免疫学杂志

中和性马抗体对SARS-CoV感染的防治作用

关键词: 马抗血清  免疫  中和抗体  

目的探讨马抗SARS-CoV中和性抗体是否对SARS-CoV感染有防治作用.方法用SARS-CoV(BJ-01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab')2片段.通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab')2片段对SARS-CoV感染的预防性和治疗性作用.再在Balb/c小鼠体内模型中,用CPE法和定量RT-PCR方法检测该抗体的保...

体外转录制备的siRNAs对SARS-CoV复制的抑制作用

关键词: 严重急性呼吸器官综合征  rna干扰  rna依赖性rna聚合酶  小干扰rna  

目的体外研究针对SARS-CoV RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)对SARS-CoV感染的抑制效应.方法利用Ambion公司在线设计工具,设计出4条针对RdRp基因的siRNAs,并在体外利用试剂盒进行转录合成.在SARS-CoV感染前1 d,将这4条体外转录的siRNAs用Lipofectamine2000试剂转染入Vero E6细...

应用噬菌体随机肽库技术筛选SARS-CoVS蛋白模拟表位

关键词: sars病毒  s蛋白  模拟表位  噬菌体肽库  

目的筛选SARS病毒(Severe acute respiratory syndrome associated coronavirus,SARS-CoV)结构蛋白D(Spike)特异性的模拟表位,为抗SARS疫苗研究提供基础.方法以抗SARS病毒D蛋白的单克隆抗体为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,随机挑选30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附(ELISA)法和交叉反应实验鉴定阳性克...

SEA和B7-1基因真核共表达载体的构建及在B16细胞的表达

关键词: 葡萄球菌肠毒素a  超抗原  真核载体  共表达  

目的构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)和小鼠B7-1基因真核共表达载体.方法采用PCR和RT-PCR方法分别克隆了带B7-1跨膜区的SEA(SEA-B7tm)和小鼠B7-1基因,中间通过内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)序列的连接克隆至真核表达载体pcDNA3.1+.利用阳离子脂质体将重组质粒转染B16细胞,间接免疫荧光法检测B7-1和SEA分子在B16细胞膜表面的...

人源轮状病毒转基因马铃薯口服免疫小鼠的免疫应答研究

关键词: 轮状病毒  口服免疫  转基因植物疫苗  马铃薯  

目的分析人源轮状病毒转基因植物抗原的口服免疫应答反应.方法在根癌脓杆菌介导获得系列转基因马铃薯植株的基础上,用ELISA分析转基因马铃薯中目的蛋白表达水平.马铃薯块茎直接口服免疫Balb/c小鼠,ELISA分析免疫小鼠血清、唾液、粪便提取物特异抗体水平.结果获得一株最高表达量的转化株;口服免疫可诱导较强的血清IgG反应和强烈的黏膜sIgA反应,粪...

狂犬病病毒核蛋白基因-重组犬2型腺病毒的构建研究

关键词: 狂犬病病毒  核蛋白  犬2型腺病毒  重组病毒  

目的获得具有感染性的狂犬病病毒核蛋白-犬2型腺病毒,并对重组病毒生物学和免疫学特性进行初步探讨.方法对克隆的犬2型腺病毒全基因组E3区进行部分缺失后,插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因和牛生长激素polyA构成的长2392bp的表达盒,然后通过AscⅠ和PvuⅠ双酶切,游离重组全基因组,转染犬肾细胞系.结果盲传5代后,细胞产生典型病变.经...

沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答

关键词: 沙眼衣原体  dna疫苗  体液免疫应答  细胞免疫应答  

目的构建沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗,并观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫.方法将核酸疫苗(pcDNA3.1-MOMP)或对照空质粒(pcDNA3.1)注射于4～6周龄小鼠后腿股四头肌,每次剂量为100mg.间隔2周加强免疫2次.末次免疫后,ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ及小鼠血清中抗MOMP水平;MTT法测定脾淋巴细胞特异性增殖反应.结果 小鼠接种核...

人PD-1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定

关键词: 基因工程  真核表达  

目的利用基因工程手段构建hPD-1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hPD-1-Fc融合蛋白.方法 PCR方法扩增编码hPD-1膜外区的cDNA序列,将其与人IgGlFc和pcDNA3.1(+)片段连接,构建成hPD-1-Fc重组表达载体.用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清液中融合蛋白hPD-1-Fc的表达,经Protein A亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物.结果 P...

