故乡的小路模板(10篇)

导言：作为写作爱好者，不可错过为您精心挑选的10篇故乡的小路，它们将为您的写作提供全新的视角，我们衷心期待您的阅读，并希望这些内容能为您提供灵感和参考。

篇1

那样迷人，浪漫，令人陶醉，但初夏也有它旖旎的风光。那就是在鸟语虫唱中，迎来了南归的燕子，以及小路上三三两两的游人。

每到这时候，也正是五一节假日的到来。劳累了几个日日夜夜的姑娘大姐们盼星星盼月亮，终于等到难得的三天假日，他们可以放下那份沉重的工作，让疲惫的心灵得到放松，来到野外，呼吸呼吸新鲜空气，活动活动筋骨。踏踏软绵绵的草地，采一朵还在开放的野花。，尽情地享受野外的快乐，让身心仿佛又回到童年那种无拘无束的时代。

每到这时候也正是家乡的樱桃成熟的时节。野鸡产卵的高峰期，和野天麻，野蘑菇长出的时节。

走在回家的小路上，绿荫蔽日。那一颗颗樱桃像一粒粒红色的宝石，又像一颗颗玲珑剔透的珍珠点缀在一片绿如翡翠的树叶里，香气诱人，颜色鲜红欲滴。那密密麻麻的又亮又透的樱桃压弯了樱桃树细长的枝条。伸手摘一颗含在嘴里，又香又甜，甜润润的，那天然的甜味儿直入心脾，仿佛心里开了一朵花。索性停下脚步，做一只馋猴来他一顿胡吃海吃。那一丝丝的甜味儿勾起你肚子里的馋虫，你不吃饱不愿意离开。等你感到撑得难受，打着饱嗝，吸口气，才感到牙齿又松又软，原来樱桃甜中还带着酸味儿，因为吃得太多，牙齿被它酸倒了。实在吃不了了，吐出来的唾沫都是鲜红鲜红的。不过，它们太可爱了，你不可能也不愿意就这样就离开。为了不留遗憾，你不得不张开你的衣服口袋，一颗一颗地往口袋里装。只装到身上所有的口袋都满满的，实在不能再装了，你才恋恋不舍地离去。也许有人会问：你白摘人家的樱桃，难道就不怕别人骂吗？答曰：非也，非也。家乡人自古就有热情好客的历史，你摘他家的樱桃，说明你喜欢吃樱桃，认识到栽树的意义。栽种樱桃树的人认为，他种樱桃树结樱桃就是让人吃的。有人吃他家的樱桃，说明他给别人造了福。只要你不把他家的树弄断。他都是乐意的。就是他看到了，他也不会指责你说你偷他家的樱桃，相反，他还会帮你摘。还会招呼你到他家做客，请你吃上香喷喷的腊肉，以及当地的拿手绝菜——凉拌灰汗菜。蛋炒恶鸡婆（一种野生植物，味道鲜美）。听我爷爷说，在我的家乡居住的都是原来年年迁徙的佃户，小贩。因为经常在外做买卖受冻受累，受渴。所以养成了在路边种瓜果的习惯，便于招待远来的客人，当然他们也会受到别人的招待。他们认为“四海之内皆兄弟”。当然，也偶尔而遇到挑着满满一筐樱桃上级上去卖的老乡，不过在路上你休想买到一粒，因为他们在路上从来不收钱的，如果你想吃，那些挑着担儿的都会随时给你抓上一把。

如果这时你走在有光滑黄石板的土坡上，那可是你的机会来了。只要你留意，就会看到满地一大片绿茸茸的地耳，这可是上等好东西。这可是上古的蕨类植物留下的遗迹。营养价值丰富，可口性极好，比野生木耳强多了。你只需要用筐子采起来，洗干净，和上腊肉芹菜等，就可烹出这道大菜，这可是世间少有的极品，它可养颜，让你越活越年轻。

装着采好的地耳，尝着可口的樱桃，路过一片浅草地。你稍不留意，从草丛里扑踏飞出一只野鸡，撞在你的额头上，弄得你打个狗吃屎。野鸡却嘎的一声飞上了天空。你不由得搜寻野鸡飞起的方向。原来草丛里藏着一窝圆滚滚的鸟蛋，蛋壳浅灰浅灰的。一数，原来竟有八九个，真是做了狗屎运。

怀里揣着野鸡蛋，心里感谢上苍的垂怜，让自己这么辛运，心想总不会再有什么好东西被自己发现了吧？可有时候就是很意外。

篇2

昔日，我向往的小路变成楼房，昔日，我喜爱的树林变成了一些不法分子栖息之地，她成了“罪人”。

是他们，把她给沾污了，是他们把昨天的她变成了今日的她。是他……

同样是人，怎么就差这么多呢？我甚至分不清好人和坏人，就像搞不清小路与楼房的关系。

篇3

夏天的小路我最喜欢了。路旁姹紫嫣红的，还有阵阵芳香。在赤日炎炎的夏日，我最喜欢找几个伙伴在那曲折的小路上奔驰，我们欢呼，我们奔跑，在童话王国的小路上尽情释放童年的欢乐。

秋天的小路饱含诗意，片片树叶飘飘洒洒的落下，我经常去那里采集树叶，放在书里，每一页放一片，过一阵子，拿书便发出清新的味道，即使到了冬天，也能回味秋的芳香。

说到冬天更是别有一番情趣。一入冬，雪就挥挥洒洒的飘落下来，花儿怕冷，去冬眠了，柳树却不怕，冰冷的雪非常感动，用自己的身躯给它做衣服。那条路比较偏僻，一般很少有车经过，我们就在那打雪仗，堆雪人……，非常有意思。

篇4

初秋的阳光下,顺着土路离开泸沽湖,向田野深处走去,路旁几座稀稀拉拉的矮房与湖边热闹喧嚣的景象恰成对比。远远可以看到土坡上一群孩子在欢快地嬉戏。加紧脚步爬上土坡,小路延伸进一个盛放着金盏花和格桑花的花园,路边一块端正放置的青石桩上刻着“达祖小学”4个大字――我们到了。

看到学校的第一眼,记者不禁在心中惊叹,这恐怕是我见过的最美丽的乡村小学!

沿着花园边碎石铺就的小径走进学校,呈现于眼前的是一个没有围墙,没有紧闭的大门,坐落在花海中的学校。学校的花园左边是一个木凉亭,刚才远远看到的那七八个嬉闹的孩子,此时正静静坐在凉亭里由老师帮他们练习听写;花园的正前方和右边是两栋两层楼高的木制小楼,质朴的原始木料没有多余的装饰,却充满了童话的味道,隐约可见一楼教室里,学生们摇摇晃晃的脑袋和讲台上教师的身影。这时恰是正午,右边小楼旁的平房前飘出阵阵炊烟,那是一间干净整洁的厨房,食堂师傅正忙得不亦乐乎。

阳光晒下来,照进这个恍如世外桃源般的所在,花香怡人,书声朗朗,四周的一切都笼罩着一种温馨的气氛……

齐备的硬件设施和开阔的办学视野

初进达祖小学时,记者就被这里世外桃源般的怡人环境深深吸引,而接下来的采访中,记者更发现了这所小学的诸多特别之处。

转过花园前的木楼,后面是教工宿舍,同样是颇具民族特色的二层小楼,两位老师正在阳台上忙碌着,看到记者走进来便微笑着打了个招呼。教师宿舍后面是平整的操场,高出周边地势一圈,站在这里,一抬头便能够俯瞰美丽的泸沽湖全景。学校最后面依山而立的是一排平房教室,孩子们正在上课。

