农业生物技术学报杂志

甘薯抗茎线虫病基因的RAPD标记

关键词: 甘薯  茎线虫病  rapd  分子标记  

以甘薯(Ipomoea batats)高抗品种徐781和高感品种徐薯1 8的200个后代为实验材料,对其进行抗病性鉴定和RAPD分析,获得与抗茎线虫病基因相连锁的RAPD标记OPD01-700.经13个高抗后代、5个高感后代、8个感病后代以及已鉴定的具有稳定抗性的10个品种验证表明,该标记可作为甘薯抗茎线虫病辅助育种的分子标记.

小麦显性多子房基因的RAPD标记

关键词: 小麦  显性  多子房基因  rapd  

利用BSA法,以显性多子房小麦(Triticum aestivum)与普通小麦(T.aestivum)品种西农1376进行杂交,从F2分离世代建立多子房性状基因池和单子房基因池,采用RAPD-PCR方法,以440个随机引物筛选单、多子房的混合群体及其双亲.发现10个引物的扩增产物在近等基因系间表现出特异性,表现为多子房亲本及其混合群体有带,单子房亲本及其混合群体无带;6个引物扩...

猕猴桃雄性基因RAPD标记S1032-850的获得及其应用

关键词: 猕猴桃  rapd标记  雄性链锁  克隆  测序  

利用RAPD技术对美味猕猴桃(Actinidia deliciosa var.deliciosa)海瓦德×秦雄201杂交F1代雌雄分离群体进行分析,获得了与雄性基因链锁的RAPD标记.通过对300个随机引物的筛选和研究,得到了与猕猴桃雄性基因链锁的RAPD标记S1032-850,并在杂种后代、中华猕猴桃(A.chinensis var.chinensis)和美味猕猴桃雌雄个体上进行了验证.进一步对猕猴桃雄性RAPD...

用复合PCR方法检测6种转基因玉米中外源DNA的特异性

关键词: 转基因玉米  pcr检测  复合pcr  检测方法  

利用本实验室研制的植物DNA提取试剂盒,从玉米(Zea mays)种子中提取符合PCR检测要求的DNA.根据不同转基因玉米中重组DNA的结构,分别设计引物,可对Btll、Event176、T25、MON810、GA21和NK603等6种转基因玉米进行特异性PCR检测.在此基础上建立了针对6种转基因玉米的特异性DN段和玉米内参照基因(zein)的复合PCR检测方法,能同时对7对引物进行扩增,通...

红星苹果花柱S-核酸酶的分离与纯化

关键词: 苹果  自交不亲和性  花柱  蛋白质纯化  

采用多种蛋白分离纯化技术,结合生物鉴定方法,成功地从红星苹果(Malus domestica Borkh.)花柱中纯化出了一类与自交不亲和性识别反应相关的花柱蛋白.通过聚丙烯酰胺凝胶和等电聚焦电泳分析,确定该蛋白分子量为26和28 kD,等电点为10.2和10.4,为碱性蛋白;核糖核酸酶活性染色和N-末端序列分析结果显示具有核酸酶活性,且与其它蔷薇科植物花柱S-核酸...

转基因（反义ACS和反义NR）番茄伤流中植物激素的运输

关键词: 转基因番茄  伤流  植物激素  

以转反义ACS(ACC合成酶)和反义NR(乙烯受体蛋白)基因番茄和普通番茄(Lycopersicon escclentum Mill.)作为试材,通过ELISA(enzyme-linkedimmunosorbent assay)方法研究了抑制乙烯合成的外源基因转入番茄后,伤流中植物激素的变化.发现转基因番茄和普通番茄在盛花期和盛果期伤流中各种植物激素的含量变化不显著;而到了成熟期伤流中IAA、GA3和CTKs(...

转基因产品中抗除草剂基因的PCR检测

关键词: 聚合酶链式反应  抗除草剂基因  转基因产品  

抗除草剂作物占全球转基因作物的75%以上,并且这类作物还有不断增加的趋势.首次建立并优化了对4类转基因作物(大豆(Glycincmax)、玉米(Zeamays)、棉花(Gossypiumhirsutnm)和油菜(Brassica campestrisvar.oleifera))的5种外源抗除草剂基因(bar、pat、cp4-epspsl、cp4-sps2和gox)的PCR检测方法,并在实践中应用.结果表明,本方法灵敏特异、结果准确...

