农业生物技术学报杂志

海岛棉GbRac1基因过量表达提高转基因烟草离体叶片对赤星病的抗性

关键词: 离体叶片  海岛棉  转基因烟草  过量表达  抗性  northern  植物抗病基因工程  棉花黄萎病菌  植物表达载体  抗病性鉴定  烟草赤星病  race  简并引物  编码基因  blot  转录水平  mrna  nc89  应用价值  pcr  分析表  表达量  组成型  诱导  

利用简并引物PCR和3’RACE，克隆了海岛棉(Gossypium barbadense)GbRac1的编码基因。Northern—blot分析表明，海岛棉GbRac1基因在转录水平上受棉花黄萎病菌(Verticillium dehliae)的诱导，诱导后mRNA表达量显著增加。构建组成型植物表达载体pRac，转化烟草(Nicotiana tabacum)品种NC89，离体叶片抗病性鉴定表明，转GbRac1基因烟草对烟草赤星病(...

大规模RNA阵列验证水稻茎组织特异性高表达基因

关键词: rna  组织特异性  特异性表达基因  水稻  验证  阵列  规模  茎  生物信息学分析  cdna文库  cdna探针  蛋白基因  est数据库  特异性基因  结合蛋白  诱导蛋白  微管蛋白  相关基因  光合作用  生化过程  营养缺乏  环境条件  稳定表达  

在前期大规模水稻(Oryza sativa)EST测序和生物信息学分析的工作中，发现一些在茎cDNA文库中高水平表达基因，包括叶绿素a／b结合蛋白(T007D10)、富脯氨酸蛋白(S037D04)、脱落酸和逆境诱导蛋白(S057803)、微管蛋白(S060D11)等基因。为验证这些基因是否为茎特异性表达基因，选择高冗余度的EST克隆制备cDNA探针，与高通量的RNA阵列进行杂交。结果...

高赖氨酸蛋白质基因和bar基因导入水稻及转基因植株的检测

关键词: 高赖氨酸  转基因植株  基因导入  southern  中优早5号  赖氨酸含量  蛋白质含量  植物表达载体  bar基因  基因枪法  愈伤组织  再生植株  检测结果  blot  外源基因  植株表现  水稻种子  成熟胚  pcr  基因组  ppt  分析表  籼稻  幼胚  

构建了1个含高赖氨酸蛋白质基因和bar基因的植物表达载体，用基因枪法将其分别导入籼稻(Oryza sativa ssp．indica)中优早5号幼胚和龙特甫B成熟胚诱导的愈伤组织中，筛选后得到16株可育的再生植株。PCR和Southern blot检测结果表明，外源基因已整合到水稻的基因组中。T1代植株表现出对PPT的抗性。对部分T1代转基因水稻种子进行分析表明，中优早5...

Ac／Ds双元激活标签体系用于建立水稻突变体材料

关键词: 水稻  体材料  突变  激活  35s启动子  分析结果  转座子标签  串联重复  转化植株  ds  增强子  基因组  体细胞  pcr  600  株系  频率  切离  位点  载体  

将含有两个35S启动子和4个串联重复的35S增强子的Ac／Ds双元转座子标签载体转入水稻(O／yza sativa L．)基因组。100个转化植株的分析结果表明，Ds在T0植株的体细胞中切离频率高达60％。20个T1株系的600个T1植株的PCR分析结果表明，14个株系(70％)表现出较高的切离频率(约43％～100％)。Southem杂交发现在同一T1株系的不同植株中Ds转座既有相同...

编码日本梨树（Pyrus pyrifolia）花粉类β-1，3-葡聚糖酶蛋白的cDNA克隆与核苷酸序列

关键词: 日本梨树  cdna克隆  酶蛋白  核苷酸序列  编码  序列相似性  氨基酸残基  粉类  cdna文库  非翻译区  3d结构  生长相关  花粉管  簇分析  同源性  信号肽  分子量  pi值  禾谷类  组成  大麦  模式  诊断  位点  

构建了日本梨树(Pyrus pyrifolia)花粉cDNA文库，发现了一个编码花粉管分泌的类β-1，3-葡聚糖酶蛋白(BGN-1)的cDNA(bgm-I)许测定了其序列：bgn-I由1408bp组成，包括47bp的5’-非翻译区，由1194bp组成并编码了397个氨基酸的ORF和167bp的3’-非翻译区。3’-非翻译区含有1个NLTE(AATTAA)和3个似FUE的基序，分别位于1369～1374(AAT—TAA)、1320～132...

