农业生物技术学报杂志

口蹄疫病毒持续感染的黄牛分离毒株VP1和3ABC基因变异特征分析

关键词: 口蹄疫病毒  持续感染  黄牛  基因变异  vp1和3abc  

为明确口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV ）持续感染与病毒基因变异潜在关系，研究FMDV持续感染分离株结构蛋白VPI和非结构蛋白3ABC基因在牛体内的动态变化。实验用O／Akesu／58毒株以10^4ID50/mL剂量舌面穿刺接种5头黄牛，出现临床或亚临床症状后痊愈动物会成为可能的FMDV带毒牛。用探杯定期采集实验牛咽喉部黏性液体（O／P液）...

猪圆环病毒2型ORF2／猪白介素2（POIL-2）嵌合基因真核表达载体的构建、表达及在小鼠体内的免疫效果

关键词: 猪圆环病毒2型  猪白介素2  嵌合基因  核酸疫苗  免疫效果  

为了研究猪圆环病毒2型（ Porcine circovirus type 2 ,PCV2 ）核酸疫苗，采用重叠延伸PCR（splicing by overlap extension-PCR, SOE-PCR） 方法通过一基因柔性接头（linker）（G4S）3，将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因（PoIL-2）构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆人pcDNA3．1（＋）真核表达载体中；筛选阳性重组表达质粒（rp...

鸭瘟病毒gB蛋白N端抗原域的高效表达及其免疫特性

关键词: 鸭瘟病毒  糖蛋白b  原核表达  抗原域  免疫原性  

在分析鸭瘟病毒（Duck plague virus, DPV ）gB蛋白抗原性的基础上，设计1对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因，克隆到表达载体pET32a中，构建了原核表达质粒pET-gB1。将pET-gB1转化到感受态大肠杆菌（ Escherichia coli ） BL21（DE3）中，经IPTG诱导和SDS-PAGE分析，可见约42．4kD的目的蛋白以包涵体形式表达。Western blot分析发...

西尼罗病毒荧光定量PCR检测体系的建立及评价

关键词: 西尼罗病毒  caspid蛋白基因  实时荧光定量pcr  

建立了一种实时荧光定量PCR快速检测西尼罗病毒（ West nile virus, WNV）的方法。通过序列比对和blast分析，确定WNV Caspid蛋白保守区基因为检测的目的基因，引物采用Primer Premier5．0软件设计。利用成本相对较低的SYBR Green Ⅰ染料法建立WNV核酸检测方法。通过对标准品的扩增、测序及对标准扩增曲线的绘制，建立WNV核酸检测体系。同时对建...

Real-time PCR技术用于大菱鲆红体病虹彩病毒的组织敏感性检测及病毒流行情况调查

关键词: 大菱鲆红体病虹彩病毒  实时定量pcr  sybr  green  定量检测  敏感组织  

大菱鲆红体病虹彩病毒（Turbot reddish body iridovirus, TRBIV）可引起大菱鲆病毒性红体病（viral reddish body syndrome, VRBS）并导致养殖大菱鲆（ Scophthalmus maximus） 大量死亡。研究利用TRBIV主要衣壳蛋白基因序列设计的1对引物，结合内嵌式核酸染料SYBR Green Ⅰ，建立了TRBIV特异的Real-time PCR检测方法。以10倍梯度稀释的含有TRB...

鸡毒霉形体黏附蛋白与鸡胚不同组织黏附特异性的研究

关键词: 鸡胚  鸡毒霉形体粘附蛋白  间接免疫荧光组织化学法  

利用pGEX融合蛋白表达系统，将鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisepticum）黏附蛋白（pMGA）在大肠杆菌（Escherichia coil ）BL21中表达，经GST·Bind Resin纯化，用蛋白酶Thrombin切掉glutathione-S-transferase（GST）标签，获得纯度为96％的pMGA，Western blot鉴定具有良好的免疫学活性。通过间接免疫荧光组织化学法（IFA）检测pMGA与SPF鸡胚的...

