农业生物技术学报杂志

畜禽基因工程疫苗及诊断技术产业发展现状与前景

关键词: 基因工程疫苗  诊断技术  产业发展  畜禽  基因工程技术  基因缺失疫苗  伪狂犬病毒  猪伪狂犬病  产业化现状  动物疫病  标记疫苗  发展前景  研究开发  应用  

最近20年,畜禽基因工程疫苗及动物疫病诊断技术的开发随着基因工程技术的发展取得了显著的进展.伪狂犬病毒基因缺失疫苗及其相应的鉴别诊断技术,成功地应用于猪伪狂犬病根除计划,表明基因工程标记疫苗将具有广阔的应用前景.本文将针对畜禽基因工程疫苗及诊断技术的研究开发和产业化现状及发展前景作一概述.

甘露糖阳性选择系统的建立及在番茄转化中的应用

关键词: 选择系统  甘露糖  番茄  应用  阳性  卡那霉素抗性基因  植物表达载体  根癌农杆菌介导  选择标记基因  遗传转化  pcr克隆  pcr扩增  大肠杆菌  序列测定  基因替换  再生植株  转化植株  酶基因  pmi  敏感性  导入  生根  

利用PCR克隆了大肠杆菌(Escherichia coli) 6-磷酸甘露糖异构酶基因(pmi)并进行了序列测定.将该基因替换植物表达载体pCAMBIA2301中的卡那霉素抗性基因,构建了以pmi为选择标记基因的植物表达载体pPMI,并导入根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)EHA105中.研究了甘露糖对番茄(Lycopersicum esculentum)生长和生根的影响及叶盘对甘露糖的敏感性....

十字花科植物CYP86MF同源基因的克隆及特征分析

关键词: 十字花科植物  特征分析  同源基因  细胞色素p450  氨基酸序列  克隆  race技术  氨基酸同源性  p450基因  蛋白二级结构  cdna  pcr扩增  氨基酸残基  保守结构域  氨基酸组成  特异引物  基因家族  亲缘关系  预测结果  大白菜  诸葛菜  数据库  

用保守的特异引物进行PCR扩增,并结合RACE技术,从大白菜(Brassica campestrisL.)品种黄芽14,萝卜(Raphanus sativusL.)品种圆白和诸葛菜(Orychophrogmus violaceus)3个材料中扩增到3个完整的cDNA全长,分别命名为Bc-CYP86MF,RsCYP86MF和OvCYP86MF,它们的cDNA全长分别为1 854,1 818和1 876 bp,分别编码524,526和534个氨基酸残基.将所推导的氨基酸...

根癌农杆菌介导苜蓿遗传转化体系的建立

关键词: 遗传转化体系  根癌农杆菌介导  苜蓿  转badh基因  高频再生体系  转化频率  乙酰丁香酮  菌株介导  菌液浓度  卡那霉素  培养时间  抗性植株  blot  目的基因  分析法  gus  基因型  预培养  pcr  基因组  

以建立的苜蓿高频再生体系为基础,利用GUS染色组织分析法,研究了影响根癌农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensConn)LBA4404菌株介导的苜蓿(Medicagosativa L.)遗传转化的若干因素,建立了苜蓿快速有效的遗传转化体系,获得了转BADH基因植株.苜蓿的不同基因型、附加乙酰丁香酮的浓度、预培养与否、菌液浓度、共培养时间和卡那霉素浓度等对转化频率都有...

农杆菌T-DNA转化桑树的表型分析

关键词: dna转化  表型分析  桑树  根癌农杆菌  细胞分裂素  dna导入  pcr检测  种子培育  形态异常  分生组织  扦插繁殖  共同作用  表型差异  杂交桑  野生型  突变体  基因组  嵌合体  生长素  幼年  株系  月龄  介导  刺伤  腋芽  摘芯  

用自然杂交桑种子培育的3月龄幼年桑(Morus alba L.)作材料,以野生型根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)的突变体M-21介导,将根癌农杆菌T-DNA导入桑树基因组中.将幼年桑摘芯后用细针对腋芽分生组织刺伤感染获得4个形态异常的株系.PCR检测表明:4个株系都有T-DNA插入.将当代(T0)进行扦插繁殖获得T1代,T1表现出与T0不同的性状,显然T0是由正常产...