棉花DNA遗传转化系的农艺性状变异和SSR标记分析

关键词: 转化系  dna遗传  标记分析  性状变异  农艺  花粉管通道技术  ssr分子标记  外源dna导入  ssr引物  棉花  豫棉17  ssr标记  海岛棉  栽培品种  纤维品质  扩增产物  纤维长度  性状分析  稳定遗传  变异性状  陆地棉  受体  多态性  变异系  

利用花粉管通道技术，将海岛棉(Gossypium barbadense)DNA导入陆地棉(G.hisutum)栽培品种豫棉17号中，获得了HB1、HB2、HB3和HB44个遗传转化系，其纤维品质、衣分、铃重与供体和受体相比有显著的差异。通过145对SSR引物的筛选和鉴定，检测出4对引物的多态性。BNL786、BNL2449等SSR引物在子代变异系HB1～HB4的扩增产物的带型明显不同于其受体，表...

柿和君迁子SSR分析技术的建立

关键词: 君迁子  分析技术  ssr  dna聚合酶  最佳反应体系  buffer  退火温度  核苷酸序列  核酸数据库  微卫星引物  pcr扩增  柿属植物  软件设计  引物浓度  taq  mol  

通过搜寻核酸数据库中柿属植物核苷酸序列，利用Sputnik程序查找微卫星，利用Primer Premier5．0软件设计特异微卫星引物，并对影响PCR扩增的Mg^2+．dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物浓度，以及退火温度等因素进行优化。最终确定柿(Diospyros kaki)和君迁子(D．lotus)SSR-PCR最佳反应体系为：模板DNA30ng，Buffer 1×，Mg^2+2．5mmol／L，dNTPs 0．2mm...

低温预处理和高温饥饿胁迫对冬小麦小孢子胚胎发生和植株再生的影响

关键词: 低温预处理  胚胎发生  植株再生  冬小麦  高温  胁迫  饥饿处理  小麦基因型  小孢子胚胎  单倍体育种  限制作用  胚胎发育  低温处理  生长速度  再生能力  培养基  诱导  产量高  麦穗  绿苗  花药  

以几种不同基因型的冬小麦(Triticum aestivum)为材料，研究了低温预处理(单核早期的离体麦穗，4℃，处理3周)和高温饥饿胁迫(上述处理过的麦穗的花药，置于饥饿培养基B中，33℃处理4d)对几种冬小麦基因型小孢子胚胎发生和植株再生的影响。结果表明：高温饥饿处理后，供试6种基因型都得到了诱导胚，其中F1-2获得的胚最多，为107．2／穗；低温预...

利用Cre／loxp定位重组系统构建雄性不育基因和恢复基因表达载体

关键词: 基因表达载体  雄性不育基因  系统构建  定位  除草剂basta  nos终止子  肌动蛋白  植物表达载体  基因表达盒  cre基因  dna扩增  pcr方法  启动子  杂种一代  重组系统  克隆载体  克隆测序  恢复基因  插入  反义  位点  n基因  筛选剂  

结合Cre/lox定位重组系统和杂种一代的育种特点，构建了反义肌动蛋白雄性不育基因表达载体pCABARTAAct和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pSTAAct中的反义肌动蛋白雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、反向插入TA29启动子下游的Actin基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGloxp两个同向lox位点之间，再将上述表达盒连同lox位点切下...

电脉冲激活对体外成熟猪卵母细胞卵裂率和囊胚率的影响

关键词: 囊胚率  卵裂率  电脉冲  猪卵母细胞  体外成熟  dmap  细胞松驰素  化学物质  放线菌酮  细胞激活  差异显著  时间处理  激活方法  二甲基  cm  6kv  电激活  孤雌胚  cb  

兔出血症病毒NJ85株衣壳蛋白基因在原核系统中的高效表达

关键词: 兔出血症病毒  衣壳蛋白基因  高效表达  原核系统  vp60  原核表达质粒  rhdv  virus  基因长度  page  免疫印迹  抗体反应  流行株  分析表  同源性  pet  sds  总蛋白  表达量  分子量  抗原性  中国  重组  克隆  体形  

从兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)中国早期流行株NJ85中成功地克隆出衣壳蛋白(VP60)基因。序列分析表明该基因长度为1740nt，编码579aa，与已报道的另2个RHDV中国毒株WX84和TP的VP60基因的同源性分别为92．7％和97．2％。构建了NJ85株VP60基因原核表达质粒pET—VP60，用SDS—PAGE分析，重组VP60蛋白的表达量占菌体总蛋白...