达祖小学的环境和教学条件之“好”让记者很意外,当然,这种“好”不是豪华,而是对学生学习的需要考虑得很周到:学前班里的教室里有成套的连环画;图书室的书也保存得很好,有些旧书还包上了封皮;电脑室的电脑虽有些旧,但在这样一个偏僻的乡村学校已属难得;除了教室,学校里还设有电教室、淋浴室、医疗室、厨房等……

此时,下课铃响了,伴随着悦耳的童谣铃声,孩子们三三两两跑出教室,在花园里追逐,在凉亭里嬉戏。此时,这个地方仿佛不仅是一所学校,还是一个儿童乐园。

孩子们虽然很害羞,却依然好奇地走近记者,于是我 “逮住”了三年级的纳西族女孩毛永青,和她聊起天来。言谈中随意翻看她的课程表,发现在常规的语文、数学课程之外,学校还设有英语、美术、音乐、生命与安全、课外拓展、东巴文等丰富的副科。毛永青说她最喜欢上美术课和东巴文课,因为美术课都是到花园里或者泸沽湖边进行,而东巴文课能够学到很多有趣的纳西族儿歌。

一所普通的乡村小学,办学的视野竟有如此开阔,令记者又多了几分意外。

一所乡村小学的“前世今生”

回到阳光下的花园,恰好遇到学校的现任管理者林子闳,这是一个来自宝岛台湾的26岁小伙子,有着黝黑的皮肤和高大的体格,随性的穿着与整个校园明快的节奏很搭配。几位老师下课后也来到花园里小坐,言谈间,记者逐渐了解到了达祖小学的“前世今生”。

达祖小学所在的达祖村是泸沽湖边摩梭人聚居区里的一个纳西族小聚落,祖辈曾是明代丽江木府的卫兵,因征战迁徙于此。经过年代久远的民族交流和融合,这个外来的异乡文化总算在泸沽湖畔争得了一席之地。然而达祖村的教育、医疗、农业、经济发展等方面始终相对落后。全村唯一的一所村小也在2000年便遭废弃,荒废达4年之久。2004年,以李南阳老先生为首的台湾爱心团体在寻访公益项目的过程中来到这里,他们为改善达组村的文化及生存条件做了很多努力,而第一件大实事,便是为达祖村重建达祖小学。

重建的过程是艰辛的。学校的语文老师、土生土长的达祖村人王成告诉记者,刚开始,村民对这群外地人为何平白无故地为村子做事感到不理解、不信任,到后来,看到李老先生真的募来了资金,实打实地要为村子重建学校,他们才相信这世上真有这样的好事。“重建这所学校使深受教育落后之苦的达祖村人看到了希望。全村人有力的出力、有木材的出木材,连孩子也来工地帮忙搬砖,我还记得2004年的除夕,全村男女老少都是在学校施工工地上过的”。回忆起当时的情景,王成的眼神里充满了感恩。

但是重建工作远不止于此。在李南阳老先生的观念中,学校的重建决不仅仅是还原一个封闭的传授知识的空间,更应该是塑造一个能够全面培养孩子视野和爱好的开放式场所。于是在学校设立初期,除了逐渐完善硬件设施之外,学校的设计者们还安排了丰富多彩的课程。为了更好地保存纳西族人的民族记忆,还特意开设了东巴文课程,教孩子们学习纳西族远祖们的歌词和文字。

此外,达祖小学的所有学生还得到了台湾爱心团体的资助,孩子们在这里上学所使用的一切用具,包括书包、校服等全部由学校免费提供,当然学费也是全免。学校鼓励当地所有的孩子来这里上学,没有费用和家庭条件的限制。

希望从这里生长

重建之初,达祖小学仅有3个年级,到如今,已经涵盖一到五年级及学前班,学生人数从二三十人增加到了124人。除了本村的孩子外,附近村子的不少家长也将孩子送到这里读书。王成骄傲地说:“达祖小学的学生成绩拿到泸沽湖镇上比,也是很优秀的。”

而对于更多的达祖村民来说,达祖小学的意义已经不仅仅是让孩子读书那么简单了。达祖村卫生条件差,而学校的淋浴室免费向村民开放。达祖小学设立的医务室一度曾是达祖村当地唯一的医疗机构,它为所有的村民免费诊疗,药品只收取成本价。为了改变当地落后的原始耕作方式,学校建了污水处理发酵池,收集起经过生物酶处理后,已经变成有机肥的生活污水,教给村民们灌溉植物,以提高收成。此外,学校建成后还免费开设了一年的扫盲班,帮助30岁以上的村民识字。在自身发展的同时,达祖小学还按照重建者的意愿,设立了爱心基金会,承担起了为更多的学生提供助学金和一帮一助学活动的责任,并把帮扶范围延伸到周边一些更为贫困的村落和家庭,资助对象从小学生到大学生都有涉及……

近年来,达祖小学一直受到外界的关注和支持。林子闳说每年这里都会收到很多爱心捐赠,学校的9名老师中,就有5名是通过网络了解到达祖小学的情况而主动申请前来的志愿者。

离开学校时,记者看到门口印着学校大名的那方端正的青石桩后面刻着“行胜于言”4个字――这是学校的校训。是的,正因为有那么多人身体力行去去努力,达祖小学才能在这片鲜花环绕的土地上,长出一片希望。

一群追逐梦想的志愿者

达祖小学9名老师中,有 5名是外来的支教老师,他们来自异地,却是达祖小学这个美丽梦想最坚定的实践者。

24岁的云南人密庆泉在这里教孩子英语和美术,至今已两年了,他说在这里待着“很轻松,很纯净,又充满希望”。

篇5

李小璐1982年9月30日出生于北京,童年在八一电影制片厂的大院里度过。父亲李丹阳是八一电影制片厂的导演兼演员,曾是演员的母亲张伟欣现任美国一家跨国公司执行董事。在家庭艺术氛围的影响下,年幼的李小璐就表现出对电影浓厚的兴趣。1984年,年仅两岁的她被妈妈抱到电影拍摄现场,当灯光亮起,摄影机开始转动时,她兴奋得手舞足蹈。

她第一次站在镜头前,是拍摄一部宣传片,片中正需要一个小女孩。一天,导演无意中看到了乖巧可爱的李小璐,于是,便找到她的爸爸。开拍那天,爸爸赶到现场,看到女儿正专心地听导演说戏,这让他觉得,女儿将来肯定会成为一名好演员。

3岁时,李小璐和妈妈两次合作,参演了电视剧《孔子的青少年时代》,电影《我只流三次泪》。当年,仅儿童剧她就拍了好几部,成为名噪一时的小童星。对于童年时代的李小璐来说,和其他小朋友一样牵着爸爸妈妈的手逛公园是件奢侈的事,做导演的爸爸和做演员的妈妈常年在外,她只有留在爷爷奶奶身边,一家人聚少离多。和妈妈共同拍戏的经历成了李小璐最美好的回忆。

在李小璐4岁时,演艺事业如日中天的妈妈弃艺从商,在女儿恋恋不舍的目光中登上了去美国的飞机。1995年,李小璐远赴美国读书,分别9年的母女得以团聚,与母亲长期分离造成的陌生感和语言障碍让性格内向的她很难适应。“刚开始我对妈妈很客气,但很快我们就亲切起来,她每天接送我上学,想补偿以前不在我身边的遗憾。一天,我和同学们用英语聊天,妈妈听了,走过来对我说:‘不会说就别说了。’当时我的脸一下子红到了耳朵根。后来,我利用暑假努力学习口语。如果没有妈妈的‘激将法’,我的进步也不会那么快。我们家家教特别严,大人很少当面夸奖我,尽管父母在外面提到我时是骄傲的。这一点,我也是长大以后才明白的。”