基因枪法转化棉花胚性愈伤组织获得转基因植株

关键词: 胚性愈伤组织  转基因植株  基因枪法转化  棉花  基因枪轰击法  pcr扩增  gus基因  基因枪转化  质粒dna  外源基因  评价指标  瞬时表达  peg法  碱裂解法  卡那霉素  gus  试剂盒  启动子  提取  导入  玉米  选优  

以川棉(Gossypium hirsutum)239胚性愈伤组织为受体,用基因枪轰击法导入外源基因,获得了经GUS组织染色和PCR扩增鉴定的转基因植株.以gus基因瞬时表达蓝点数为评价指标,考察了影响基因枪转化棉花胚性愈伤组织的几个因素,结果表明:使用碱裂解法提取和PEG法纯化的质粒DNA,优于试剂盒大量提取的DNA;当轰击压力为10.7 MPa时,轰击距离6或9 cm较好;轰前...

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆与原核表达

关键词: 3abc基因  非结构蛋白  o型口蹄疫病毒  western  原核表达载体  基因工程产品  virus  pcr扩增  定向克隆  表达产物  blot  大肠杆菌  重组载体  技术条件  免疫动物  自然感染  鉴别诊断  抗原  

以O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth diseasevirus,FMDV)为研究对象,通过RT-PCR扩增到非结构蛋白3ABC基因,定向克隆到原核表达载体pET-42a上.表达产物经SDS-PAGE和Westernblot检测,证明重组载体pET-42a-3ABC成功地在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达了3ABC蛋白,这一研究为建立以基因工程产品为抗原、鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条...

猪圆环病毒2型BF株ORF2基因在大肠杆菌中的表达

关键词: 猪圆环病毒2型  orf2基因  大肠杆菌  western  f株  重组蛋白  重组质粒  表达载体  半乳糖苷  结构蛋白  基因编码  融合蛋白  blot  阳性血清  pcv2  pcr  异丙基  分子量  表达量  克隆  

采用PCR从构建的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2重组质粒(pGEM-T-ORF2)中扩增出大小为593bp的ORF2基因,克隆到表达载体pET-32a,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,成功表达了ORF2基因编码的结构蛋白.表达的重组蛋白为融合蛋白,分子量40 kD,表达量20%左右.经Western-blot检测,重组蛋白可被PCV2阳性血清识别.

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2基因克隆、序列分析及表达

关键词: 胸膜肺炎放线杆菌  铁结合蛋白  传染性  基因克隆  序列分析  核苷酸同源性  猪  特异性引物  pcr方法  参考序列  定向克隆  大肠杆菌  高效表达  t载体  片段  血清  测序  

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)血清5型菌株序列Z46774设计1对特异性引物,用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因,得到1条1 624bp的片段,然后克隆到pMD18-T载体中,经测序比较,与参考序列的核苷酸同源性达99.8%,从T-载体中切下目的片段后,定向克隆到pET32a(+)中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经诱导...

猪个体DNA甲基化百分差异与胴体性状的关系

关键词: 猪  个体dna甲基化百分差异  胴体性状  甲基化敏感扩增多态技术  msap  分子标记  杂种优势  

以77头大白×梅山猪杂交F1代3月龄血液样DNA为材料,应用甲基化敏感扩增多态技术(MSAP),研究了胴体性状的影响因素.从个体全部甲基化百分差异、个体中性甲基化百分差异和个体特殊甲基化百分差异3个层次分析了其对胴体性状的影响.15个胴体性状在个体中性甲基化百分差异水平之间均无显著的差异(P＞0.05);内脂率、瘦肉率和瘦肥肉比例在个体全部甲基化...