运送鹅源新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌及其免疫原性

关键词: dna疫苗  减毒沙门氏菌  鹅源新城疫病毒  免疫原性  运送  减毒鼠伤寒沙门氏菌  genbank  真核表达载体  病毒分离株  pcr扩增  基因序列  融合蛋白  抗体应答  免疫小鼠  免疫应答  f基因  f蛋白  ndv  特异性  

体外消化过程中低分子量寡肽释放量与饲料品质的关系

关键词: 低分子量  消化过程  寡肽  饲料品质  释放量  中空纤维超滤  氨基酸组成  截留分子量  酶水解产物  游离氨基酸  必需氨基酸  胰蛋白酶  胃蛋白酶  消化环境  体外消化  总氨基酸  饲料蛋白  组分  胃肠道  正相关  肽含量  

应用胃蛋白酶．胰蛋白酶，模拟鸡胃肠道消化环境，对4种饲料(鱼粉、豆粕、棉粕和菜粕)进行体外消化，研究体外消化过程中不同饲料的寡肽释放特点与其氨基酸组成的关系。4种饲料的体外酶水解产物分别经过截留分子量为3kD和1kD的中空纤维超滤组件处理，制备8种低分子量组分。测定各组分中总氨基酸(TAA)和游离氨基酸(FAA)含量，RP-HPLC法分析各组分...

FAS和HSL mRNA在猪背最长肌的表达及其与肌内脂肪含量的关系

关键词: 肌内脂肪含量  背最长肌  hsl  fas  脂肪酸合成酶  激素敏感脂酶  mrna水平  基因表达水平  百分含量  acid  脂肪沉积  imf  样品  苏太猪  肥育期  fat  相关性  正相关  测定  个体  比值  

鸡γ干扰素对H5亚型禽流感疫苗的免疫增强作用

关键词: 免疫增强作用  h5亚型禽流感疫苗  h5亚型禽流感病毒  重组鸡痘病毒  灭活疫苗  母源抗体  联合免疫  抗体应答  免疫保护  商品鸡  血凝素基因  保护率  spf鸡  诱导  应用  spe  hi  表达  水平  效力  组合  剂量  接种  

利用表达鸡γ干扰素的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)或灭活疫苗联合应用，接种SPE鸡、无母源抗体商品鸡和含有母源抗体商品鸡，研究鸡γ干扰素的免疫增强作用。结果发现，rFPV-IFN-γ和rFPV-HA联合应用诱导的HI抗体应答水平同rFPV-HA单独免疫相近；rFPV-IFN-γ和灭活疫苗联合应用后HI抗体应答水...

家蚕茧色限性品种雌雄绢丝腺组织蛋白质组双向凝胶电泳分析

关键词: 凝胶电泳分析  蛋白质组  限性品种  家蚕  绢丝腺  计算机辅助分析  雌雄  茧色  双向凝胶电泳  比较分析  组织细胞  限性黄茧  均匀分布  未知基因  w染色体  600  表达量  分离  中部  雄蚕  银染  

采用双向凝胶电泳和计算机辅助分析方法，分别对家蚕(Bombyx mori)限性黄茧品种雌蚕(黄茧)和雄蚕(白茧)的中部丝腺组织细胞蛋白质进行分离和比较分析。用银染的方法，两张图谱均可见到分离出600个以上的点，这些蛋白主要集中在20-70kD区域，在pH4-7上几乎均匀分布。比较分析发现，结黄茧的雌蚕中部丝腺组织细胞一些蛋白质的表达水平明显高于结白...

花生矮化病毒（PSV）Mi株系RNA3全序列分析

关键词: 花生矮化病毒  全序列分析  rna3  株系  序列同源性  开放阅读框架  psv  virus  核苷酸序列  氨基酸序列  and  运动蛋白  cp基因  壳蛋白  变异性  er  全长  cp  r区  

完成了中国花生矮化病毒(Peanut stunt virus,PSV)Mi株系RNA3全序列分析。PSV—MiRNA3全长2170个核苷酸，含两个开放阅读框架(ORE)，分别编码3a运动蛋白和壳蛋白(CP)。PSV-MiRNA3核苷酸序列和PSV亚组IER和J株系同源性为77．7％和78．5％，与亚组ⅡW株系同源性为76．7％；同一亚组ER和J株系RNA3序列同源性为91％。PSV—Mi3a和cp基因与PSV-ER，J a...