李小璐回忆说:“当我提出要回国拍戏的时候,妈妈并不赞同。于是我和妈妈达成协定,如果25岁前表演成绩平平,就回美国读书。直到今天,我也没有认为自己是个明星,我只是个演员,一个以作品说话的演员。”

把妈妈当“新人”来看待,在拍摄间隙给妈妈说戏

1998年,李小璐出演了陈冲执导的电影《天浴》,第一次真正担任女主角。由于在该片中的出色表现,李小璐摘取了第35届台湾“金马奖”最佳女主角的桂冠,她也是历届“金马奖”得主中最年轻的影后,那一年,她17岁。尽管李小璐3岁起就开始拍戏,但《天浴》才是她接拍的第一部真正意义上的电影,自那之后李小璐便开始了真正忙碌的生活。李小璐最大的愿望之一是拍一部轰动性的电影,在她眼里,《天浴》只是一部艺术片, 远远达不到自己心中的要求。回想起来,李小璐感慨万千:“拍得太苦了,现在想起来,都不知道怎么熬过来的。”

《天浴》中有一场戏,李小璐要躺在雪地上。当地的雪不够厚,剧组又在地上铺了许多假雪。假雪是由石灰、胶水和尿素等组成的。她穿着军大衣和毛衣躺在雪地里,就觉得浑身特别痒,收工回来一看,整个后背都过敏了,又疼又痒,但她咬紧牙关坚持了下来。在饱尝拍戏的苦头后,她才知道做一个演员并不容易。李小璐对于当初获得“金马奖”的记忆已经很模糊了,但每次回家,看到橱窗里摆着的奖杯时,最大的感触就是那时候的自己好年轻啊!

观众真正开始熟悉李小璐是通过两部电视剧――《都是天使惹的祸》和《青春的童话》。《青春的童话》中,有一场戏是夏戏冬拍,让她饱受了严寒之苦。印象最深的是,有一场和男主角在雨中的吻戏。当时北京的气温只有零下10℃,当人造雨淋在穿着单薄夏衣的李小璐身上时,她不由得哆嗦起来,好不容易拍完了,导演却说:“没演好,重拍。”李小璐喝了一大口白酒接着拍,终于听到导演满意地说:“过!”而这时,她的嘴唇早已因为寒冷和酒精的刺激肿了起来。

2004年,李小璐接拍了电视剧《豪侠》。一天,刚拍了一个镜头,她就感到腰部疼痛,开始没有在意,后来疼痛越来越剧烈,送到医院一检查,医生说:“必须立即住院!”医生还批评陪同的李小璐爸爸:“你这家长怎么当的?孩子都病成这样才来。”由于惦记着拍戏,第二天上午她就偷偷地跑回了剧组,晚上回医院输液。

在电影《冈拉梅朵》的拍摄过程中,由于外景地在,其间又要出席在三亚的电影节,巨大的海拔差异使她出现了严重的高原反应。戏拍了一个月,李小璐有20多天住在高危病房里,只能靠输液和吸氧维持,手上的血管几乎被扎烂了,请来儿科的护士才勉强把针扎进去,最终,李小璐还是因为体力不支告别了这部电影。

2006年,电视剧《奋斗》一度成为人们谈论的焦点,片中,李小璐饰演的杨晓芸也几乎成了她的代名词。去公园时,晨练的老奶奶看到李小璐都会说:“这不是杨晓芸吗?”她却说杨晓芸并不像自己,开拍之初还向导演申请换演更像自己的夏琳。李小璐说:“其实我的性格和杨晓芸完全相反,杨晓芸总是希望自己的生活轰轰烈烈,我却是个与世无争的人,有时一顿好吃的就能让我特别开心。”

细心的观众会发现,剧中杨晓芸和陆涛的妈妈长得非常像,出演陆涛妈妈的正是李小璐的母亲张伟欣。拍摄过程中,李小璐坦言从来不去现场看妈妈的表演,她说:“这样我会很紧张,不过在家我会把妈妈的镜头挑出来一遍又一遍地看。”妈妈给李小璐很多艺术灵感,但李小璐也把妈妈当成“新人”来看待。在拍摄的间隙还会找机会给妈妈说戏,而妈妈也总是微笑着倾听她的意见。李小璐笑称现在的自己在表演上比妈妈更专业,所以,她妈妈也会欣然地接受女儿的“指导”。

她始终认为,幸福就是让你对人生有一种满足感

2007年年初,李小璐收到了一份珍贵的礼物――好莱坞影片《异能》剧组正式与她签约。在该片中,李小璐饰演了一个小角色,等待13个小时只为拍两个镜头。李小璐说,在摄制现场,各种口音的英语混杂在一起,往往要看嘴形才知道对方在说什么,这让她觉得很好玩儿。

继青春励志片《奋斗》之后,李小璐再次成为粉丝们追逐的焦点,仿佛她的演艺路线也在逐渐转变。李小璐曾透露自己非常喜欢塑造职场白领这类角色,今后也希望逐渐从清纯路线向知识型女性路线转变。

2008年以后,李小璐先后主演了影片《夜店》、《等着你回来》、《树顶上的恋人》。在《夜店》这部喜剧片中,李小璐饰演超市店员,与徐峥、乔任梁一起,演绎了一个惊险刺激又笑料不断的故事。李小璐说:“这部片子大部分戏是在室内拍摄的,感觉更像是在演话剧。我们尝试了很多新的拍摄方法,有一场戏连摄像机都不是固定的,而是绑在每个演员身上。整个剧组就像一个大家庭,工作之余,还会聚在一起做饭。故事发生在超市,一开始大家还很胆小,后来经不起超市里食物的诱惑,偷偷把这些当道具的食物拿来涮火锅,害得道具师傅像看小偷一样盯着我们。”

虽然李小璐名气渐大,但她始终让自己保持一个普通女孩的心情。不拍戏的时候,她会和好友去西单逛街,在那里可以寻觅到很多好吃、好玩的东西。为了买一串烤鱿鱼,她能在人潮密集的华威大厦排上10分钟的队,然后找个地方,美美地吃一顿。

篇6

摘 要：［目的］探讨辛伐他汀对体外甲状旁腺素相关肽（PTHrP）诱导小鼠的破骨细胞骨吸收功能的作用及其小鼠骨代谢的影响。［方法］采用PTHrP诱导小鼠骨髓细胞培养破骨细胞和小鼠颅盖骨培养体系，检测辛伐他汀作用8 d后破骨细胞骨吸收陷窝和培养上清钙的变化；检测小鼠颅盖骨培养上清碱性磷酸酶和钙含量，组织学观察小鼠颅盖骨形态学变化。［结果］辛伐他汀体外可明显抑制PTHrP诱导小鼠的破骨细胞骨吸收陷窝的形成及培养上清钙的释放，辛伐他汀体外可增强小鼠颅盖骨培养上清碱性磷酸酶的活性，组织学观察到辛伐他汀使小鼠颅盖骨矿化增强。［结论］辛伐他汀体外不仅可促进小鼠颅盖骨的成骨活性，并且可明显抑制PTHrP诱导小鼠的破骨细胞骨吸收功能，对骨吸收性疾病有着重要的防治作用。