抗人肝癌单链抗体HAb25-sc04Fv的构建及其表达

关键词: 肝细胞肝癌  单链抗体  克隆  表达  

目的构建和原核表达抗人肝癌单链抗体HAb25-scFv，为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法采用（Gly4Ser）3为连接肽，在pUC19质粒上构建HAb25-scFv单链抗体基因；序列分析证实后将HAb25-scFv基因亚克隆入pGFX4T-1GST融合表达载体上，SDS-PAGE电泳鉴定表达产物并建立目的蛋白的纯化方法；免疫荧光竞争实验鉴定HAb25-scFv单链抗体的活性。结果序...

不同IL-15转染对NCI-H446 HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响

关键词: 基因转染  nk杀伤敏感性  

目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响.方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL-15成熟肽基因的NCI-H446/IL-15mp细胞、转染原型IL-15基因的NCI-H446/IL-15细胞和转染以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因的NCI-H446/IL-2sp-IL-15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为...

新型升血小板因子的免疫原性实验研究

关键词: 新型升血小板因子  免疫原性  

目的明确自行研制的新型升血小板因子是否具有免疫原性.方法分别用佐剂、新型升血小板因子+佐剂、新型升血小板因子、鸡卵清蛋白+佐剂免疫BaIb/c小鼠,采用琼脂免疫扩散试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中的抗体.结果 ELISA法未检测到血清中的抗体;琼脂免疫扩散试验血清经72 h扩散观察未出现沉淀线,没有形成抗原抗体复合物.结论用新型...

鼠疫耶尔森氏菌核酸疫苗的构建及其免疫学评价

关键词: 鼠疫杆菌  f1抗原  v抗原  dna疫苗  免疫应答  

目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力.方法 PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS-7细胞.用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒加GM-CSF免疫Balb/c小鼠,观察免疫效果.结果F1和V均在COS-7细胞中表达;免疫鼠体内产生特异性抗体,pV...

人食管癌TE-1细胞MHC-Ⅰ相关抗原肽的初步研究

关键词: 食管肿瘤  抗原肽  高效液相色谱仪  

目的寻找TE-1细胞MHC-Ⅰ类分子提呈的抗原肽.方法用弱酸洗涤法获得TE-1细胞表面与MHC-Ⅰ类分子结合的抗原肽,经SepPak-C18柱、Centrion-3超滤器和RP-HPLC去盐纯化后,用负载该抗原肽的树突状细胞刺激生成肿瘤特异性杀伤细胞,以Cr51释放法测定CTL的杀伤活性.结果高效液相色谱图显示多个峰;负载抗原肽DC刺激的CTL比未负载抗原肽DC刺激的CTL对TE-1细...

登革2型病毒NS3基因的酵母表达及其免疫反应性的测定

关键词: 登革2型病毒  ns3基因  巴氏毕赤酵母  基因表达  抗体  

目的克隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因并用酵母真核表达,获得全长的重组NS3蛋白质,为其结构与功能的研究提供条件.方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清液中提取RNA,通过RT-PCR扩增NS3基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P.pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌诱导表达,SDS...

Genistein对HIV-1gp120抑制鼠LTP的实验研究

关键词: genistein  gp120  长时程增强  海马脑片  

目的为了探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)的包膜糖蛋白gp120引起大鼠海马脑片CA1区的长时程增强效应(Long-term potentiation,LTP)作用的影响.方法应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位EPSP,研究了Genistein对gp120引起的大鼠海马脑片CA1区的突触传递和可塑性变化的影响.结果 gp120对高频...

大鼠P450侧链裂解酶抗原决定簇多参数预测及合成

关键词: p450scc  抗原决定簇  合成肽  神经甾体  

目的预测大鼠P450侧链裂解酶(P450scc)的抗原表位,确定合成肽序列,并合成八分枝肽,制备多克隆抗体.方法根据P450scc的氨基酸序列,采用GOLDKEY核酸及蛋白质分析软件,多参数预测P450scc的抗原表位,筛选并确定合成肽序列.采用的方案包括抗原性、Hopp&Woods亲水性、可及性、柔韧性、电荷分布参数、二级结构β-转角和万氏综合表位参数方案.利用固相合...

免疫应答过程对小鼠习得性行为的影响及其相关分子机制的研究

关键词: 免疫记忆  被动回避行为  学习和记忆  

目的探讨免疫应答和免疫记忆的建立对大脑学习记忆能力的影响及分子机制.方法以绵羊红细胞作为外源性抗原激发小鼠免疫应答,建立免疫记忆;同时注射生理盐水作为对照组.应用跳台法对两组小鼠进行被动回避行为训练,以步下潜伏期为学习记忆成绩指标比较分析两组的差异.再取行为训练后小鼠脑做石蜡切片采用免疫组化法检测其海马结构内c-Fos蛋白的表...