猪UMMLC2B基因第一内含子单核苷酸多态与胴体、肉质性状的相关分析

关键词: 猪  快肌肌浆球蛋白轻链2  胴体性状  肉质性状  关联分析  

快肌肌浆球蛋白轻链2（fast skeletal myosin light chain 2,HUMMLC2B 或 MYLPF）是一种钙结合蛋白，参与多种生命活动。实验获得克隆猪HUMMLC2B基因（GenBank登录号：DQ533994），并采用PCR．RFLP技术，分析了HUMMLC2B基因第1内含子中的MspⅠ酶切多态（T613C）在7个品种猪中的多态性分布；分析了多态性与36头长白猪、5个群体104头猪以及长自和5...

牛nanog基因原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达

关键词: nanog分子克隆  原核表达  牛  

从6周龄的胎牛（Bos taurus）原始生殖嵴中提取总RNA，通过RT-PCR扩增nanog基因，将其克隆到PMD-18T载体，然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体上，获得原核表达质粒pGEX-KG-nanog，限制性内切酶分析和DNA测序证明所插入片段为牛nanDg基因编码序列。重组质粒转化大肠杆菌JM109（Escherichia coli），在不同的培养温度（25、30和37℃）和不同浓度的IPT...

应用地高辛标记探针原位杂交方法检测仔猪小肠FcRn的表达

关键词: 原位杂交  仔猪  小肠  

根据GenBank公布的猪新生儿Fc受体（FcRn）重链（α链）mRNA基因保守序列，设计并合成带地高辛标记的原位杂交试验用cDNA探针。经仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度选择、小肠组织中内源性辣根过氧化物酶祛除等试验条件优化，建立了利用地高辛标记探针检测仔猪小肠FcRn mRNA表达的原位杂交方法。结果显示，在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织的小肠腺和...

利用环介导等温扩增技术快速检测水产品中的副溶血弧菌

关键词: 副溶血弧菌  快速检测  水产品  

副溶血弧菌（ Vibtio parahavmolyticus）是一种重要的食源性致病菌。首次将环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因（t1h）设计4条特异性引物，建立了副溶血弧菌LAMP检测方法，1h即可完成。对12种细菌共28株菌进行LAMP扩增，仅副溶血弧菌得到阳性结...

应用Real-time PCR方法测定瘤胃液功能菌群数量

关键词: 瘤胃微生物  功能菌群  pcr  

采用Real-time PCR技术对瘤胃液中3种功能菌即脂解厌氧弧杆菌 （ Anaerovibrio lipolytica, AL ），产琥珀酸丝状杆菌（ Fibrobacter succinogene, FS）和黄色瘤胃球菌（ Ruminococcus flavefaciens, RF）的16SrDNA基因拷贝数进行测定，并建立起反映瘤胃液中3种功能菌的数量的方法。结果表明，不同个体动物间的3种功能菌的数量在相同时间点的差...

猪卵母细胞第1极体的分离与保存

关键词: 猪卵母细胞  第1极体  采集  保存  

通过对屠宰场废弃的猪卵巢卵母细胞进行体外成熟培养（IVM）获得成熟卵母细胞，对体外培养成熟卵母细胞第1极体（Pb1）排出、活性及其形态学进行了统计分析；分别采用酶消化和显微操作两种方法进行了Pb1分离与采集，继而进一步结合台盼蓝细胞染色法，探讨了不同温度保存条件下Pb1存活情况。结果表明：卵泡卵母细胞IVM 40h后发现大量高活性Pb1；...

牛皮肤成纤维细胞的分离培养及转染人溶菌酶基因

关键词: 牛皮肤成纤维细胞  溶菌酶  基因转染  脂质体  绿色荧光蛋白  

为了为核移植法制作转人溶菌酶基因克隆牛提供供体细胞，研究体外分离培养牛皮肤成纤维细胞并进行了人溶菌酶基因转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛耳成纤维细胞，经传代纯化后，脂质法将含有双重筛选标记的人溶菌酶乳腺特异性表达载体转人体外培养的第4代牛皮肤成纤维细胞，500μg/mL G418筛选2周，G418减半继续培养2～3代，然后对转染筛选...