关键词：辛伐他汀; 破骨细胞; 骨吸收; 甲状旁腺素相关肽（PTHrP）

Abstract：［Objective］To study the effect of simvastatin in the osteoclastic resorption stimulated by PTHrP and murine bone anabolism in vitro［Method］The bone resorption activities of the osteoclast stimulated by PTHrP were evaluated after treatment with simvastatin for 8 days in vitro;the concentration of Ca2+ in the supernatant was also detected by atomic absorption spectrometerThe concentration of ALP and Ca2+ of the supematant in murine calvarial organ culture were detectedThe histology of calvaria was observed［Result］Simvastatin greatly inhibited the osteoclastic bone resorption stimulated by PTHrP in vitro and reduced the release of Ca2+Simvastatin increased the ALP activities and bone mineralization of murines calvarial organ culture in vitro［Conclusion］Simvastatin may inhibit the osteoclasric resorption stimulated by PTHrP and promote osteoblast differentiation and bone mineralization in vitro，thus play an important role in the prevention and treatment of osteoporosis

Key words：Simvastatin; Osteoclast; Bone resorption; PTHrP

他汀类药物由于抑制了胆固醇代谢中甲羟戊酸途径的HMGCoA（3Hydroxy3MethylglutarylCoenzyme A）还原酶活性，具有明显的降血脂作用，目前是一种广泛用于临床的降脂药。1999年Mundy等〔1〕在筛选了3万多种化合物后发现，他汀类药物是唯一能促进成骨细胞BMP2荧光报告基因活性的物质。进一步的研究表明他汀类药物可促进成骨细胞系MC3T3E1及大鼠骨髓细胞的碱性磷酸酶活性和骨质的矿化〔2、3〕，并且可促进骨质疏松大鼠新生骨的形成〔4〕。在正常生理条件下骨吸收与骨形成处于动态平衡状态中，一旦这种平衡被打破将可能会导致骨质疏松的发生。破骨细胞是骨吸收的功能细胞，其吸收功能的亢进与活跃在骨质疏松中具有重要的意义。尽管以往有研究表明，他汀类药物可能通过促进成骨细胞BMP2基因的表达来促进骨生成，但其对正常成熟破骨细胞的骨吸收功能影响尚未见有报道。本研究采用体外PTHrP诱导骨髓细胞形成破骨细胞的培养体系，以及小鼠颅盖骨骨培养，探讨辛伐他汀对破骨细胞性骨吸收及其小鼠骨代谢的影响，为阐明他汀类药物对骨质疏松的防治作用提供新的理论依据。

1 材料和方法

11 主要试剂和动物

辛伐他汀原料药（simvastatin），由山东鲁南制药集团提供（生产批号：050502）。甲状旁腺素相关肽（PTHrP）：美国Cytolab公司；αMEM培养基，美国Gibco公司；胎牛血清（FCS），Hycolon公司；抗酒石炭酸染色试剂盒，日本Hokudo株式会社。BalB／C小鼠（清洁级）：由第四军医大学动物实验中心提供。

12 方 法

121 骨薄片的制作

新鲜牛股骨干皮质骨25％戊二醛固定，以低速锯式切片机横切，手锯修成1 cm×1 cm×1 cm大小，leica硬组织切片机切成30 μm厚度的薄片，100目木砂纸上打磨，梯度酒精脱水，稀氨水超声波清洗10 min×3次，钴60照射消毒。

122 破骨细胞分离及培养

出生4～6周雄性的Balb／C小鼠，脱颈处死后，750 ml／L乙醇浸泡5 min。取双侧股骨和胫骨，清除软组织和两端骨骺，用不含血清的αMEM培养液冲洗髓腔，收集骨髓细胞并用培养液洗涤两次，然后将细胞重悬浮于含100 ml／L胎牛血清的αMEM培养液中，细胞计数后，配成15×109 L-1的细胞悬液，24孔细胞培养板，每孔2 ml，在50 ml／L CO2的37 ℃孵箱中培养。每2 d更换1次培养液，每次换液时，移去1ml旧的培养液，补充等量新的培养液。培养6~8 d。

123 辛伐他汀的添加

共分4组：阳性对照组，在换培养液时每培养孔中加入45 ng／ml PTHrP：实验组每培养孔在换培养液时加入45 ng／ml PTHrP和分别加入10-5、10-6、10-7 mol／L辛伐他汀，每组2孔，分别有1孔放有骨磨片1个。

124 抗酒石酸染色

染色时，培养板中贴壁的细胞进行抗酒石酸染色（TRAP染色），培养6 d后，小心移去培养液，用磷酸缓冲液（PBS）洗涤后，按说明书操作，首先用乙醇-丙酮（1∶1）混合液固定5 min后，去离子水洗涤3次，然后加入底物和染色质的混合液，37 ℃孵箱中温育20～60 min，见染色良好后，移去反应液，去离子水洗涤以终止反应，室温过夜干燥。

125 破骨细胞计数

倒置显微镜下，所有3个或3个以上细胞核的抗酒石酸染色阳性的巨大细胞均为破骨细胞。其他细胞，如巨噬细胞、成骨细胞、成纤维细胞抗酒石酸染色均为阴性。实验重复5次，结果表示为均数±标准差。

126 破骨细胞吸收功能的测定

培养6 d后，取出骨磨片，去离子水冲洗3遍，甲醛固定液固定，甲苯胺蓝染色，并用扫描电镜观察，骨磨片的吸收陷窝。

127 原子分光光度计测钙

在培养7 d取培养液上清，采用PE 3060原子吸收光谱仪测钙含量；条件为：波长3224 nm，灯电流75 mA，光谱宽度26 nm，空气压力16×105 Pa，乙炔气压力03×105 Pa。

13 辛伐他汀对小鼠颅盖骨骨代谢的影响

131 BalB／C小鼠颅盖骨的分离和培养

出生1周的Ba1B／C小鼠用700 ml／L乙醇浸泡5 min，PBS液洗去乙醇，无菌剪开头皮，取颅骨，去净颅骨内外表面的骨膜及软组织，沿冠状缝和人字缝剪开，完整分离左右顶骨，置入含有100 ml／L胎牛血清的αMEM培养液中，预培养24 h后将颅盖骨置入24孔培养板孔内；每孔加入2 ml重悬浮于含100 ml／L胎牛血清的αMEM培养液中，细胞计数后，配成15×109 L-1的骨髓细胞悬液；共分4组：阳性对照组。在换培养液时每培养孔中加入45 ng／ml PTHrP，实验组每培养孔在换培养液时加入45 ng／ml PTHrP和分别加入10-5、10-6、10-7 mol／L辛伐他汀。

132 培养上清原子能分光光度计测钙

小鼠颅盖骨体外培养8 d取上清，测定上清液中钙的含量，方法同上。

133 培养液上清测定碱性磷酸酶活性

小鼠颅盖骨体外培养8 d取上清，用碱性磷酸酶检测试剂盒在日立7170全自动生化分析仪上检测碱性磷酸酶活性。

134 石蜡切片的制备及组织学观察

取培养8 d的颅盖骨，固定液固定，石蜡包埋，切片厚5 μm，HE染色，在Leico LA（德国）全自动显微镜和Pixaev数码采集系统组成的图像分析仪系统下采集图像，分析骨面积（图1）。

14 统计学处理

所有数据采用SPSS 100统计软件包处理，进行t检验。

2 结 果

21 辛伐他汀对PTHrP诱导的破骨细胞形成和功能的影响

211 辛伐他汀对PTHrP诱导的破骨细胞形成的作用

5次试验所得结果显示，01 μmol/L的辛伐他汀明显抑制破骨细胞的形成，1 μmol/L浓度下，几乎完全抑制PTHrP诱导的破骨细胞形成（表1、图1）。表1 辛伐他汀对PTHrP诱导的破骨细胞形成的影响骨磨片在对照组和辛伐他汀10-5、10-6mol/L组均无明显的吸收陷窝形成，只有在辛伐他汀0、10-7mol/L两组有吸收陷窝的形成，并且在无辛伐他汀组的吸收陷窝形成较多（图2~4）。

