PCR对有限的样品基因进行随机扩增，然后使用AFLP技术对进行扩增从而得到样品稳定的DNA多态性标记。此方法克服了AP－PCR的同源性不明问题，同时比单独使用的AFLP方法进行检测的灵敏度提高100倍，在临床样品的检测中有很大的实用价值。高通量的测序技术也被称为下一代的测序技术，其与AP－PCR技术的配合使用，让AP－PCR有了更广阔的应用前景。Hang等（2012）首先使用锚定随机引物P17N8（5′－GTTTCCCAGTAGGTCT－CNNNNNNNN－3′）进行RNA反转录，在通过锚定随机引物P17N8和P21（5′－CGCCGTTTCCCAG－TAGGTCTC－3′）同时进行AP－PCR扩增，再通过高通量的测序技术对PCR产物进行测序，对得到的基因序列进行拼接处理，从而得到了奥罗普切病毒和卡拉帕鲁病毒L片段完整基因序列。vanderHeij－den等（2012）利用序列非依赖性病毒基因片段扩增方法与Roche－454测序技术联用，成功的从患急性肝炎病犬的肝脏组织检测出犬Ⅰ型腺病毒基因，研究结果表明AP－PCR技术和下一代的测序技术联合使用的方法在获得病毒完整基因序列和检测病原等方面的实用性。

4、AP－PCR技术在动物医学中的应用

4．1在传染病流行病学和病原遗传学分类中的应用AP－PCR由于其独特的技术优势，在兽医传染病学和病原遗传学分类中已得到广泛应用。Leh－marn等（1992）用此技术对念珠菌属的分离菌进行分析，试验结果表明，同一菌种的不同菌型间呈现出DNA长度的多态性；此带型图在同一菌种的不同菌型间，其相似程度远大于不同种的菌株，这也说明每种菌的随机引物PCR带型极具特征性。Louie等（1996）用2种引物检查15株李斯特单核菌相关流行分离株和36株不相关流行分离株。经扩增后的带型分析，将其分为9个型，每个型中又分有不同的亚型。Zadoks等（2000）在牛乳样品中分离到23株金黄色葡萄球菌，经AP－PCR鉴定1～8株属于Ⅰ型菌，9～20株属于Ⅱ型菌，其余3株分别属于Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型菌。Butler等（2001）应用该技术对3次牛霉形体暴发流行菌株进行了检测，结果表明，发生在其中2个养牛场的流行病原菌具有一致的指纹图，引而具有相同的感染来源，而在另一牛场分离的菌株间则显示了指纹图谱的显著异型性，说明它们具有多个感染来源。王雪敏等（2011）利用多组随机引物对副鸡禽杆菌10个国际标准株、血清C型疫苗株和4个国内分离株进行AP－PCR扩增，结果显示，所有菌株可分为11个谱型，聚为4类。划分的11个谱型可和现有分型方法中的不同亚型一一对应，提示这种方法可区分不同血清亚型。AP－PCR作为寄生虫遗传学分类鉴定的方法已得到广泛应用，克服了传统分类方法难以解决的问题。Macph－eson等（1993）应用AP－PCR技术区分来自不同宿主的7种艾美尔球虫，结果表明选择合适的引物可对7种球虫进行鉴别。张伟信等（2003）应用该技术对鸡柔嫩艾美耳球虫不同地理株的多态性研究，结果表明不同地理株间及同一地理株亲代与子代间均存在DNA多态性差异，其中不同地理株间种内变异程度较大，同一地理株子代与亲代间也发生遗传变异，但变异程度较小。