改进的拟南芥CAPS标记方法

关键词: 植物  拟南芥  基因组  分子标记  限制性内切酶  

在模式植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)的一种生态型Columbia(Col)中,存在大多数CAPS(切割扩增的多态性序列)标记的标记酶识别位点;而用于分析的酶中,只有37.5%～47.5%的酶在Col基因组的扩增区段存在酶识别位点,超过半数的酶在大多数CAPS标记的开发中无作用.因此,建立了一种改进的开发CAPS标记的方法.首先进行限制性内切酶分析,筛选出在Col基因...

小麦及其部分近缘种属puroindolines蛋白的分离与检测

关键词: 小麦  籽粒硬度  puroindolines  

通过对104份普通小麦(Tritium aestivum)及其近缘种属材料puroindolines蛋白(包括PinA和PinB)的初步研究,提出一种改进的Urea-SDS-PAGE凝胶系统用于此蛋白的分离和检测.结果表明,和普通的SDS-PAGE相比,可以清晰地分开PinA和PinB,分辨率较高,检测效果较好.改进的凝胶系统也可用于其它蛋白,特别是小分子量且等电点和分子量相近蛋白组分的分离和检...

2006年农学类核心期刊联合征订启事

刺芹侧耳（Pleurotus eryngii）rDNA的IGS2多样性分析

关键词: 刺芹侧耳  转录单位间隔区  多样性  鉴定  

对8个刺芹侧耳（Pfeumfus eryngit）菌株进行了转录单位间隔区2（IGS2）分析，结果表明不同菌株的存在长度异质性和数量多态性。应用BsuRⅠ、Hin6Ⅰ、HpaⅡ和RsaⅠ限制性内切酶，对IGS2扩增产物进行酶切（IGS2-RFLP），不同菌株的酶切位点不同，电泳后产生多样性丰富的图谱，成为菌株特有的DNA指纹，实验应用的4个限制性内切酶中的任何一个都可...

用DNA差异显示技术分离、测序和鉴定猪的两个新分子标记及其与性状的关联分析

关键词: 猪  dna差异显示  分子标记  关联分析  

为了寻找更多的和性状关联的猪候选基因或分子标记,用DNA差异显示技术扫描140头大白×梅山F2猪的DNA,发现了2个与猪的性状具有显著关联的分子标记,并对这2个分子标记进行测序和鉴定.标记1与最后肋骨处估测背膘厚(P＜0.01)、倒数三四肋骨处估测背膘厚(P＜0.01)、估测瘦肉率(P＜0.01)、骨重(P＜0.05)、骨率(P＜0.05)、肥肉重(P＜0.05)、肥肉率(P＜0...

杂种和纯种猪之间脂肪组织差异表达基因的分离、克隆和序列分析

关键词: est  杂种优势  mrna差异显示  猪  

实验选取中国地方品种梅山猪和外国品种大白猪进行正反向杂交产生杂种梅大和大梅猪,用mRNA差异显示技术,分析了亲本和杂种猪背部皮下脂肪组织间基因差异表达.结果发现,在10条5'端随机引物和10条3'端锚定引物共100对引物组合的差异显示扩增下,共获得1500多条可重复的扩增条带,选取其中能够重复出现的40条差异表达带(在4组样本中不能同时出现的条...

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅳ部分基因片段的体外表达与初步应用

关键词: 胸膜肺炎放线杆菌  表达  间接elisa  

参照GenBank中的猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropeumoniae,App)血清1和3型菌株序列设计了1对特异性引物,用PCR方法扩增毒素Ⅳ(ApxⅣ)基因3'端1 096bp的目的片段,然后克隆到pMD18-T载体中,转入大肠杆菌(Es-cherichia coli)的宿主菌DH5a中,提取阳性克隆质粒进行双酶切和测序鉴定,将T-载体中切下目的片段定向克隆到pET32a(+)中,转入E.co...

