生物技术通报杂志

口蹄疫疫苗研究新进展

关键词: 口蹄疫  疫苗  进展  

口蹄疫是世界性重大动物疫病之一。接种疫苗是预防该病的重要手段之一，而研制高质量、安全有效的疫苗，不但是决定疫苗免疫效果的关键，也是成功预防、控制直至最终消灭口蹄疫的先决条件。目前，除传统疫苗仍然在口蹄疫防控中扮演重要角色以外，国内外诸如亚单位疫苗、载体疫苗、核酸疫苗、基因缺失疫苗、合成肽疫苗、可饲疫苗和多表位疫苗等的...

保护剂及其在口蹄疫疫苗中的研究进展

关键词: 保护剂  口蹄疫疫苗  研究进展  

保护剂在动物疫苗中具有重要的作用，直接影响疫苗的质量。以保护剂为核心介绍了在疫苗保存前病毒抗原和保护剂的准备，保护剂的选用原则，分类、作用机理，着重讨论了保护剂在口蹄疫疫苗中的研究进展以及当前存在的问题，并对其应用前景提出展望。

蛋白质新功能定向进化研究策略

关键词: 定向进化  蛋白质新功能  计算结合设计  噬菌体展示  分子进化模型  

利用定向进化策略改造蛋白质功能已经在农业、工业和医药等领域得到了广泛的应用。蛋白质工程的最新进展是利用定向进化策略对自然界蛋白质引入新功能，但由于其决定因素比较复杂，是研究者面临的一个重大挑战。详细介绍了国外近年发展的蛋白质新功能定向进化研究策略：对传统突变体库构建策略进行改进以及非同源重组改造技术的开发，是早期引入...

糖蛋白的研究进展

关键词: 糖蛋白  糖链  分离鉴定  结构分析  

糖蛋白是由糖链与多肽链以多种形式共价修饰而形成的一类重要生理活性物质。糖蛋白在生物体内种类繁多，分布广泛，具有重要的功能。糖蛋白的性质及功能和糖链的结构有关，因此糖蛋白中糖链的结构及作用机制研究成为生物学基础理论的课题之一。就近年来糖蛋白研究中糖蛋白样品的提取分离、糖链释放及结构分析的技术方法及研究领域作了简要介绍。

PIN蛋白在生长素极性运输中的作用

关键词: 生长素  生长素极性运输  pin蛋白  植物生长调节剂  

PIN蛋白是生长素流出载体，它在细胞中的不对称分布决定细胞间生长素流方向。PIN蛋白网络系统决定生长素的极性运输，为植物体各部位的细胞提供了特异的位置和方向信息。从细胞水平上介绍PIN蛋白在生长素极性运输中的作用及对PIN蛋白功能调节的研究进展。

PTH融合蛋白研究进展

关键词: 人甲状旁腺激素  融合蛋白  长效药物  骨质疏松症  

甲状旁腺激素（Parathyrroid Honllone）是由甲状旁腺主细胞合成和分泌的一种单链多肽激素，是人体内维持血钙恒定的主要激素。PTH在人体内的生理功能非常广泛，PTH类似物已被开发成为治疗骨质疏松症的一系列新型药物。为了克服人PTH分子量小、在人体内代谢快、临床应用不方便的缺点，长效融合蛋白体的研究逐渐成为一种趋势，并且取得了一定的成...

海胆主要卵黄蛋白研究进展

关键词: 海胆  主要卵黄蛋白  研究进展  

海胆的主要卵黄蛋白（major yolk protein，MYP）大量存在于海胆卵中，同时存在于海胆精巢和卵巢中，为配子发生及胚胎发育提供营养。经比对发现，海胆MYP cDNA序列与其他物种卵黄蛋白原并无明显相似性，而与铁传递蛋白具有更高的相似性，有研究认为MYP为铁传递蛋白。据其存在场所和合成时期的差异，MYP可分为为CFMYP（存在于体腔内，受精后合成...

毕赤酵母表达体系中重组蛋白的分离纯化

关键词: 毕赤酵母  重组蛋白质  分离  纯化  

随着基因重组技术的快速发展，基因工程产品的利用越来越广泛，但其分离纯化的成本约占总成本的60％-70％。因此，探索一些简单有效的分离纯化方法尤为必要。简单介绍了目前较为流行的毕赤酵母表达体系，着重概述了重组蛋白分离纯化技术方法的应用情况。

脲酶在生物工程中的应用

关键词: 脲酶  固定化  尿素  ph稳定  生物反应器  

脲酶是一种高效的尿素分解催化剂，化学反应速度是常规化学催化的10^14倍，广泛应用于工业、农业和医药行业。论述脲酶在生物工程中的应用，内容包括检测血、尿、酒饮料、天然水和环境污水中尿素；检测肌酐和精氨酸；消除肾衰竭病人体内多余尿素，消除酒饮料和废水中尿素；回收太空飞船上的废水和控制多级酶促反应中的pH。

雨生红球藻对环境胁迫的分子防御机制

关键词: 雨生红球藻  胁迫  分子防御  

虾青素是一种具有极强的生物抗氧化性的类胡萝卜素，在医药，食品等方面均有广阔的应用。雨生红球藻在逆境下能够大量积累虾青素，已成为目前研究的热点。从雨生红球藻生存的角度来看，虾青素的积累是细胞对逆境防御的方法之一。除此之外，雨生红球藻还通过调整相关酶的表达类来使细胞度过难关。主要综述了雨生红球藻对环境胁迫防御的两种分子机...