213 培养上清测钙的结果

PTHrP诱导的破骨细胞6 d，上清钙含量提示，在辛伐他汀浓度为10-5、10-6、10-7 mol／L时，用药组明显少于对照组，差异具有统计学意义，随着药物浓度的增加钙含量降低（表2）。表2 辛伐他汀对体外PTHrP诱导的破骨细胞培养液上清钙含量的影响

221 培养上清碱性磷酸酶和Ca2+含量测定结果

测定小鼠颅盖骨体外培养第8 d上清液中ALP的活性，提示用辛伐他汀组在浓度10-5、10-6mol/L时上清中ALP的活性明显升高，与对照组比较具有统计学意义，辛伐他汀在10-7mol/L时ALP的活性与对照组比较差异则无统计学意义;原字分光光度计测定Ca2+含量，用辛伐他汀各组与对照组比较均无统计学差异（表3）。表3 辛伐他汀体外对小鼠颅盖骨培养液上清中Ca+和ALP的影响

22 组织学观察

小鼠颅盖骨培养8 d，可见对照组骨组织吸收明显，用Simvastatin治疗组，Simvastatin浓度在10-5、10-6、10-7 mol／L时，可见骨质吸收明显减轻，骨质较致密（图5、6）。

图1在PTHrP的刺激下，培养骨髓细胞6 d，大量破骨细胞生成（TRAP ×200） 图2在PTHrP的刺激下，培养骨髓细胞8 d，骨膜片形成的吸收陷窝（甲苯胺兰染色 ×200），蓝色为形成的吸收陷窝 图3在PTHrP的刺激下，加入10-7mol/L的辛伐他汀，扫描电镜照片见吸收陷窝明显减少 图4在PTHrP的刺激下，加入10-6mol/L的辛伐他汀，扫描电镜照片无吸收陷窝 图5体外培养第8 d，对照组小鼠颅盖骨骨质吸收明显（HE×100） 图6体外培养第8 d，辛伐他汀10-7 mol/L组，小鼠颅盖骨较对组照骨质增厚明显（HE×200）

3 讨 论

骨转移癌引起的高血钙症（humoral hypercalcemia of malignancy，HHM）与甲状旁腺功能亢进引起的高血钙症在临床症状上相似〔4〕。在不同的癌组织都纯化出了甲状旁腺素相关蛋白（parathyroid hormonerelated protein，PTHrP），被认为是介导HHM的主要因子〔5〕，PTHrP具有诱导破骨细胞形成的能力，从而导致骨吸收破坏，造成HHM。陶惠人和许多荣等〔6、7〕又成功地建立了PTHrP诱导小鼠全脊髓细胞形成破骨细胞的培养体系。使破骨细胞的体外形态功能及调控研究成为可能。它排除了体内复杂因素的干扰，研究单一因素对破骨细胞的作用，体外将破骨细胞与骨片共培养可反映破骨细胞的骨吸收能力，尤其是研究药物对破骨细胞骨吸收的影响，但此方法的缺点在于不能反映出体内骨吸收复杂的网络调控关系，颅盖骨保持了原有骨组织细胞的结构及其相互关系，具有相对完整性，有利于观察培养体系中各细胞之间的正常关系、相互影响以及局部环境的调节作用，是研究骨组织代谢的理想模型。

在破骨细胞吸收的过程中，破骨细胞首先与骨片紧密结合，然后细胞极化形成骨吸收器官，由细胞内的Ⅱ型碳酸酐酶（CAll）将CO2和H2O生成H2CO3，H2CO3分解为H+和CO3-，皱褶缘处的空泡型质子泵（VATPase）将H+分泌到骨吸收的微环境中使骨脱钙；破骨细胞吸收骨为游走性的，在一区域吸收结束后可游走到其它区域进行骨吸收，从而在骨片上形成一团团吸收陷窝。因此骨吸收陷窝和游离到培养上清中的钙是反映破骨细胞骨吸收能力的的可靠指标。本研究结果表明，辛伐他汀在浓度10-5、10-6、10-7 mol／L时均使破骨细胞骨吸收陷窝数目明显减少，辛伐他汀在浓度10-5、10-6、10-7 mol／L时均使破骨细胞骨形成数目，明显减少，培养上清中钙含量也明显减少，且呈量效关系，提示辛伐他汀体外可直接抑制破骨细胞的形成及其骨吸收功能。

碱性磷酸酶（ALP）是成骨细胞的特异性标志，ALP含量的高低与成骨细胞的分化密切相关。小鼠颅盖骨体外培养第8 d，浓度为10-5、10-6mol/L辛伐他汀培养上清液中ALP的活性明显增强，组织学观察也明显提示辛伐他汀在浓度10-5、10-6、10-7mol/L时小鼠头盖骨明显比对照组骨质吸收减轻，骨质较致密，矿化增强。这说明辛伐他汀体外既能抑制破骨细胞的骨吸收又能促进成骨细胞的分化和功能，本实验中用辛伐他汀各组培养小鼠颅盖骨的上清中钙含量与对照组比较均无统计学差异；可能是由于颅盖骨培养体系反映的是一个整体效应，不只单纯反映破骨细胞的功能状态，所以不如单纯成熟破骨细胞培养体系那么敏感所致。但从实验结果可以可看出，用辛伐他汀各组在浓度10-5、10-6、10-7mol/L时培养液上清中钙含量有下降趋势，提示在颅盖骨培养体系中辛伐他汀可抑制破骨细胞骨吸收活性。

治疗骨质疏松的药物二磷酸盐，由于抑制甲羟戊酸代谢途径下游产物的生成，是GPT蛋白ras，rho家族活化受阻而具有明显的抑制破骨细胞功能的作用〔8〕。在甲羟戊酸代谢途径中他汀类药物作为上游途径中HMGCoA还原酶抑制剂，必将影响其下游产物的生成。因此他汀类药物在促进成骨细胞活性的同时，可能对破骨细胞也有抑制作用。Grasser WA〔9〕等研究表明洛伐他汀对体外培养新生大鼠破骨细胞的形成和分化有着明显的抑制作用，通过对甲二羟戊酸在破骨细胞发育代谢中作用的研究证实龙牛儿基龙牛儿醇在破骨细胞的形成和分化中起着重要的作用，洛伐他汀对破骨细胞的抑制作用是通过关键异戊烯化蛋白的二牛龙牛儿基丙酮完成的，并且他汀类药物的骨效应是影响局部破骨细胞的数量。Von knoch F等〔10〕人在2005年报告了大鼠口服120 mgkg-1d-1洛伐他汀可以抑制超高分子量的聚乙烯（UHMWPE）颗粒诱导的大鼠颅骨的骨吸收，并使局部破骨细胞数目减少。黄鲁豫〔11〕等报道辛伐他汀在皮下注射10 mg・kg-1・d-1可抑制小鼠头盖骨的骨吸收和破骨细胞的形成。这些观点和本实验的结论是一致的。

本研究采用PTHrP诱导的破骨细胞培养体系和小鼠颅盖骨培养观察到，辛伐他汀在体外不仅可促进成骨细胞ALP的表达，同时还可以直接抑制PTHrP诱导的破骨细胞的形成和功能，对骨吸收性疾病的防治具有重要意义。