猪三十九肽胆囊收缩素（CCK39）基因的克隆和表达

关键词: 胆囊收缩素  克隆  表达  抗gst抗体  单因子血清  

以猪十二指肠中提取的总RNA为模板,根据GenBank已发表的猪三十九肽胆囊收缩素(CCK39)基因序列设计1对特异性引物.用RT-PCR扩增CCK39基因的cDNA,纯化后克隆入pUC18载体,BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切后插入pGEX-6P-1质粒获得原核表达载体.0.5mmol/L IPTG诱导表达并纯化产物,以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备单因子血清;用抗GST抗体和自制的抗CCK39的...

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅡA基因的真核表达及其核酸疫苗

关键词: 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌  表达  核酸疫苗  免疫应答  

利用PCR从自行分离鉴定的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneuromoniae,APP)血清7型菌株基因组DNA中扩增apxⅡA基因,构建了一个利用人类巨细胞病毒(Human cytomegalo virus,HCMV)启动子表达apxⅡA基因的真核表达质粒pCDapxⅡA,体外转染PK-15细胞,处理后的样品进行SDS-PAGE和Western blot分析,证实了免疫原性蛋白apxⅡA在细胞中...

黄颡鱼Sox9基因的分离及分析

关键词: 黄颡鱼  sox9  组织表达  

Sox9基因是与性别分化形成有关的重要基因之一.以黄颡鱼(Pelteobagrusfulvidraco)为研究材料,使用RT-PCR在脑、精巢和卵巢分离和克隆到了黄颡鱼Sox9基因,序列比对分析表明,脑和精巢Sox9基因序列一致,称Sox9a1(GenBank acces-sion No.AY684328),卵巢的则与其有差异称Sox9a2(GenBank accession No.AY684329).Sox9a1与Sox9a2的核苷酸相似性为77%,氨...

部分蜘蛛牵丝Ⅰ型蛋白基因的合成及其聚合体在大肠杆菌中的表达

关键词: 基因合成  基因表达  

已知蜘蛛牵丝Ⅰ型蛋白N端序列不完整,有大量多聚丙氨酸基序组成的重复区.根据已报道的金纺者(Nephilaclavipes)相应基因序列,合成若干寡核苷酸链,通过PCR获得编码涵盖三组多聚丙氨酸基序的基因片断.并以此为单体,经过酶切和连接获得重复区分别为2、4、8拷贝的聚合体.序列及RNA二级结构比对显示:所获8聚体与已报道基因编码的氨基酸同源性高达84%,...

奶牛酪蛋白αs1基因片段的扩增及泌乳素对其基因表达的影响

关键词: 乳腺  组织培养  泌乳素  黑白花奶牛  

从泌乳中国黑白花奶牛的乳腺组织中提取基因组RNA,根据报道的奶牛酪蛋白αs1mRNA序列设计其上、下游引物,用RT-PCR进行cDNA扩增,获得l条434bp的片段.测序分析结果表明,该片段为奶牛酪蛋白αs1 cDNA的部分序列,编码130个氨基酸组成的多肽;除一个碱基发生变异外,其余部分与报道的乳腺酪蛋白αs1 cDNA序列完全一致.以此为基础,并以GAPDH为内标,研究了...

猪乳铁蛋白N-叶基因PLF-N在大肠杆菌中的克隆、表达及特性分析

关键词: 基因  克隆  表达  

从泌乳15 d的约克夏母猪乳腺组织中提取总RNA,用RT-PCR技术扩增PLF-N基因,获得1条1038bp的目的片段.将目的基因克隆到质粒载体pET-28a(+)中,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot分析.结果表明,PLF-N基因在大肠杆菌BL21中表达,表达产物分子量约为42 kD.