移植物细胞因子表达与小肠移植排斥反应相关性的实验和临床病例研究

关键词: 小肠移植  排斥反应  细胞因子  

目的结合移植物细胞因子表达的实验和临床病例研究,探索早期诊断小肠移植急性排斥反应的细胞因子相关的敏感指标.方法①两例短肠综合症患者接受活体小肠移植术.定期或病情变化时随时行内镜组织学检查并测定受体大鼠移植物sIL-2R、IL-4、IL-6和IFN-γ表达水平.②BN-LEW大鼠部分小肠移植,A组:SBT(n=20);B组:SBT+FK506(2.5 mg/kg,n=20),术后第1、4、...

迪康胶囊抗大鼠肝纤维化作用机制的实验研究

关键词: 肝纤维化  星状细胞  中药  smad3  smad7  

目的通过迪康胶囊治疗不同剂量二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠,分离星状细胞检测胞浆Collagen-Ⅲ、α-SMA、Smad 3、Smad 7 mRNA表达的变化,以期了解其在抗肝纤维化作用中的分子机制,为其抗肝纤维化提供证据.方法 Wistar雄性大鼠共50只,分为病理1组、2组,治疗1组、2组,正常对照组.分别以不同剂量诱导形成肝纤维化模型并用迪康胶囊治疗.6周...

IL-18与急性移植物抗宿主病的关系

关键词: 急性移植物抗宿主病  小鼠  

目的探讨白细胞介素18(IL-18)与异基因小鼠骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系及作用机制.方法 C57BL/6小鼠随机分为A、B、C 3组,经60Co照射后,A、B组经尾静脉移植入Balb/c小鼠骨髓细胞,C组移植入C57BL/6小鼠骨髓细胞.移植后,A组注射IL-18,B、C组注射NS.测定B、C 2组小鼠血清IL-18浓度;比较A、B 2组小鼠aGVHD的程度,酶联免疫法(ELISA)测...

CD40-CD40L在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞上的表达

关键词: cd40l  cd40  强直性脊柱炎  fcm  

目的探讨共刺激分子CD40-CD40L在强直性脊柱炎(AS)患者的外周血淋巴细胞亚群上的异常表达与免疫功能紊乱的关系.方法用流式细胞仪采用直接免疫荧光法测定30例AS患者和20例健康对照人外周血淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD19的表达情况,CD40L在CD4+T和CD8+T细胞上的表达及CD40在CD19+B细胞上的表达.用速率散射比浊法测定血清中免疫球蛋白IgG,I...

钙动员诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞的信号转导

关键词: 钙离子载体  树突状细胞  信号转导  

目的初步探讨钙离子载体(CI)在体外迅速诱导人外周血单核细胞(PBMC)分化为树突状细胞(DC)的信号转导途径.方法分离健康献血者的PBMC,在体外用人重组粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和CI培养40h或rhGM-CSF和TNF-α培养5 d,部分PBMC用环胞菌素A(CsA)预处理30 min后,再加入CI或TNF-α;相差显微镜下观察细胞的形态;流式细胞仪检测细胞表面CD14、CD8...

癌胚抗原低亲和力表位改造中的分子对接

关键词: ctl  表位  分子对接  分子动力学  

目的通过分子对接方法筛选表位改造后的高亲和力CTL表位.方法在图形工作站上,将癌胚抗原来源的低亲和力表位及其N末端第一位残基以酪氨酸替换后的突变体,分别与MHC Ⅰ类分子进行对接,对接所得最佳构象进行600 ps分子动力学模拟修正.结果改造后的突变体与MHC分子间存在较强的氢键和疏水相互作用,组成肽结合槽口袋A的基Tyr7、Tyr171和Tyr159与多肽...

磁转联合脂质体实现高效细胞转染

关键词: 磁转  脂质体  转染  

目的优化体外培养细胞的外源基因转染方案.方法采用磁性微粒联合脂质体,将重组人绿色荧光蛋白表达载体(pAAV-IRES-hrGFP)外源DNA定向转染COS-7细胞,荧光显微镜下观察外源基因的表达,比较不同转染条件及DNA载量的细胞转染效果.结果 DNA与Combimag按1:1的比例混合转染可以得到很高的转染效率,过高的DNA载量使转染效率减低.结论利用磁转结合脂质体...