4．2在病原差异基因分析中的应用

AP－PCR技术进行RNA指纹图谱分析不仅能鉴定基因的表达差异，而且能显示低水平表达的基因差异。Nicho－las（2000）应用此方法鉴定了丝裂霉素C诱导下鼠伤寒沙门氏菌SOS调控基因表达的差异，结果表明，丝裂霉素C诱导后21条基因谱带出现表达水平的上调，其中20个基因片段对应的是可辨识的基因序列，15个基因序列与数据库中基因序列无同源性，被确定为新的表达序列，6个基因片段与SOS基因编码的调控蛋白有关。Diana等（2005）应用AP－PCR技术对苄硝唑作用下克氏锥虫基因表达差异多态性的研究，结果发现对苄硝唑敏感和对苄硝唑抵抗种群之间系统指纹图谱存在一定的差异，其中可能存在克氏锥虫对苄硝唑拥有抗性的表达机制，虽然抗性种群在苄硝唑作用下系统指纹图谱没有明显的变化，但敏感种群间的系统指纹图谱却有着明显的变化。AP－PCR技术为鉴定基因差异提供了一种快速有效的方法。

4．3在未知病原检测中的应用

病原微生物引起的动物疫病呈现出复杂性和非典型性等特征，普通的临床诊断方法很难确定病原的种类，这种情况下使用传统PCR方法检测临床样品的效率不高，而且存在漏检可能。AP－PCR技术提供了一个更为全面、快速和灵活的检测方法，对病原微生物进行全基因组的检测（姚四新等，2010）。Djikeng等（2008）使用DNase－SISPA技术在牛的血清中分离到牛鼻病毒基因。Clem等（2007）利用改进的AP－PCR方法，从血液样品中检测并获得了3种独立病毒的部分序列，即腺病毒17、卡萨奇病毒A7和呼吸道合包体病毒B。周斌等（2004）在研究鸭病毒性肝炎病毒时，发现其种毒可能受到污染，随后挑选4条随机引物对其进行反转录PCR扩增，共扩增出3条基因片段。克隆测序的结果表明，与禽腺病毒（鸡胚致死孤儿病毒）基因组部分序列同源性分别高达99．5％、99．6％和99．5％，从而确定了鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒受到禽腺病毒的污染。黄欣梅等（2011）采用DNase－SISPA对导致鸭、鹅产蛋下降的病原基因进行扩增，并在此基础上设计了1对特异性引物成功的扩增出新型鹅黄病毒JS804毒株基因。

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2太赫兹在生物医学工程领域的应用

太赫兹的上述特性使其在生物医学工程的各个方面有着诱人的应用前景。其应用主要有以下几个方面:太赫兹生化检测、太赫兹医学成像诊断、太赫兹组织检测、太赫兹治疗以及太赫兹医学通信。

2．1太赫兹生化检测

利用太赫兹波对生物分子的灵敏度和特异性，将太赫兹技术用于研究生物分子的结构和功能信息，可在分子层面上为疾病的诊断和治疗提供理论依据。太赫兹生化检测主要是对化学及生物大分子的检测，太赫兹波能够用来研究如范德华力或者分子间氢键作用力等生物分子间相邻分子的弱作用力。太赫兹波对脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid，DNA)构形和构象的变化非常敏感，也可以通过太赫兹光谱进行基因分析或无标记探测。许多学者都开展了这方面的研究。Grant等于1978年研究了太赫兹与氨基酸溶液的相互作用，通过分析证实了这种作用是介于分子振动和转动模式之间的一种作用。Kutteruf等用太赫兹光谱技术对固态短链肽序列进行了研究，研究表明在1～15THz光谱范围内包含了体系的很多光谱和结构信息，如分子固相结构和与序列相关的分子信息等。Arora等采用太赫兹时域光谱技术，在水相中对通过聚合酶链式反应得到的DNA样品进行了无标记定量检测。Brucherseifer等通过时间分辨太赫兹技术证明了复数折射率取决于DNA的结合状态。太赫兹生化检测方面的研究尚处于起步阶段，还有待加强，尤其是对不同生物大分子的太赫兹光谱特性建立相应的特征谱库是一项庞大而艰辛的工作，需要生化领域的学者加强相关的研究工作。