重组犬IFN-γ在大肠杆菌中的高效表达

关键词: 高效表达  大肠杆菌  

提取ConcavadinA诱导培养的犬脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增出犬IFN-γ基因,克隆到pMD18-T载体并测序鉴定,然后把IFN-γ基因克隆到原核表达载体PJLA605,构建pRL-CaIFN-γ表达质粒;应用M9培养基通过摇瓶发酵,确定诱导时机和诱导表达时间.结果表明,工程菌pRL-CaIFN-γ在30℃培养至OD600为1.5于42℃诱导4 h,菌体收获量湿重达20.0g/L,目标蛋白表达量约占菌体...

猪卵母细胞在不同条件下的体外成熟培养

关键词: 猪  卵母细胞  体外成熟  改良tcm199  

研究了不同时间段添加外源激素及不同基础培养液和血清有无对猪卵母细胞体外成熟的影响.实验包括(1)猪卵母细胞以TCM199+10%FBS+10IU/mL pregnant mare serum gonadotrophin(PMSG)+10IU/mL human chorion gonadotrophin(hCG)+2.5IU/mL follicle stimulate hormone(FSH)为成熟培养液体外培养44 h,前22 h在培养液中加激素,后22 h不加激素及前22 h...

猪前体脂肪细胞的原代培养

关键词: 猪  前体脂肪细胞  细胞培养  脂肪组织  

建立猪前体脂肪细胞原代培养方法,研究猪脂肪组织增生的生物学特征.选用出生7 d的仔猪脂肪组织,采用原代消化细胞培养法培养出棱形细胞,该细胞成分均一、生长旺盛和充脂率高.经形态学动态变化观察、MTT比色法、生长曲线及油红O染色提取法测定,证明是功能活跃的前体脂肪细胞,并在体外重现了其增殖的全过程.

乳头管灌注内毒素诱发大鼠实验性乳腺炎模型的建立

关键词: 大鼠  乳腺炎  模型  内毒素  

20只泌乳期SD雌性大鼠随机分成正常对照组(n=5)和实验组(n=15),产后72 h分别用灭菌生理盐水(PSS)和不同剂量(5、10和50μg)的大肠杆菌(Eschericbia coli)内毒素经乳头管灌注到大鼠第4对(腹部)乳腺内,灌注后24 h处死大鼠,取乳腺组织固定,进行组织学观察,测定了血清及乳腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、分泌型IgA(slgA)的含量及N-乙酰-β-D-氨基葡萄...

抗胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的单克隆抗体的制备

关键词: 胸膜肺炎放线杆菌  单克隆抗体  

分别用大肠杆菌(Escherichia coli)表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)外毒素(Apx)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ为抗原,免疫Balb/c小鼠,经细胞融合、克隆与筛选,分别获得能稳定分泌ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅢ单克隆抗体的杂交瘤2株(4、16)、3株(14、3Fll、16G10)和2株(44、53).这7株杂交瘤细胞的染色体数分别为87(81～94)、84(81～88)、9...

静宁鸡和固原鸡品种划分的分子遗传基础

关键词: 静宁鸡  固原鸡  微卫星标记  杂合度  遗传距离  

甘肃静宁鸡和宁夏固原鸡具有相似的形成历史,被合并为静原鸡收录在中国家禽品种志.当地对此持有不同的看法,认为这两个品种不应合并为一个品种,而应为两个不同的品种.研究利用26个微卫星标记对两群体进行分析,计算两群体中各标记的等位基因数、有效等位基因数、杂合度以及群体间的Nei氏遗传距离、遗传相似系数和分化系数.结果表明,静宁鸡中各标...

巢式PCR检测无乳链球菌16S rRNA方法的建立及应用

关键词: 奶牛乳房炎  pcr  无乳链球菌  16s  rrna  

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)引起的奶牛乳房炎主要表现为隐性型,需要通过实验室检查才能确诊.研究建立了一种特异、敏感和快速的巢式PCR方法用于检测奶样中的无乳链球菌.利用链球菌属(Streptococcus)16SrRNA基因的保守区设计通用引物作为链球菌属的阳性控制,在保守区内的可变区设计无乳链球菌特异的引物.研究结果表明,通过奶样中无乳...