人源羊水干细胞的培养、鉴定及影响因素分析

关键词: 人  羊水干细胞  贴壁细胞数量  贴壁时间  

取人羊水标本进行羊水干细胞原代，分离培养，并探讨人羊水标本性状等因素对原代分离培养的影响。结果表明，分离的羊水干细胞表达Oct-4等胚胎干细胞和CD29等成体干细胞的特异基因，细胞生长迅速，增殖能力较强，并可分化为Nestin阳性的神经细胞和α-actin阳性的心肌细胞。同时，在羊水干细胞原代培养时，羊水标本性状在一定程度上影响细胞的贴壁...

三种笛鲷的野生群体和养殖群体遗传多样性的微卫星分析

关键词: 笛鲷  养殖群体  野生群体  微卫星  遗传多样性  

利用微卫星标记技术，采用10对微卫星引物对南海海域红鳍笛鲷（Lutjanus erythopters）、星点笛鲷（L．stcllatus）和紫红笛鲷（L．argentimaculatus）3种笛鲷鱼的野生种群（HYE、XYE和ZYE）和养殖种群（HYA、XYA和ZYA）进行了遗传多样性分析。10对微卫星引物在6个群体中共检测到78个等位基因，每个位点的等位基因数目在1～8个之间。6个群体的观...

EST-SSR标记对我国斑点叉尾鮰种质资源的研究

关键词: 斑点叉尾鮰  遗传多样性  

采用EST-SSRs对福建和湖北的1984年群体（P1984）、福建与辽宁的1997年群体（P1997）、湖南的2004年群体（P2004）和福建的1984年与1997年群体杂交的F。代群体（P8497）等4个斑点叉尾鮰（Ictalurus punctatus）养殖群体的遗传多样性进行了研究。结果表明，有10对引物可扩增出清晰条带，其中9对引物具有多态性，共获得32个等位基因，4个群体的平...

水稻品种日本晴粳稻组培培养基的筛选及转稻瘟菌蛋白激发子基因植株的获得

关键词: 培养基  日本晴  成熟胚  根癌农杆菌  组织培养  蛋白激发子  转基因  

采用B6、MS和NB3种培养基，以粳稻（ Oryza sativa ssp.japonica）品种日本晴的成熟胚为受体材料进行组织培养，比较了3种培养基的效果。结果表明，在3种培养基中，NB培养基对愈伤组织的诱导效果最好，转化效率最高，最适合于日本晴成熟胚的组织培养。在此基础上，通过根癌农杆菌（ Agrobacterium tumefaciens）介导转化法将稻瘟菌蛋白激发子基...

转GFM CrylA基因玉米自交系及其杂交种的抗螟性鉴定

关键词: 玉米  gfm  cryla基因  自交系  杂交种  

对获得的6个转GFM CrylA基因玉米（Zea mays）株系的T5代PCR分析证明，转基因株系是稳定遗传的。以此抗虫系为亲本与常规自交系配制了四密25^Bt、通单24^Bt和吉单209^Bt3个杂交种。转基因自交系和杂交种的抗螟性鉴定结果表明：转基因系间抗虫性差异极显著，同一转基因系单株间也存在差异。抗螟性强的4个株系比受体对照平均蛀孔数减少70％、茎秆...