猪肥胖基因片断的克隆及不同日龄猪肥胖基因表达的差异

关键词: 基因表达  不同日龄  基因片断  猪  序列同源性  vector  基因cdna  肥胖基因  脂肪组织  基因片段  pcr扩增  氨基酸组成  皮下脂肪  easy  大肠杆菌  阳性克隆  主体部分  上升趋势  rna  基因组  分析表  成熟肽  半定量  载体  多肽  

从杜长嘉(Duroc×Landrace×Taihu)猪的皮下脂肪中提取基因组RNA,用RT-PCR扩增肥胖基因(obese gene;ob),获得1条504bp的片断,以pGEM-T EasyVector为载体,将该基因片断克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)中.从筛选到的阳性克隆中分离出肥胖基因,测定其序列,分析表明该片段为肥胖基因cDNA的部分序列,编码167个氨基酸组成的多肽,是成熟肽的主体部分.研...

鸡的酪氨酸酶基因5’调控区的单链构象多态性分析

关键词: 单链构象多态性分析  酪氨酸酶基因  鸡  中国农业大学  上游调控区  基因调控区  色素合成  s位点  关键酶  r基因  相关性  黑色素  f2代  亲代  胫色  

酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)是动物黑色素合链构象多态性(SSCP)分析,发现在该区域内存在3个单核苷酸多态(SNP)位点,并分析了SNPs位点与中国农业大学资源群体亲代(P)和F2代个体黑色素性状的相关性.结果显示TYR基因调控区SNPs位点与鸡的胫色和皮肤色显著相关.

低分子量热激蛋白Bmhsp19．9基因的表达

关键词: 热激蛋白  低分子量  基因  表达模式  后部丝腺  表达量  脂肪体  表达分析  表达差异  生长发育  持续时间  生命活动  细胞分裂  作用方式  作用效应  作用对象  分子伴侣  热刺激  组织  应激  精巢  定量  卵巢  诱导  分化  血液  

利用RT-PCR技术,对家蚕(Bombyxmori)低分子量热激蛋白Bmhsp19.9基因进行了定量表达分析.Bmhsp19.9在各组织中均有一定量的表达,但不同组织间的表达差异达10多倍,表达量丰富的组织是生长发育旺盛的组织,如精巢和卵巢,然后是丝腺、蛹等组织.其应激表达模式可分为3类,以其在精巢、后部丝腺和脂肪体中的强应激表达模式为主,经热刺激处理后其表达量有...

家蚕质多角体病毒RDRP基因的克隆、表达及定位

关键词: 家蚕质多角体病毒  rdrp  克隆  定位  genbank  病毒粒子  virus  dsrna  bmcpv  cpv病毒  mori  基因序列  表达质粒  质粒载体  大肠杆菌  iptg  重组蛋白  免疫标记  柱状细胞  病毒衣壳  胶体金  中国株  序列号  分子量  标记率  复合物  

应用分段RT-PCR的方法从家蚕质多角体病毒(Bombyxmori cytoplasmicpolyhedrosis virus,BmCPV)中国株的dsR-NA中成功地克隆了RDRP基因(RNA-dependent RNA polymerase),基因序列全长3 691bp,并登录GenBank,序列号为AY496445.利用质粒载体pET-28b成功地构建了表达质粒pET28b-RDRP,并用IPTG诱导的方法在大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)中获得表...

棉花脂肪酸脱氢酶-2（FAD2）转基因小鼠模型的建立

关键词: 转基因小鼠模型  脱氢酶  脂肪酸  棉花  southern  cdna序列  真核表达载体  gfp基因  多克隆位点  pcr方法  编码序列  编码基因  动物肌肉  acid  注射方法  胚胎移植  成年小鼠  blot  受精卵  启动子  线性化  阳性  质粒  原核  受体  

以pEGFP-N1质粒为基础载体,切除gfp基因的编码序列后,在多克隆位点依次插入动物肌肉α-actin启动子和棉花ω-6脂肪酸脱氢酶编码基因fad2(fatty acid desaturase-2)的cDNA序列,构建成fad2cDNA真核表达载体.用显微注射方法,将线性化的载体DNA注入KM ×B6D2F1小鼠受精卵的的原核内部,然后将胚胎移植到输卵管内,13只受体怀孕产仔.合计移植了286枚受精卵...