2．2太赫兹医学成像诊断

太赫兹成像技术是太赫兹科学与技术中最具发展前景的方向之一。太赫兹成像作为一种新颖的成像方式在医学上的应用近年来备受青睐。太赫兹波在医学研究中具有独特的优越性:对细胞间质水有很高的敏感性;对人体无害;空间分辨率高，可达几十微米，能够很清晰的看到一些病变组织的病灶，结合一些微结构器件可以得到高品质的图像。太赫兹成像的原理是将太赫兹波透过成像样本后，其包含了样品的复介电常数的空间分布信息强度和相位信息，将这些信息保存下来并进行分析处理就可以得到样品的图像。从1995年Hu和Nuss首次提出逐点扫描式太赫兹时域光谱成像技术以来，一系列新的太赫兹成像技术相继被提出，如太赫兹实时成像、太赫兹层析成像和太赫兹分子成像等。2002年Woodward等首先使用了太赫兹脉冲成像技术对基底细胞癌开展了体内与体外的研究，利用不同组织对太赫兹波的吸收特性不同来区分健康组织和癌变组织。2007年Enatsu等利用THz－TDS系统对石蜡封装的肝癌样品开展了研究，在1．5THz频率处选择折射率和吸收系数进行成像，得出癌变组织的密度小于健康组织，对太赫兹的折射率和吸收系数较小的结论。2008年Taylor等在直接检测的基础上使用反射脉冲太赫兹波成像系统对猪皮肤烧伤样本成像，得到了高分辨率的图像。2011年MiuraY等利用透射式成像技术，证明了在3．6THz频率处对肝癌组织成像对比度较为显著。目前太赫兹射线图像分析的关键在于提高分析速度，提高太赫兹射线系统的性能(如低成本和便携性)，加强相关图像及信号处理技术如小波变换技术的研究。此外，随着THz3－D(三维)立体成像技术的发展，在不久的将来在医疗中利用TCT(THz层析成像)替代现在的XCT(X射线层析成像)将成为可能。

2．3太赫兹组织检测

太赫兹波的光子能量较低，是X射线光子能量的1%，此能量值低于各种化学键的键能。在太赫兹辐射下，被检物质不会因电离而破坏，因此非常适用于针对人体或其他生物样品的活体检查。另外，水对太赫兹辐射有极强的吸收，所以该辐射不会穿透人体的皮肤，对人体是非常安全的。Bennett等将反射式太赫兹成像和光谱技术应用到眼科研究中，研究发现太赫兹反射率与角膜含水量近似成正比，反射率随频率的增大而单调递减。Png等使用太赫兹光谱鉴别正常和患病的脑组织样本。Sim等采用太赫兹时域光谱技术对人牙齿的珐琅质和牙本质的特性进行了研究，发现湿润样本对太赫兹的吸收率高于干燥样本，研究为硬组织临床应用提供了重要信息。Wallace等对基底细胞癌18例体外样本和5例活体样本进行了太赫兹脉冲成像，研究表明，癌变组织与正常组织的太赫兹谱图性质间存在差异。对于太赫兹组织检测，首先要加强对于病理组织和正常生理组织的太赫兹光谱和太赫兹图像的特征识别的研究;其次要深入研究不同组织不同水分含量对太赫兹波的吸收作用;此外，还要探索太赫兹活体组织检测技术。