参考文献：

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篇7

[中图分类号]1206.6 [文献标识码]A [文章编号]1004-518X （2015）05-0094-07

在鲁迅的话语系统中，故乡是一个非常关键的言说立足点。故乡是鲁迅启蒙话语的观照和言说对象，也是鲁迅流寓者身份确立和挣扎的空间、精神参照物，是鲁迅生命体验言说的出发点。它作为鲁迅体验与言说的中枢，辐射出鲁迅话语的基本语汇。于是，故乡成为鲁迅的核心话语点，围绕着这个核心，在不同层次和空间内部形成一种聚集力量，衍生出一个独具鲁迅气质的话语的场域，其中蕴含着鲁迅话语的言说实践和规则。显然，鲁迅的故乡不是一个固定的地域背景或者稳定的空间意象，它的内部既凝聚和衍生着意象、主题、意志，又存在着不同层面的话语的生成规则。在这一话语建构的过程中，空间焦虑内化为主要因子，支撑着故乡话语的成型，甚至决定着这一话语的走向。

鲁迅的小说中，主人公们的活动大多集中在一个特定的空间场域中。李欧梵在《铁屋中的呐喊》中说：“从一种现实基础开始，在他25篇小说的14篇中，我们仿佛进入了一个以S城（显然是绍兴）和鲁镇（她母亲的故乡）为中心的城镇世界。”李欧梵不但注意到鲁迅对于空间的关注，也指出鲁迅作品中的空间建构是以他的故乡为模本的。鲁镇、S城、未庄、平桥村、咸亨酒店、一石居、茶馆、社庙、土谷祠……当我们将这些地理空间并置的时候，凸显出的正是鲁迅话语的一个现实观照点：故乡。鲁迅小说的展开几乎统统依赖于这个以故乡为原型的世界。这是鲁迅故乡话语的初步生成，即作为原型存在的地理空间意义上的故乡。它作为小说主人公们的活动背景存在，是鲁迅作品情境建构的出发之处。

鲁迅以密集的空间概念建构了原型故乡的同时，又赋予故乡以内核性的人格，诸如畸形、荒凉、冷漠、残忍、阴暗，生活其间的民众掣于“吃人、观赏吃人、被人吃”的网罗不能自拔，也不自知。这一生存网罗即是故乡自身的人格和生命特质，其实质正是故乡民众的群体性人格。在鲁迅的文本世界中，故乡因为内部众人的群体性人格叠加而有了自己的生命人格，它以自身的生命质与内部主人公们并置为小说的言说对象，从而发出了自身的话语。鲁迅故乡话语的建构过程，实则也是故乡这一空间参与叙事与言说的过程。故乡如何以地理空间意象成为文化建构、价值体系建构的中心，又如何作为文化、价值参照实现言说者自我身份的确立，是本论文要探讨的问题。

故乡作为空间概念，有着自身的层次，它不是单纯的地理空间，是密布着权力关系和价值秩序的社会文化空间。人与空间的关系，人在空间的生存，成为鲁迅故乡话语的着力点。而其间触目惊心的是鲁迅以及他笔下人物的空间焦虑。即，人与生存空间（故乡）不能相容，不能和解的紧张关系。对空间焦虑的直接言说在鲁迅的小说中不胜枚举：

屋里面全是黑沉沉的。横梁和椽子都在头上发抖；抖了一会，就大起来，堆在我身上。万分沉重，动弹不得。（《狂人日记》）

太大的屋子四周包围着她，太空的东西四面压着她，叫她喘气不得。（《明天》）闰土在海边时，他们都和我一样只看见院子里高墙上的四角的天空。（《故乡》）鲁迅笔下的主人公们，狂人、孔乙己、祥林嫂、阿Q、疯子、吕纬甫、魏连殳，几乎无一例外地生存在这逼仄、气闷、秩序环绕、人情冷漠的世界里，时时感受到来自这一空间的威逼和压迫。每一个人身上都带有不安和焦灼感。鲁迅的关注点始终在这些封闭空间内部主人公面临的焦虑。这一以焦虑为核心的关系结构和感受结构就是鲁迅故乡话语的精神本质，也是故乡从地理意象上升到群体性人格象征的内在话语机制，并且暗示着鲁迅对于世界的认知和把握方式。

一、整体上的“囚牢”模式

鲁镇之于祥林嫂、未庄之于阿Q、吉光屯之于疯子、咸亨酒店之于孔乙己、S城和寒石山之于魏连殳……都是一种围困力量。不管物理空间如何转移和置换，始终没有摆脱这一逼人的“囚牢”模式。在这种人与故乡空间的关系中，空间是先在而主动的，人是被动的；空间是掌握话语权的，人是被评判和规约的。孔乙己在咸亨酒店众人的调笑中沦为笑料，祥林嫂是鲁镇人注视中的“陈旧的”，疯子和狂人更是被真实地囚禁在祖屋和社庙里……他们始终处于以囚牢形式出现的空间里，被围困而无力挣脱。故乡就是通过这种令人窒息的囚禁实现对于内部人众的虐杀。这些小说的内部，都传递出黑暗、冷漠、残杀、耻笑、死亡、孤独等体验，糅合的焦灼感在文本中发酵、繁衍、变形、演化。正是这种内在的空间焦虑的影响，故乡在言说过程中演化为鬼域：故乡一社会空间（等级、秩序和文化空间）一牢笼一地狱，通过焦虑情绪的传递，以一系列空间意象的相互置换完成空间概念和空间性质的相互指涉，最终使故乡与鬼域成为同质同构的空间概念。

鲁迅的故乡话语内部，首先突出的是实有的空间，鲁镇、未庄、S城、社庙、祖屋、酒馆、山村、土谷祠，甚至花轿、坟、棺材，鲁迅不厌其烦地重复着这些充满桎梏感的意象，以这些具体而封闭的空间营造出逼仄的“无法呼吸”“艰于呼吸视听”的空间感受，正是这种逼仄产生的焦灼感，将实有意象不断置换为感知意象，从而将具体空间意象变形化，无数涌现的空间意象以一种内在的同质――焦虑――无限推演下去，衍射至不同权力控制的空间内部，渐次演化成了“高墙上四角的天空”“铁屋子”“地狱”“非人间”“无物之阵”“独头茧”“人肉筵宴的厨房”，甚至“无主名无意识的杀人团”。至此，实有的空间意象经由感知意象的中介，进入到以囚牢为形式、以吃人为内质的象征性意象。从空间对人的囚禁，最后到空间对人的虐杀和吞噬。故乡与鬼域的同质性正是通过这一系列意象的置换完成的。这一话语规则是：故乡=地理空间=社会/秩序空间=牢笼=吞噬/吃人=地狱。而从实有的空间意象到感知意象，再到象征意象的转换契机，正是空间焦虑。在这种言说规则中，空间焦虑内化为叙事的主要因子，故乡经由这一因子的内在运作，最终变成鬼域。这一内核性质的感受结构成为故乡与鬼域之间转换的核心规则，并支撑起故乡的生存、文化景观。

故乡的囚牢本质和无形杀伤力作为故乡话语的显在层面，直接呈现在读者面前。需要指出的是，这是从叙述者的角度呈现出来的话语，是将故乡作为启蒙对象的空间想象与空间重建。鬼域故乡的建构与启蒙话语的建构是同步的。我们注意到，鬼域故乡的言说者为空间之外的人，他是冷眼旁观者，也是故乡的异己者。即叙事者与故乡的对话关系中潜藏着一个“文明世界”（理想世界）作为参照，故乡成为鲁迅话语中的“他者”。叙事者与其所在空间的距离感使得他建构的这个众鬼喧嚣的空间成了与他异质的存在，启蒙话语正是经由这异质性提供的言说角度进入到故乡话语系统中。