半胱胺对肥育后期猪脂肪组织沉积的影响

关键词: 肥育后期  半胱胺  组织沉积  胰岛素样生长因子  leptin  mrna  脂肪组织  生长激素受体  脂肪细胞  放射免疫法  下丘脑  基础日粮  屠宰实验  rrna  定量分析  基因表达  ob基因  体脂沉积  

选用体重55kg左右的肥育后期杜×(长×梅)三元商品猪80头,随机分成实验组和对照组,实验组在基础日粮中添加600 mg/kg半胱胺盐酸盐.35 d后进行屠宰实验,并采集血样、背部皮下脂肪组织和下丘脑.用放射免疫法测定血清胰岛素(insulin)、瘦素(leptin)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,用RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,定量分析脂肪组织中生长激素受体(GH-R)、...

人β-防御素-3与植物甜蛋白Brazzein嵌合基因的合成及其在大肠杆菌中的表达

关键词: brazzein  植物甜蛋白  大肠杆菌  嵌合基因  氨基酸序列  核苷酸序列  pcr扩增  t7启动子  人工合成  切割位点  编码序列  表达载体  双价基因  诱导表达  成熟区  密码子  dna  凝血酶  分子量  总蛋白  细菌  

根据人β-防御素-3(hBD3)和植物甜蛋白Brazzein(Bra)的成熟区氨基酸序列,按照细菌密码子的偏爱人工合成了7对末端具粘合位点的核苷酸序列.经连接和PCR扩增,使人β-防御素-3与植物甜蛋白Brazzein的编码序列通过一段序列(含凝血酶切割位点)连接成为嵌合DNA.将其插入到pET30a的T7启动子之下,构建成了防御素和甜蛋白双价基因的表达载体pET30a-hBD3-Bra...

大豆异黄酮植物雌激素调节大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的机理

关键词: 大豆异黄酮  细胞分泌  睾酮  激素调节  睾丸  大鼠  异黄酮植物雌激素  camp  机理  芳香化酶  通过检测  蛋白激酶  体外研究  信号通路  间质细胞  pka  活性  依赖性  雌二醇  含量  抑制  激活  

通过检测cAMP的浓度、cAMP依赖性的蛋白激酶A(PKA)活性、睾酮的含量及芳香化酶活性的变化,体外研究了大豆异黄酮调节大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的机制.结果显示:大豆异黄酮能够提高cAMP的含量和PKA的活性,同时抑制了芳香化酶的活性,最终导致间质细胞分泌睾酮增加.提示大豆异黄酮植物雌激素促进睾酮的分泌主要是通过激活间质细胞cAMP/PKA信号通路,...

表达dsRNA的转基因烟草能阻止烟草花叶病毒的侵染

关键词: 转基因烟草  烟草花叶病毒  dsrna  southern  northern  elisa检测  侵染  mosaic  植物表达载体  农杆菌介导法  目标基因  blot  mrna  virus  根癌农杆菌  重复结构  蛋白基因  云烟87  烟草植株  挑战接种  分析表  tmv  积累量  分运动  pcr  

将烟草花叶病毒(Tobacco mosaicvirus,TMV)的部分运动蛋白基因(△MP)构建成反向重复结构,插入植物表达载体pBin438上,通过三亲交配法导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EH105后通过农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tabacam)品种云烟87,获得了50株转基因烟草.PCR和Southem blot分析表明目标基因已整合到烟草植株的基因组内.用TMV对转...