2．4太赫兹治疗

太赫兹虽然光子能量很低，但作为一种电磁辐射，仍具有辐射效应，可以为疾病治疗提供理论依据。2002年Hadjiloucas等研究了酵母细胞在太赫兹辐射下的生长率问题，辐射参数为0．2～0．35THz和5．8mW/cm2，辐射时间30～150min不等，实验表明太赫兹辐射能够促进细胞生长，并且呈现出了一定的统计规律。2005年，Ostrovskiy等预测太赫兹辐射可能会加快烧伤修复，为证实假设，他们分别对表面烧伤和深度烧伤的病人进行太赫兹辐射，辐射参数为0．15THz和0．03mW/cm2，每天进行7～10次治疗，每次15min，结果表明太赫兹辐射能够加速外皮形成，缩短了皮肤的修复时间。2008年Kirichuck等首次对活体大鼠展开太赫兹生物效应的研究，他们认为太赫兹辐射能够引起血小板的功能活动，并且与性别有关。Androvov和Kirichuk等采集了健康人和患有心绞痛的病人的全血，一组进行太赫兹辐射，另一组作为参照组，辐射参数为0．24THz和1mW/cm2，辐射持续时间为15min，实验结果为太赫兹辐射组血黏度下降，红细胞变形能力增加。2010年，Gerald等对人类皮肤的成纤维细胞展开了研究，他们将样品置于温度可控的箱体中，用2．52THz的气体激光器进行时间不等的照射，并用传统的MTT法检测照射后细胞活性，研究表明2．52THz的辐射对哺乳动物的细胞热效应显著，因此可以用太赫兹热效应预测传统的热损伤模型。目前，用于涉及太赫兹治疗的研究实验多为动物实验，相关的临床试验还很有限，距离现实可用的临床治疗设备还有很长的路要走。

2．5太赫兹医学通信

随着医院信息系统的不断完善，医学诊断数据的丰富，病历信息数据库的不断增大，医生在诊断病人病情的时候不但要根据现有的检测诊断数据，还要参考病人的以往病历，而现有的信息交互方式已经逐渐无法满足这庞大的医学信息数据的传输。太赫兹技术的出现，恰好可以解决这方面的困境。太赫兹通讯技术与微波通信相比太赫兹通讯的优势在于具有传输的容量大，频段比微波通信高出l至4个数量级，可提供高达10GB/s的无线传输速率;波束更窄，方向性更好;具有更好的保密性及抗干扰能力;由于太赫兹波波长相对更短，在完成同样功能的情况下，天线的尺寸可以做得更小，其他的系统结构也可以做得更加简单、经济。太赫兹通讯技术与光通信相比其优势在于光子能量低，大概是光子能量的1/40，能量效率更高;具有很好的穿透沙尘、烟雾的能力，可以在更加恶略的环境下保证通信的可靠性。这对于极端环境下的医疗通信如战地医院、边远山区医疗救助等条件下的通信具有无可比拟的优势。因此，发展太赫兹通讯技术对于医院信息化建设乃至远程医疗的发展都将是一个极大的助力。目前，太赫兹通信在医学中的应用尚无相关报道，主要是因为太赫兹通信技术本身尚处于初级阶段，但是相关的试验系统已经有所发展。2004年，KleineOT等首次采用室温半导体太赫兹调制器通过太赫兹通信信道发送声音信号，用经改进的常规太赫兹时域光谱装置，在75MHz宽带的太赫兹脉冲序列上传送25kHz的信号。同年，LiuTA等利用光导开关，实现了模拟音频信号通信实验。2004年，日本NTT公司的T．Nagatsuma等搭建了120GHz的亚太赫兹无线通信系统，实现了10Gb/s的数据率。2005年，Mueller等描述了采用太赫兹波源和Schottky肖特基二极管调制器和探测器的宽带宽通信数据链路。2008年，Braun-schweig太赫兹通信实验室在0．3THz频率上成功实现6MHz带宽模拟彩基带信号的传输，实验距离超过22m。太赫兹通信技术发展的研究趋势在于以下几个方面:一是继续研究高功率的太赫兹源;二是加强太赫兹波传输性能的研究;三是要研究合适太赫兹信道传输的调制技术和调制器件;最后还要进一步优化高灵敏的太赫兹探测技术。此外，还要开展太赫兹通信技术在医院信息化建设中的应用的前瞻性研究，为将来能够成熟应用打下基础。