在“我”这一带有启蒙者眼光的归乡者不出现的文本中，唯有狂人、疯子和夏瑜这种脱离了正常生活轨道的叛逆者，能够跳出生存的空间看到故乡的囚牢性。狂人和疯子出现的意义就在于，以他们的非常态的生存方式和话语方式在故乡话语内部打开非常规的感受维度。这种观察视角和感受维度是故乡自身无法自发出现的。因为故乡话语背后，是文化范式的规约。狂人和疯子的疯言疯语正是以打破规约的方式撕开这密闭的空间的一角，他们不断警示着人们存在场域里的危险性。夏瑜更是对阿义说“可怜”，他们都因为反常规性而获得与故乡的距离，而同时，狂人被关在祖屋里，疯子被关在社庙里，夏瑜被关在大牢中。他们的身份特征使他们在体验世界里将故乡与监牢这两个意象进行并置。从这个层面看，囚禁意象的设置就具有对故乡整体的象征意义。主人公因为疯癫或者叛逆而获得即使身在故乡也并不属于这一空间的特点，鲁迅反复将这“不在场”身份与囚牢意象并置，实则将囚牢模式的发现纳入到启蒙话语的框架之下，于是，囚牢意象不仅仅是故事事件的呈现，而且是作为一种感受结构去进行意象之外的故乡人格的想象和故乡话语的建构。

二、内部的阻隔模式

如果说囚禁是从叙事者的启蒙观照中生成的故乡话语，那么对于故乡这一“囚牢”的在场者（如阿Q、祥林嫂、孔乙己）而言，故乡又呈现出不同的意味，这一层次上占据主导地位的感受结构是阻隔，其内核是被拒斥感。焦虑不仅仅是来自空间的压迫，还来自于人无法进入空间内部，与空间始终隔膜。鲁迅故乡话语的走向，在很大程度上正是由这一阻隔模式推动的。《祝福》里祥林嫂的故事对于叙事者“我”来说，是“先前所见所闻的她的半生事迹的断片，至此也联成一片”，由这种整体观照的角度，祥林嫂的一生是被囚禁、被围困的一生。然而推动着这些断片构成小说的内在驱动力，却是由祥林嫂的角度感知到的阻隔以及祥林嫂想要冲破阻隔进入到这个空间的努力。《孔乙己》中咸亨酒店呈现出的阻隔是以曲尺形的柜台将人群分割开来，对于内部的众人而言，取笑孔乙己，成为他们联合一气的途径，他们借此获得一种稳定的团体感或者安全感。孔乙己难堪的失语状态说明他与鲁镇文化空间的疏离。“穿长衫”却只能“站着喝酒”，则意味着他在任何空间中都找不到自己的位置，永远游离于空间之外的焦虑成为孔乙己身上的标签。

如果说从叙事者的角度，以“囚牢”模式展示了故乡在话语中如何变成鬼境，那么，在这个话语层面上，令人触目惊心的则是，故乡内部的人如何变成鬼卒。其内在的话语运作机制是空间焦虑迫使下的人的本能挣扎。这种焦虑的运作过程体现的是无数的个人拼死向着群体靠拢。于是，这一层面上的故乡话语沿着这一规律言说和深入：乡民=空间中的人=认同秩序和规则的人=被空间驯化的人（被吃者）=排斥秩序之外的人（吃人者）=鬼众。

以《祝福》为例，祥林嫂的一生浓缩在几个空间之中：鲁镇（初到）、贺家ィū黄雀募蓿、鲁镇（被看、被嘲笑）、阴间（想象与恐惧）。初到鲁镇，地理空间就在四叔的皱眉中成为文化、秩序空间，她做的唯一的努力就是拼命干活以获得认可，进入到这个空间内部；贺家ナ恰吧钌揭ァ保象征着空间的隔绝，祥林嫂由改嫁被隔绝在鲁镇社会空间之外，她以死抵抗的心理动因，其实正是她对于所在的社会空间秩序的认同和恐惧；阿毛被狼吃，将她再次送到鲁镇，阿毛的被吃，正是祥林嫂被吃的隐喻，而祥林嫂看到的却不是这个空间的吞噬性，她以不断重复阿毛的故事来获得这个空间的同情和接纳。即便这个空间以注视、鉴赏、嘲笑甚至防备形成密不透风而无法打破的囚牢，她所做的努力也仍旧是捐门槛以期得到救赎，重新获得鲁镇人的接纳。祥林嫂自始至终感受到的，都是阻隔，而不是囚禁，她的所有努力，也都是为了获得空间内的立足之地，而从未想过冲破这个囚牢。

篇8

摘要：目的建立绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁与槲皮素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱仪，使用TURNER KromasilTMC18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.4%磷酸水溶液甲醇乙腈进行梯度洗脱，流速为0.5 ml・min-1，检测波长为360 nm；柱温为40℃。结果芦丁在0.37~3.70 μg范围内有良好的线性关系，r=0.999 9。槲皮素在0.05~0.50 μg范围内有良好的线性关系，r= 0.999 9；芦丁的平均加样回收率为99.2%，RSD为1.69%；槲皮素的平均加样回收率为99.1%，RSD为2.21%。结论该方法简便快捷，准确度高。

关键词：绞股蓝50%总皂苷提取物； 芦丁； 槲皮素； 反相高效液相色谱法

Determination of Rutin and Quercetin in 50% Total Gypenoside Extraction of Gynostemma by RPHPLC

Abstract：ObjectiveTo determine the main flavonoids rutin and quercetin in 50% total saponins of Gynostemma by RPHPLC. MethodsThe separation was performed on TURNER KromasilTMC18 column（250 mm×4.6 mm，5 μm），the mobile phase consisted of 0.4% phosphoric acid- methanol-acetonitrile，with the following rate of 0.5 ml・min-1at 40℃，the wavelength for measurement was 360 nm.ResultsThe calibration curves were linear in the range of 0.37~3.70 μg for rutin (r=0.999 9)and in the range of 0.05~0.50 μg for quercetin (r=0.999 9).The average recovery of compound rutin was 99.2%(RSD=1.69%)，and that of compound quercetin was 99.1% (RSD=2.21%).ConclusionThis method is accurate and reproducible.

Key words：50% Total saponins of Gynostemma; Rutin; Quercetin; RPHPLC

绞股蓝(Gynostemma)又名七叶胆，是葫芦科绞股蓝属植物。该属植物我国有14种和3变种［1］。现代药理学证明，绞股蓝具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用［2］。绞股蓝50%总皂苷提取物是总皂苷含量达50%的、一种适用于口服制剂生产的原料药，它具有很广的应用范围，故本文采用反相高效液相色谱法，可对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦丁、槲皮素等成分进行有效的分离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，能为建立绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供依据。

1 仪器与试药

DIONEXP680高效液相色谱仪（四元泵、Chromeleon色谱工作站、UVD170U检测器），AT201电子分析天平（d=0.01 mg，瑞士），芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号0080－9705）、槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号081－9003）；甲醇（色谱纯，天津大茂化学仪器供应站）、乙腈（色谱纯，天津大茂化学仪器供应站），其它试剂均为分析纯，水为双蒸水。绞股蓝原50%总皂苷提取物由湖北中医学院中药制剂教研室提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱为TURNER KromasilTM（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.4%磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，以乙腈为流动相C；按表1进行梯度洗脱，检测波长为360 nm；流速为0.5 ml・min-1，柱温为40℃。理论板数按芦丁、槲皮素峰计算应不低于3 000。色谱图见图1~4。