苜蓿花叶病毒外壳蛋白基因在白三叶中的表达及转基因植株的抗病性分析

关键词: 外壳蛋白基因  苜蓿花叶病毒  白三叶  抗病性  转基因植株  表达  northern  southern  外源目的基因  根癌农杆菌  再生植株  病情指数  表现症状  转化体  介导法  pcr  基因组  发病率  积累量  子叶  抗性  霉素  病症  免疫  

以白三叶(Trifolium repens L.)的两个品种Irrigation和Huia的子叶为转化体,用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法将外源的苜蓿花叶病毒外壳蛋白基因转入白三叶,经过筛选、分化和再生,得到了具有卡拉霉素抗性的再生植株.对这些植株进行PCR、Southern和Northern分析,结果表明,外源目的基因已经整合到白三叶基因组中并且得到了表达.对Nor...

耐碱性木聚糖酶高产菌株的筛选、产酶条件优化及其在麦草浆生物漂白中的应用

关键词: 高产菌株  耐碱性木聚糖酶  麦草浆  生物漂白  条件优化  筛选  dna序列分析  应用  短小芽孢杆菌  碱性土壤  刚果红法  培养特性  初步鉴定  发酵条件  半纤维素  产酶活力  最适温度  16s  酶作用  粗酶液  麸皮  白度  

采用刚果红法从碱性土壤中筛选到木聚糖酶高产菌株BP51,通过培养特性及16S rDNA序列分析,初步鉴定为短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus);经产酶发酵条件的优化,即4%麸皮,1%麸皮半纤维素,0.5%(NH4)2SO4,pH 8.0,37℃培养72 h,产酶活力达到553.4IU/mL;该酶作用最适温度为55℃,最适pH 6.5,在pH 9.0的条件下仍具有60%的酶活力,pH 11.0的保温30min仍具有40...

马铃薯环腐病菌内生拮抗细菌的分离、筛选及鉴定

关键词: 环腐病菌  拮抗细菌  分离  筛选  鉴定  内生细菌  马铃薯环腐病  荧光假单胞菌  开发应用前景  拮抗作用  离体测定  芽孢杆菌  总菌数  菌株  促生  紫花  块茎  温室  定殖  

从8个不同来源的3个马铃薯(Solanuntrberosum)品种(紫花白、晋薯七号和弗乌瑞它)的块茎中分离到240株内生细菌菌株,通过离体测定和温室实验,共得到55株对马铃薯环腐病菌(Clavibacter michiganenc subsp sepedonicum)有拮抗作用的内生细菌,占总菌数的22.9%.初步筛选出3株具有促生和潜在防治马铃薯环腐病的内生细菌,分别为芽孢杆菌(Bacillus sp.)A...

动物细胞分化与克隆

关键词: 细胞分化  转录后基因沉默  克隆动物  体细胞染色体  空间结构  分化过程  磷酸化作用  发育生物学  体细胞克隆  细胞质  前提条件  基因表达  共同作用  信息交流  遗传作用  特殊物质  重新编程  分化细胞  克隆效率  研究分析  操作程序  

细胞分化是细胞行使功能的前提条件,是特定基因表达的结果.细胞分化状态的维持需要细胞外环境、细胞与细胞之间信息交流及其细胞内环境等共同作用,从而保证分化细胞染色体的特定空间结构.细胞内环境中细胞核因素的影响可以归结为后生性遗传作用,细胞质因素主要有转录后基因沉默(RNAi)和蛋白质磷酸化作用等.克隆动物的实质是细胞分化过程的逆转....

启示

葡萄银染mRNA差异显示分析体系的建立及优化

关键词: mrna差异显示  分析体系  优化  银染  差异表达基因  cdna片段  葡萄白粉病  葡萄叶片  总rna  不同时期  差异显著  and  野生种  葡萄属  sds  病原菌  重复性  

mRNA差异显示(mRNA differential display)技术是筛选差异表达基因有效的方法之一(Peng and Arthur,1992).本研究以中国葡萄属野生种的葡萄叶片为材料,采用改进的SDS/酚法(张今今等,2003)提取叶片总RNA,采用优化后的银染差显体系,比较葡萄白粉病病原菌诱导前后6个不同时期的样品,获得了数量适宜、差异显著和重复性好的差异表达cD-N段.

