白藜芦醇衍生物TMS对脂多糖诱导血管内皮细胞表达NO、ICAM-1和NFκB的影响

付海燕 胡占升 杜红阳 辽宁医学院附属第一医院重症医学科 辽宁医学院附属第一医院皮肤科 辽宁锦州121001

关键词:5 脂多糖 血管内皮细胞 no 

摘要:目的探讨白藜芦醇衍生物反式-3,5,4'-三甲氧基二苯乙烯(TMS)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEs)表达NO、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和核转录因子-κB(NF-KB)的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度TMS对HUVEs存活率的影响。细胞分为正常对照组(CON组)、LPS组、低浓度TMS+LPs组、中浓度TMs+LPs组、高浓度TMS+LPS组和吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)+LPS组,不同浓度TMS和10μmol/LPDTC预处理细胞,0.1μg/mL的LPS进行诱导后,Griess法检测各组细胞产生的NO浓度;Real-timePCR检测ICAM-1、NF-κBp65的mRNA表达;Westernblotting检测ICAM-1、NF-κBp65和IKBot的蛋白表达;免疫细胞化学染色检测ICAM-1及NF-κBp65的蛋白表达。结果较低浓度(5、10μmol/L)TMS对细胞的存活率影响较小,而较高浓度(50、100μmol/L)TMS处理后,细胞存活率明显下降,并呈时间、剂量依赖性。Griess法结果显示低、中、高浓度TMS+LPS组与PDTC+LPS组的NO表达量均较LPS组降低(P〈0.05)。Real-timePCR和Westernblot-ting检测结果均显示,与LPS组、c0N组相比,中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中ICAM-1、NF-κBp65的mRNA和蛋白表达差异均有统计学意义(P〈0.05,P〈0.01)。Westernblotting结果还显示,除CON组外,NF-κBp65蛋白在LPS组、中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中均有核表达;IKB仅蛋白在LPS组中表达量较CON组降低(P〈0.01),其在中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组的表达低于CON组(P均〈0.05)。细胞免疫荧光检测结果显示,ICAM-1蛋白在LPS组中表达强荧光,在中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中表达均减弱;NF-κBp65蛋白在cON组中无表达,在LPS组中为细胞核荧光强表达,在中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中荧光表达相对减弱,且无核表达。结论白藜芦醇衍生物TMS抑制LPS诱导血管内皮细胞的NO、ICAM-1和NF-κBp65表达,且其对ICA

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