表1 梯度洗脱（略）

图1 芦丁对照品HPLC图谱（略）

图2 槲皮素对照品HPLC图谱（略）

图3 绞股蓝50%总皂苷提取物供试品的HPLC图谱（略）

图4 空白溶剂图谱（略）

2.2 供试品溶液的制备 取本品0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，精密量取20 ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.368 mg的溶液，即得芦丁对照品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.054 8 mg的溶液，即得槲皮素对照品溶液。

2.4 标准曲线的制备分别精密吸取芦丁、槲皮素对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，结果见表1，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得芦丁的回归方程为：y = 61.194 5x + 1.100 4，r=0.999 9；槲皮素的回归方程为：y = 129.036 0X－0.833 4，r=0.999 9。线性范围：芦丁为0.37~3.70 μg；槲皮素为0.05~0.50 μg。

图5 芦丁标准曲线（略）

图6 槲皮素标准曲线（略）

2.5 精密度实验 取2.3项下芦丁和槲皮素对照品溶液各5 μl，分别连续进样5次，测定峰面积，结果见表2～3。芦丁和槲皮素的RSD分别为：0.08%和0.26%。

表2 芦丁精密度实验结果（略）

表3 槲皮素精密度实验结果（略）

2.6 稳定性实验 取2.2项下样品溶液室温放置0，3，6，9，12，24 h后测定，结果见表4~5，测得芦丁和槲皮素峰面积基本不变，RSD分别为1.77%，2.80%，表明样品溶液在24h之内稳定。

表4 芦丁稳定性实验结果（略）

表5 槲皮素稳定性实验结果（略）

2.7 重复性实验 取同一批样品5份，照2.2项下的方法依法制备，测定样品中芦丁和槲皮素的含量，结果见表6~7。测得芦丁和槲皮素含量的分别为0.955%和0.222%，RSD分别为1.29%和1.71%。

2.8 加样回收实验 取已知含量的本品粉末6份，每份0.1 g，精密称定，分别加入一定量的芦丁、槲皮素对照品，按2.2项下的方法依法制备，按上述色谱条件进行测定，结果见表8~9。芦丁加样回收率为99.6%，RSD为1.07%，槲皮素加样回收率为99.1%，RSD为2.21%。

2.9 样品测定 按2.2项下方法配制样品溶液5份，依法测定，结果见表10。

表6 芦丁重复性实验结果（略）

表7 槲皮素重复性实验结果（略）

表8 芦丁加样回收实验结果（略）

表9 槲皮素加样回收试验结果（略）

表10 5批绞股蓝药材中芦丁、槲皮素含量测定结果（略）

3 讨论

3.1 提取方法的选择 在绞股蓝原药材芦丁、槲皮素的含量测定中，我们曾对不同极性的提取溶剂（如：不同浓度的甲醇、不同浓度的乙醇）和不同的提取方式（如：超声、回流等）进行过考察，并对提取时间进行了单因素实验，综合考虑以石油醚回流提取，除去脂溶性较大的成分，再以甲醇回流提取3 h实际工资效果最好。

3.2 检测波长的选择 在检测波长选择中根据对芦丁对照品、槲皮素对照品溶液紫外光谱的测定，在360 nm处有最大吸收，最终选择测定波长为360 nm。

3.3 流动相的选择流动相的选择曾使用过乙腈-水、乙腈-甲醇-水、甲醇-水、乙腈-0.4%磷酸等流动相进行等度及梯度洗脱，由于干扰峰难以分离，最后根据分离情况选择了表1中的流动相。绞股蓝50%总皂苷提取物色谱图中除芦丁、槲皮素的色谱峰外还有其他的色谱峰，分离度也较好，亦可以作为指纹图谱用于绞股蓝50%总皂苷提取物的鉴别。经方法学验证，此方法能对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦丁、槲皮素进行有效的分离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，为建立适用于口服制剂的绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供了科学的依据。

篇9

关键词： 断路器；声波；小波包；奇异谱熵；支持向量机

Key words: circuit breaker；acoustic signal；wavelet packet；singular spectrum entropy；support vector machines(SVM)

中图分类号：TM561 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2012）25-0028-03

1 断路器操动过程中的声波信号

断路器在分、合闸过程中由于机械的撞击和摩擦发出的声波中蕴含了丰富的机械状态信息。声波传感器的安装相对灵活简便，不需要改变设备结构，所以与其它检测法相比，声学检测具有简单灵活、易于在线检测的优点。但在获得的声波信号中常常含有大量噪声，严重影响了信号处理结果。采用电容型传声器采集断路器合闸的声波信号，采样频率为10000Hz，采样点30000个，如图1所示。由图2可以发现合闸声波信号能量主要分布在0～3000Hz，3000Hz以上信号能量很小。

2 小波包奇异谱特征向量提取方法

2.1 选择合适的小波包基函数和分解层数，对声波信号进行分解。定义P■■为第j层上小波包分解的第i个量，则可以得到小波包分解的Mallat算法：

P■■（k）=HP■■（k）P■■（k）=GP■■（k）（1）

其中H和G分别为低通滤波器和高频滤波器。原始信号经j层小波包分解得到2j段信号，每段信号含有信号采样点数为■。当经过j层分解后，第j层上的第i个节点系数为：P■■=P■■（k），k=1，2，…，N/2j。

2.2 对小波包分解后各节点系数进行重构和提取，重构公式为：P■■（k）=H*P■■（k）+G*P■■（k）（2）

式中H*和G*是H和G的对偶算子。

2.3 对经过j层小波包分解之后各节点重构信号进行相空间重构。以长度为L步长为1将节点系数P■■加窗，并映射到嵌入空间中，即将该系数序列分为■-L+1个数据段，构造相空间状态矩阵A■■

A■■=■ （3）

2.4 在计算得到各节点系数相空间重构特征矩阵后再将A■■进行奇异值分解（SVD），计算熵特征向量。A■=U■?撰■V■■，得到?撰■非零对角元?姿■■（k=1，2，…，n）（n=min（（2■N-L+1），L）），则?姿■■构成该层上信号的奇异值谱。若k0为非零奇异值个数，则k0值反映了特征矩阵A包含不同模式个数，奇异值大小反映对应模式在总模式中所占比重大小。基于信息熵理论，该信号的奇异谱熵为：

H■■=-■p■■1np■■

p■■=■（4）

3 故障诊断方法

篇10

月光，洒在了黑漆漆的村庄上方

清脆的笑声里，落满了一池蛙鸣

这是童年的梦，也是童年难忘的香味

二

隔着稻香的田野，水鸟扑扑楞楞的飞

那些追逐的身影，一会儿就被稻草淹没

哪怕跟不上水鸟飘飞的脚步，也要气吞山河般追

三

归来，累了，看着小花脸，悄悄的笑出声

就像河里跳出的小鱼，落在了河滩上惊慌叹气

没有了水，小鱼就失去了自由

就像天空飞翔的小鸟，失去了羽翅无法搏击

四

童年，就是这样美丽，如花般清澈，也如水般纯净

挨着父母，我们都是乖孩子

背着他们，我们就可以欲所欲为

甚至忘记乡村的风，故乡的雨

只知道那条通往乡间的小路，就应该有我们的脚迹

五

曾几时，谁又会忘记那条故乡小路

曾几时，谁又不会记起故乡小路的迷离

因为小路上，一拘土、一棵树、甚至一片落叶

没有过我们同年的影子，也没有我们同年的回忆

六

那时，我们没有喜洋洋，也没有灰太狼，更没有悲催的光头强

在我们心里，只有一个故乡，一条小河，一片绿油油的田野

还有一条故乡的小路，一个装满母亲期待的梦