高粱BADH1基因的克隆与序列分析

关键词: 序列分析  克隆  基因  高粱  水溶性生物碱  渗透调节物质  植物体内  1990年  甲基供体  生理功能  抑制作用  nacl  反应合成  甜菜碱醛  badh  cdna  季胺型  关键酶  细胞  

甜菜碱是一种季胺型水溶性生物碱,在许多动植物体内是一种甲基供体,参与维持细胞正常的生理功能,可消除Na-Cl对某些酶的抑制作用,是多种高等植物体内一种重要的渗透调节物质.在植物中甜菜碱由胆碱经两步酶促反应合成,甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)是促进甜菜碱合成的最后一步关键酶.自1990年Weretilnyk等从菠菜中克隆了B...

甘蓝自交不亲和系同源四倍体的获得及其亲和性

关键词: 自交不亲和系  同源四倍体  现代生物技术  自交不亲和性  多倍体诱变  人工诱变  基因转移  基础研究  十字花科  结球甘蓝  60年代  20世纪  秋水仙素  特性研究  利用研究  杂种优势  新类型  新品种  芸薹属  国内外  遗传  作物  蔬菜  育成  

随着现代生物技术的发展,人工诱变多倍体已不仅局限于创建植物新类型、培育作物新品种,它作为一种桥梁,在遗传渐渗、基因转移和三体系创建(申书兴等,2000)等基础研究方面已起到越来越重要的作用.结球甘蓝为十字花科芸薹属的重要蔬菜,其多倍体研究国内外都十分重视.20世纪50～60年代,通过秋水仙素诱变获得了甘蓝的同源四倍体,70年代培育成了四倍...

克氏杆菌gldA基因亚克隆及其原核表达载体构建

关键词: 表达载体构建  杆菌  亚克隆  甘油脱水酶  原核表达载体  亚基组成  基因编码  作用机制  限速酶  关键性  复合物  酶基因  

甘油脱水酶(glycerol dehydratase EC 4.2.1.30)是控制甘油分解和产生1,3-丙二醇的关键性限速酶.甘油脱水酶是由α、β和γ 3个亚基组成的复合物(α2β2γ2),分别由gldA、gldB和gldC基因编码.研究(Frank et al,1998;Macis etal.,1998;Markus et al,1996)认为甘油脱水酶α亚基无论在甘油脱水酶的结构上还是功能上都起到重要的作用.本研究克隆了克氏杆菌...

农杆菌介导获得转基因抗虫匍匐翦股颖植株

关键词: 匍匐翦股颖  抗虫  农杆菌介导法  crylab  遗传转化体系  转基因技术  转基因植株  原生质体  愈伤组织  基因导入  遗传改良  bt基因  抗逆性  

利用转基因技术,将目的基因导入愈伤组织或原生质体,获得转基因植株提高抗逆性,已成为匍匐翦股颖遗传改良的重要手段(郭振飞和卢少云,2002).本实验利用农杆菌介导法,将经过改良的抗虫Bt基因cry1Ab导入匍匐翦股颖,初步建立了匍匐翦股颖遗传转化体系.

金属离子对苏云金芽孢杆菌几丁质酶活力的影响

关键词: 苏云金芽孢杆菌  几丁质酶活力  离子对  金属  生物催化活性  高等植物  催化水解  真菌病害  杀虫效果  微生物  糖苷键  围食膜  昆虫  病毒  害虫  抗性  

几丁质酶(EC 3.2.1.14)是细菌、病毒、真菌等微生物、高等植物和昆虫体内普遍合成的一种具有生物催化活性的水解酶类.它能特异地催化水解几丁质的β-1,4-糖苷键生成N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG).几丁质酶因为具有水解几丁质破坏围食膜的作用而被作为防治真菌病害和害虫的潜在靶标(蒋红彬等,2000;沙莉等,2003).几丁质酶能增强苏云金芽孢杆菌(Bt)的杀...