甘薯抗茎线虫病基因AFLP标记的开发

关键词: 甘薯  茎线虫病  aflp标记  

以甘薯（Ipomoea batatas）抗茎线虫病品种徐781和感茎线虫病品种徐薯18杂交F1分离群体的186株单株为材料，利用分离群体分组分析法（BSA法）和AFLP技术，在抗感池中共筛选了800对AFLP引物，结果表明，其中245对引物具有多态性。用这245对引物检测两亲本以及建池单株，发现引物组合E2M23和E33M20分别在抗病单株中扩增出1条在感病单株中未出现的...

pBI121-LyrZ-GFP表达载体的构建及其在和田苜蓿愈伤组织中的转化

关键词: 植物表达载体  绿色荧光蛋白基因  和田苜蓿  基因转化  

将绿色荧光蛋白（GFP）基因片段插入到pBI121-Lyz多克隆区，构建了重组表达载体pBIl21-Lyz-GFP。经SmaⅠ与BamHⅠ双酶切和PCR验证重组质粒，均能得到约750bp的目的片段，通过进一步测序证明，GFP基因已成功地连接到pBI121-Lyz中，且重组质粒连接方向正确。利用冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌（Agrobacterium tumenfaciens ） LBA4404,，用叶盘...

转液胞膜AtNHX1基因的白三叶耐盐性研究

关键词: 白三叶  耐盐性  分子检测  

以白三叶（ Trifolium repens）吸胀种子的子叶为转化体，用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens） 介导法将拟南芥（Arabidopsis）液胞膜Na^＋／H^＋逆向转运蛋白基因AtNHX1转入白三叶，经过筛选、分化和再生，得到了具有卡那霉素抗性的转基因植株。对这些植株进行PCR、Southern印迹和Northern杂交分析，结果表明，外源目的基因已经整合到白...

小金海棠Fe^3＋-还原酶基因MxFRO在酵母中的表达及Fe^3＋-还原酶活性检测

关键词: 小金海棠  mxfro  缺铁胁迫  

从铁高效基因型小金海棠（Malus xiaojinensis）中克隆了Fe^3＋-还原酶基因MxFRO。半定量RT-PCR结果表明MxFRO在小金海棠的根和叶中均受缺铁胁迫诱导。将MxFRO转入野生型酵母（Saccharomyces cerevisiae）中，结果表明转基因酵母的Fe^＋-还原酶活性是对照的2．8倍，实验初步证明MxFRO基因编码的蛋白具有Fe^3＋-还原酶活性。

PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及其在雪柑转基因中的应用

关键词: 基因  甘露糖  雪柑  转基因  

以大肠杆菌（Escherichia coli）6-磷酸甘露糖异构酶（6-phosphomannose isomerase，PMI）基因替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因以及pBI121中的gus基因，构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1301PMI和pBIPMI，并导人根癌农杆菌（Agrobactedum tumefaciens）EHA105中。研究了两种表达载体对雪柑（Citrus sinensisL．Osbec...

甘蓝S-位点受体激酶（SRK）激酶结构域编码区分子特性及其与类硫氧还蛋白（THL1）相互作用检测

关键词: 甘蓝  基因克隆  表达  

以甘蓝（Brassica oleraceaL）E1为材料，采用PCR和RT-PCR技术，扩增S-位点受体激酶（SRK）激酶结构域（SRKE1）基因组DNA和cDNA序列，得到片段长度分别为1711和1241bp。序列分析表明，该基因组DNA序列由5个内含子和6个外显子组成，编码407个氨基酸；将SRK。编码序列克隆到原核表达质粒pET43．1和真核表达质粒pPIC9K中，分别在表达宿主菌大肠杆...

利用SSR分析小豆种质遗传多样性

关键词: 小豆  ssr  遗传多样性  

利用筛选出的18对SSR引物分析了来自我国的栽培小豆（Vigna angularis（Willd．）Ohwi＆Ohashi）优异种质53份和日本引进种质27份。结果表明，在所有参试的80份小豆种质中共鉴定出等位变异92个，平均每个位点为5．1个；其中53份国内小豆和27份日本小豆的等位变异数分别为89个和74个，平均每个位点分别为4．9个和4．1个。平均每个位点的多态信息...