利用PCR介导的基因置换技术构建阿维链霉菌bkdF^-突变株

关键词: pcr介导的基因置换  red重组  阿维链霉菌  基因中断  

PCR介导的基因置换技术是一种利用λ噬菌体Red重组系统在微生物中进行基因中断的新方法.实验利用该方法快速构建基因中断载体,并成功地置换了阿维链霉菌(Streptomycesavermitilis)bkdF基因.先合成1对长度分别为58和59nt的引物,其5'端的39nt序列分别与bkdF基因两侧同源,3'端则分别与安普霉素抗性标记盒(aac(3)Ⅳ+oriT)两侧序列一致.以该引物扩增的...

水稻瘤矮病毒基因组S8片段全序列测定及其结构分析

关键词: 水稻瘤矮病毒  基因组s8片段  序列分析  

应用RT-PCR技术克隆了水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarfvirus,RGDV)中国广东信宜分离物(RGDV-C)的基因组S8片段,并测定了全序列.结果表明RGDV-C基因组S8片段全长1578bp(GenBank登录No.AY216767),含有一个ORF,编码一个含有426个氨基酸的外层衣壳蛋白,基因结构与泰国的RGDV分离物基本一致,核苷酸和推导的氨基酸序列同源性分别为96.0%和99.1%,与植物呼...

Escherichia coli基因glgC的定点突变

关键词: 定点突变  glgc  马铃薯  

体外定点突变技术比使用化学因素、自然因素导致突变的方法具有突变率高、简单易行、重复性好的特点,已在生物和医学领域广泛应用.已报道的一些体外突变方法Ⅳande-yar et al.,1988;Sugimoto et al.,1989),一般需以单链DNA为模板,并要求对突变基因进行亚克隆和对单链DNA拯救,技术上较复杂,多数需1周以上时间.采用突变试剂盒可以在短时间内完成突...

啤酒泡沫阳性蛋白的电泳分离及其与酵母蛋白酶A的关系

关键词: 酵母蛋白酶a  啤酒  泡沫阳性蛋白  银染  

通过对SDS-PAGE条件及染色方法的比较及优化,首先确立了直接进行啤酒泡沫蛋白的电泳分离条件及灵敏的鉴定方法.本研究简化了对啤酒泡沫样品的纯化和浓缩等处理过程,直接采用电泳及银染即可对啤酒泡沫蛋白进行有效分离.通过酵母蛋白酶A对啤酒泡沫蛋白的水解作用及电泳检测发现,酵母蛋白酶A对啤酒泡沫阳性蛋白中的脂肪转运蛋白有水解作用,这一结果...

捻转血矛线虫ZJ株15kD分泌排泄蛋白基因的克隆其在大肠杆菌中的表达

关键词: 捻转血矛线虫  分泌排泄蛋白  克隆  表达  

捻转血矛线虫主要寄生于反刍动物尤其是绵羊的胃内,可引起宿主贫血,抵抗力下降甚至死亡,周期性服药和粪检是当今主要控制方法.但耐药株的出现影响了这种策略的效果,因此人们正致力于疫苗的研究(Knox and Smith,2001).

南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室不结球白菜育种研究室

关键词: 不结球白菜  国家重点实验室  南京农业大学  研究室  种质创新  作物遗传  育种  细胞融合技术  胞质雄性不育  国家发明专利  

该研究室利用非对称细胞融合技术，创建了不结球白菜胞质雄性不育新种质，克服了原不育系代温下叶片黄化，无蜜腺的缺陷，该项研究成果，获3项国家发明专利（ZL99114125.3,ZL99114126.1,ZL99114127.X）。

湖北省马铃薯工程技术研究中心

关键词: 工程技术研究中心  马铃薯  湖北省  国家自然科学基金  华中农业大学  遗传改良  园艺植物  技术开发  资源创新  

中心依托华中农业大学马铃薯实验室而建立，主要从事园艺植物的遗传改良，生理生化以及资源创新与应用等领域的相关研究和技术开发工作，由实验室和中心基地两大部分组成。现承担国际合作，国家“863”，国家自然科学基金，国家科技攻关，国家“948”项目，以及其它多项省、部级和横向合作研究课题。