人MBL糖识别域在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

关键词: 甘露聚糖结合凝集素  糖识别域  融合蛋白  糖结合活性  

目的原核表达重组人甘露聚糖结合凝集素(MBL)糖识别域(CRD).方法采用PCR技术,从含汉族人MBL全长编码区cDNA的重组质粒pGEM-mbl中扩增出CRD包括颈区的基因片段,将其插入原核表达载体pGEX-4T1中,经PCR、限制性酶切和测序确证后,以IPTG诱导其在大肠杆菌中表达.包涵体经变性、复性后以GSTtrap亲和层析柱纯化,融合蛋白经凝血酶切割后回收目的蛋白.分...

rhsBLyS对B淋巴细胞增殖的影响

关键词: 流式细胞术  rhsblys  b淋巴细胞  

目的测定可溶性重组人B淋巴细胞刺激因子(rhsBLyS)对B细胞的促增殖活性.方法通过FluroBeads B荧光磁珠法体外分离并培养人B淋巴细胞,以CD20的特异性抗体标记之,借助流式细胞术检测.结果 rhsBLyS非融合蛋白在引发剂Anti-IgM的协同作用下表现出显著刺激B淋巴细胞增殖的活性.结论流式细胞术检测简便高效,在验证样品活性的同时为进一步开展工作奠定...

早期诊断心肌损伤肌球蛋白胶体金免疫层析法研究

关键词: 胶体金  免疫层析  心肌损伤  心肌肌球蛋白  

目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌损伤的胶体金免疫层析法(GICA).方法制备胶体金标记抗Myosin多肽抗体,抗Myosin单克隆抗体,结合垫和样品垫的处理,组装免疫层析试纸条.检测患者血清中Myosin,进行敏感性和特异性评定.结果测试条灵敏度可达5 ng/mL.检测30例急性心肌梗塞(AMI)患者血清Myosin水平,并与Roche肌钙蛋白胶体金免疫层析试剂条比较...

糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7.1融合蛋白在CHO／DHFR^-细胞的稳定表达

关键词: 真核表达  

目的建立稳定表达糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1(GPI-B7-1)的CHO/DHFR-细胞表达体系.方法用Lipofectin介导法将真核细胞高效表达载体pCDNA3-GPI-B7-1和pSV40-DHFR共转染CHO/DHFR-细胞,经免疫荧光流式细胞术检测,并提取膜蛋白进行Westen blot检测.结果经G418筛选和MTX加压扩增,获得高效表达目的蛋白的细胞株.膜蛋白经Western Blot检测具有生物活...

抗AIF单链抗体的构建与高效表达

关键词: 酸性同功铁蛋白  单链抗体  包涵体  柱内复性  

目的获得具有生物活性的抗酸性同功铁蛋白(AIF)单链抗体.方法利用重组噬菌体抗体库技术从杂交瘤细胞4c9中分别克隆小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,成功构建AIF4c9 scFv基因,并将其亚克隆于原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3),经IPYG诱导表达.表达产物经镍鏊合层析柱复性后,用ELISA和Western blotting检测表达蛋白与AIF的结合...

抗人粒细胞单克隆抗体的特异性鉴定及其核素^99Tc^m标记

关键词: 粒细胞  单克隆抗体  

目的以人粒细胞免疫Balb/c小鼠制备抗粒细胞单克隆抗体(mAb),并对其组织特异性进行鉴定,同时评价其在兔炎症模型中的显像价值.方法常规免疫制备抗粒细胞mAb经间接ELISA法、流式细胞仪和SP免疫组化进行特异性鉴定.99Tcm间接法标记SZ-102.兔左下肢炎症模型制备完毕,耳缘静脉注入99Tcm-SZ-102 4 h后探讨其在兔炎症模型中的体内分布.结果制备抗粒细...

本刊重要启事

RNAi作用机制研究进展及其应用

关键词: rnai  基因沉默  基因功能分析  

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing,PTGS)[1].RNA干扰可以简单、有效、特异地下调细胞中基因的表达,它不但是研究基因功能的一种有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段.本文介绍了目前RNA干扰作用机制,与之相关的酶、蛋白、"扳机...

人穿孔素基因真核表达载体的构建与表达分析

关键词: 基因真核表达载体  表达分析  穿孔素  肿瘤特异性  mhc抗原  t细胞受体  ctl细胞  杀伤细胞  

早在十多年前,人们就发现肿瘤特异性杀伤细胞(Tumorspecific cytolytic T lymphocytes,CTL)含有很多颗粒,当CTL细胞的T细胞受体与靶细胞的MHC抗原结合后,通过Ca2+依赖途径使颗粒极化并向外释放,从而产生对靶细胞的攻击作用,经研究证实这些颗粒中含有人穿孔素(PFP)[1].在静止的CD8+细胞毒性前体细胞内PFP表达水平非常低,然而,一旦激活,其PFP表达...

《免疫学杂志》2005年（第21卷）目次索引