侵染东方百合的黄瓜花叶病毒两个分离物cp基因克隆和进化分析

关键词: 黄瓜花叶病毒  东方百合  分离物  进化分析  基因克隆  系统进化树  侵染  cp基因  同源性比较  寄主适应性  cmv  浙江丽水  序列测定  外壳蛋白  基因序列  地域差异  株系分化  核苷酸  氨基酸  分析表  水平  全长  

从浙江丽水和杭州的东方百合(Lilium cv．Oriental hybrids)上得到2个黄瓜花叶病毒分离物CMV-LS和CMV-HZ，采用RT-PCR法分别扩增得到2条长约1000nt片段，经序列测定，全长分别为996nt和998nt，两分离物的外壳蛋白(cp)基因由657nt组成。将两分离物的cp基因与其它24个CMV分离物进行了同源性比较，在cp基因核苷酸水平上，CMV-LS与亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的...

地衣芽孢杆菌β-1，3-1，4葡聚糖酶基因的克隆和表达

关键词: 地衣芽孢杆菌  葡聚糖酶基因  克隆和表达  genbank  短小芽孢杆菌  重组表达载体  pcr克隆  blast  基因工程菌  大肠杆菌  最适温度  最适ph  同源性  基因组  氨基酸  分子量  等电点  基因库  双酶切  特性表  耐热性  

提取地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)基因组，通过PCR克隆了该菌的β-1，3-1，4．葡聚糖酶基因全长。该基因全长818bp,ORF为732bp,编码243个氨基酸，计算分子量为27.35kD，等电点为8．31。经Blast分析，该序列与短小芽孢杆菌(B．pumilus)同源性最高(99％)，而与基因库中地衣芽孢杆菌的同源性为94％，该基因已被GenBank接受(AY225317)。用Ba...

曲霉Aspergillus sojae壳聚糖酶的诱导及特性

关键词: aspergillus  壳聚糖酶  诱导  曲霉  蛋白质分子量  羧甲基纤维素  几丁质  乙酰氨基  摇瓶培养  薄层层析  培养基  酵母膏  蛋白胨  min  同工酶  内切酶  分解  乙二醇  乙酰化  干粉  产物  

曲霉(Aspergillus sojae)在Czapek-Dox培养基中加入2％N-乙酰氨基葡糖、1％蛋白胨和0．5％酵母膏，26℃、150r／min摇瓶培养下，在60h诱导产生较强的壳聚糖酶活性(达12．34mU／mL)，同时形成了4种壳聚糖同工酶，CHA1、CHA2、CHA3和cHA4，蛋白质分子量约为38．2、30．8、27．7和25．0kD。对诱导的壳聚糖酶部分特性初步研究表明，该酶属于壳聚糖内...

短小芽孢杆菌β-1，4-木聚糖酶基因在大肠杆菌中的高效表达

关键词: 短小芽孢杆菌  木聚糖酶基因  大肠杆菌  高效表达  重组表达  可溶性蛋白  最适ph值  表达载体  iptg  表达产物  na基因  最适温度  碱性条件  降解产物  工程菌  培养物  稳定性  克隆  体形  活力  

从短小芽孢杆菌(Bacillus purnilus)BP51中克隆得到木聚糖酶基因xynA。将其构建在大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET21a上，转化Ecoli BL21，获得重组工程菌BLX5。经IPTG诱导，xynA基因的表达产物以胞内可溶性蛋白和包涵体形式存在。重组表达木聚糖酶的活力可达165．511U／mL培养物。重组表达的木聚糖酶最适温度为55℃，最适pH值为6．5，在...

通过导人几丁质酶基因提高荧光假单胞杆菌P5的生防效果

关键词: 荧光假单胞杆菌  几丁质酶基因  生防效果  小麦全蚀病  水稻纹枯病  工程菌株  重组质粒  dna片断  穿梭质粒  大肠杆菌  野生菌株  抑菌效果  立枯病  实验  棉花  盆栽  

从质粒pUC1965得到含有几丁质酶基因的6．5kb DN断，将该基因与大肠杆菌-荧光假单胞杆菌穿梭质粒pDSK519连接，获得重组质粒pDSK51965。重组质粒转入荧光假单胞杆菌(Pseudomonas flurescence)P5，获得工程菌株fluorescence P5-1。与野生菌株相比，平板拮抗实验表明，工程菌株对小麦全蚀病(Gaeumannomyces graminis vat．tricici)、水稻纹枯病(Rh...

