芦荟大黄素诱导斑马鱼肝毒性及作用机制研究

刘艺; 王瑞昕; 游龙泰; 董晓旭 北京中医药大学中药学院; 100029

关键词:芦荟大黄素 斑马鱼 肝毒性 凋亡蛋白 作用机制 

摘要:目的利用模式生物斑马鱼模型探索芦荟大黄素致肝毒性及作用机制。方法利用不同浓度芦荟大黄素处理斑马鱼48小时后,计算各组斑马鱼死亡率(%),用Origin 8.0软件绘制最佳的“死亡率—浓度”效应曲线,计算芦荟大黄素对斑马鱼肝脏毒性的最大非致死浓度(maximun non-lethal concentration,MNLC)和10%致死浓度(10%lethal concentration,LC 10)浓度;用NIS-Elements D 3.10高级图像处理软件进行图像分析并采集数据,计算各组斑马鱼肝脏面积、肝脏不透光度平均值和卵黄囊吸收延迟面积;利用CYP及Caspase试剂盒分别对各组斑马鱼CYP 3A4及凋亡相关酶Caspase3和Caspase9的活性进行检测,应用多功能酶标仪分析统计RLU信号强度,探讨芦荟大黄素致肝毒性的作用机制。结果(1)芦荟大黄素对斑马鱼的LC 10和MNLC浓度分别为312μM和229μM,呈现剂量—反应关系。(2)与空白组相比,各给药组斑马鱼的肝脏面积未发生明显改变,但随着芦荟大黄素剂量升高,斑马鱼的肝脏不透光度增加、卵黄囊吸收延迟面积增大。(3)芦荟大黄素能明显抑制斑马鱼体内CYP4503A4酶的表达,且能显著上调斑马鱼体内Caspase3和Caspase9蛋白的水平。结论芦荟大黄素能诱导斑马鱼肝毒性发生,作用机制可能与芦荟大黄素诱导肝细胞凋亡,主要通过激活凋亡相关蛋白实现,并且还与诱导斑马鱼Ⅰ相代谢酶的异常表达相关。

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