蜡样芽胞杆菌M22Mn-SOD基因的分子改造及在毕赤酵母中的表达

关键词: 毕赤酵母  基因改造  表达  

根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子的偏好性，以氨基酸序列不变为原则，对源于蜡样芽胞杆菌（Bacillus cerus）M22的Mn-SOD基因进行分子改造，设计、合成了新的基因序列Mn-SOD-2。构建酵母表达载体pPICZαA／Mn-SOD-2，并整合至毕赤酵母GS115染色体。结果表明，所构建的重组体经0．5％甲醇诱导表达后，Native-PAGE检测证实有清晰单一活性条...

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63及其抗生素高产菌株差异蛋白分析

关键词: 玫瑰黄链霉菌  抗生素高产菌株  二维凝胶电泳  质谱分析  

玫瑰黄链霉菌（Streptomyces roseoflavus ）Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗菌。该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌（Verticillium dahliae）和瓜类白粉病菌（Sphaerotheca fuliginea Poll）等多种重要的植物病原真菌表现出较强的抑制作用，具有良好的生防应用潜力。利用蛋白质双向凝胶电泳技术研究了Men-myco-93-63...

利用免疫共沉淀技术研究RSVCP、SP和NSvc4蛋白的互作

关键词: 水稻条纹病毒  免疫共沉淀  蛋白互作  

为了检测水稻条纹病毒（Rice stripe virus, RSV）外壳蛋白（coat protein，CP）、病害特异蛋白（disease-special protein，SP）和可能的运动蛋白NSvc4自身和两两之间的互作关系，首先通过PCR扩增获得了分别融合有HA或c-Myc标签的RSVCP、SP和NSvc4基因，并将其插入到植物表达载体pEGAD或pKYLX71：35S2中。重组质粒转化根癌农杆菌（Agrobacteriu...

蔬菜作物抗病基因研究进展

关键词: 蔬菜作物  抗病基因  结构与功能  

蔬菜作物对病原物的侵袭具有多层次的防御机制，其中R基因介导的抗病反应是抵御病原物入侵的重要方式。对蔬菜抗病基因的克隆策略、结构与功能、分布与排列，以及R蛋白-无毒蛋白的互作机制进行了综述，并对抗病基因的研究前景进行了展望。

RAPD分析野生和养殖太湖秀丽白虾的遗传多样性

关键词: 太湖秀丽白虾  野生种群  养殖种群  rapd  遗传多样性  

秀丽白虾（Exopalaemon modestus）广泛分布于我国淡水湖泊及河流中，南北均产。在太湖的虾类组成中．秀丽白虾占50％以上。近年来，由于水质污染和过度捕捞等原因，太湖秀丽白虾的繁衍、生存受到了很大威胁，白虾种质资源保护及增养殖已迫在眉睫。不少学者应用RAPD技术对虾类种群结构和遗传多样性进行了研究（孟宪红等，2004；张海琪等，2004）...

中国少鳞鳜不同地理群体遗传变异的AFLP分析

关键词: 中国少鳞鳜  群体  遗传变异  aflp  

少鳞鳜（Coreoperca）为东亚特有的淡水鱼类，现生种类有3种：中国少鳞鳜（C．whiteheadi）、朝鲜少鳞鳜（C．herzi）和日本少鳞鳜（C．kawamebari）（周才武等，1988）。关于少鳞鳜种内群体间的遗传差异比较研究极少，仅Okazaki and Jeon（1996）利用同工酶技术研究了日本少鳞鳜和朝鲜少鳞鳜不同群体间的遗传差异。AFLP技术在水生动物遗传学研...

三种对虾病毒多重荧光PCR检测方法的建立

关键词: 白斑综合征病毒  传染性皮下及造血器官坏死病毒  桃拉综合征病毒  多重荧光pcr  

对虾白斑综合征病毒（White spot syndrome virus ,WSSV）、传染性皮下和造血器官坏死病毒（Infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus ,IHHNV）和桃拉综合征病毒（Taura syndrome vires ,TSV）是当前严重危害对虾养殖业的3种病毒。日前国内外还没有应用荧光PCR同时检测这3种病毒的研究报道。本研究设计多对引物，建立同时检测...

《农业生物技术学报》编辑委员会