生物固氮研究中的蛋白质组学

关键词: 蛋白质组学  生物固氮  自生固氮菌  生命科学  研究概况  豆科植物  根瘤菌  创新性  应用  活力  

生物固氮为全球的植物提供75％的氮素，是生命科学中的重大课题。蛋白质组学新思想、新技术的引入，为固氮研究的发展注入了新的活力。本综述主要介绍蛋白质组学在自生固氮菌、根瘤菌及其与豆科植物结瘤固氮中的蛋白质组学的研究概况，以助于在我国生物固氮研究中应用这一有力工具，推动和发展其基础和应用的创新性研究。

人乳铁蛋白转基因研究进展

关键词: 人乳铁蛋白  研究进展  转基因研究  乳铁蛋白基因  糖基化蛋白  生理功能  理化性质  研究成果  铁离子  可逆性  结构  

人乳铁蛋白是一种具有多种生理功能的糖基化蛋白，可可逆性地结合两个铁离子。概述了人乳铁蛋白的结构和理化性质，以及乳铁蛋白基因的结构，并着重论述了人乳铁蛋白转基因研究的状况和主要研究成果。在此基础上，提出了尚未解决的问题，并展望了人乳铁蛋白转基因研究的前景。

马铃薯AP1抗病传导链中蛋白元件的鉴定

关键词: 马铃薯  ap1  酵母双杂交系统  鉴定  元件  cdna文库  信号传导途径  链  蛋白质  api  相互作用  体外研究  信号传递  植物抗病  编码基因  可替代  

酵母双杂交系统的建立为在体外研究蛋白质问的相互作用提供了可能，在验证植物与病原物相互识别过程中是否发生蛋白质与蛋白质的互作及研究植物抗病信号传递链中发挥了不可替代的重要作用。本研究以马铃薯抗病蛋白API编码基因为诱饵，从cDNA文库中捕获与API发生互作的蛋白，研究围绕API蛋白的与抗病有关信号传导途径。

Chi基因导人对转Bt棉花抗病虫性的影响

关键词: 抗病虫性  棉花  i基因  bt  几丁质酶  gk19  抗棉铃虫  抗枯萎病  抗虫棉  新株系  黄萎病  

将几丁质酶(chitinase，Chi)基因导人国产抗虫棉GK19中，目前已选出既抗病又抗虫的棉花新株系，1999～2002年在北京对其抗枯萎病和黄萎病以及抗棉铃虫性进行了研究。

人溶菌酶基因的克隆及其在真核菌株中表达质粒pPIC9K／hLZM的构建

关键词: 溶菌酶基因  表达质粒  构建  巴斯德毕赤酵母  克隆  pcr技术  cdna  胎盘组织  快速筛选  g418  酵母菌株  高效表达  真核细胞  人溶菌酶  全序列  反应器  

利用RT—PCR技术，从人的胎盘组织中直接扩增出溶菌酶基因(hLZM)的cDNA全序列，插入到质粒pPIC9K上，转化巴斯德毕赤酵母KM71，通过G418快速筛选，构建出能够高效表达人溶菌酶基因的重组毕赤酵母菌株，作为真核细胞反应器，用以生产人溶菌酶。

短沟对虾和凡纳对虾溶菌酶cDNA的克隆与序列分析

关键词: 溶菌酶  序列分析  cdna  凡纳对虾  短沟对虾  克隆  免疫因子  生物体内  免疫过程  机体防御  序列差异  进化地位  肽聚糖  细胞壁  细菌  糖苷键  鸡蛋清  氨基酸  噬菌体  植物  

溶菌酶是生物体内重要的非特异免疫因子之一，能催化细菌细胞壁肽聚糖中的β-1，4糖苷键的水解，导致细菌溶解死亡。同时在引发和维持机体防御免疫过程中起重要作用。按溶菌酶进化地位和氨基酸序列差异可分为5类：鸡蛋清溶菌酶(c-型)、鹅溶菌酶(g-型)、噬菌体溶菌酶(p-型)、植物溶菌酶和细菌溶菌酶。

瞬时表达黄瓜花叶病毒部分复制酶基因和番茄花叶病毒移动蛋白基因的dsRNA能阻止相关病毒的侵染

关键词: dsrna  瞬时表达  移动蛋白基因  番茄花叶病毒  黄瓜花叶病毒  复制酶基因  侵染  相关  根癌农杆菌介导  抗病毒基因工程  rna沉默  植物细胞  非转基因  干涉作用  重复片段  重组载体  快速预测  叶片组织  表达法  转录  

根癌农杆菌介导的瞬时表达法已开始用于研究RNA沉默，在非转基因植物细胞中，如能建立借助于根癌农杆菌介导的瞬时表达法。考察反向重复片段转录出的dsRNA对入侵病毒的干涉作用，则可以快速预测所构建重组载体用于抗病毒基因工程的效果。本研究证明用根癌农杆菌浸润法在植物的叶片组织中瞬时表达dsRNA，可以阻止相关病毒的侵染。