氧化亚铁硫杆菌亚铁氧化系统的研究进展

关键词: 氧化亚铁硫杆菌  亚铁氧化  电子传递链  

氧化亚铁硫杆菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）为无机化能自养菌，革兰氏阴性，能在极端酸性环境中生长。由于在生物冶金中的应用及特殊的生理学效应，该茵受到研究者的广泛关注。A．ferrooxidans能氧化亚铁、元素硫及还原态硫化物获得电子，并通过一系列电子载体将电子传递给氧生成水，同时释放能量供生命活动需要。目前对A．ferrooxidans...

莽草酸生物合成途径的调控

关键词: 莽草酸  生物合成途径  遗传改造  工程菌  

莽草酸是合成生物碱等许多其它物质的前体。近年来，莽草酸作为临床上惟一有效的抗禽流感药物——迭啡的原料而倍受关注。简述了莽草酸生物合成的途径，着重从基因工程角度分析了莽草酸合成过程中的关键酶及其对莽草酸产量的影响，旨在为研究和开发微生物工程菌生产莽草酸提供参考。

PCR-DGGE技术及其在植物微生态研究中的应用

关键词: 变性梯度凝胶电  泳微生物多样性  植物微生物生态学  

植物中微生物种类较为丰富，在植物微生态系统中发挥重要作用。变性梯度凝胶电（aenaturing gradient gel electrophoresis，DGGE）技术作为研究微生物物种多样性和种群动态变化的分子检测工具之一，广泛应用于植物微生物群落多样性和群落动态变化研究中。概述了DGGE技术的原理，及其在植物微生物生态学中的应用以及在该领。域研究中导致DGGE偏...

cDNA文库技术在植物抗旱机制研究中的应用

关键词: cdna文库  抗旱  est  应用  

cDNA文库是指生物不同生长发育时期特定组织或器官所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA与载体连接后形成的克隆的集合，在基因分离、克隆及功能研究中具有重要作用。就cDNA文库构建及其在植物抗旱机制研究中的应用进行综述。

玉米C4型NADP—ME的生物信息学分析

关键词: 玉米  结构与功能预测  进化树  

利用生物信息学软件对GeneBank上注册的玉米C4型NADP—ME进行氨基酸组成、功能域、二级结构、疏水性、导肽、亚细胞定位、蛋白质功能及系统进化分析和预测。结果表明，NADP—ME蛋白是等电点为6．09的亲水性不稳定蛋白，包含一个结合NAD（P）的结构域和一个N-末端区域，属于裂解酶类，具有能量代谢的功能，定位于叶绿体中；仅螺旋和不规则卷曲是...

抗旱、耐盐基因P5CS转化向日葵自交系

关键词: 向日葵  p5cs基因  遗传转化  pcr扩增  

以向日葵保持系75—33B和恢复系Ht80—97的子叶为转化受体材料，用携带P5CS基因的双元载体系统的根癌农杆菌进行叶盘转化，获得抗Kan的转化芽。提取转化芽总DNA进行PCR检测及PCR—Southern杂交检测，证实获得阳性抗性芽75—33B2株，Ht80—974株，转化率分别为3．17％和4．65％。

河套蜜瓜花粉管通道法转化hALR基因

关键词: 人肝再生增强因子  果实特异性  花粉管通道法  河套蜜瓜  

为利用河套蜜瓜为生物反应器生产可用于治疗肝病的蛋白因子，以人胎肝mRNA为模板，经RT-PCR扩增获得了471bp cDN段。克隆到pMD18-T载体，命名为pMD—ALR，测序分析结果与GenBank中报道的bALK编码序列完全相同。酶切回收hALR片段，插入到含有甜瓜果实黄瓜素（Cucumisin）基因启动子的果实特异性表达载体pPZP-CGN中，构建了hALR甜瓜果实特异性表达...

沙枣细胞悬浮培养体系的建立

关键词: 沙枣  外植体  愈伤组织  悬浮培养  培养基  激素  

分别以沙枣幼嫩叶片，茎段为外植体诱导沙枣愈伤组织，选择生长旺盛的松散愈伤组织进行细胞悬浮培养，探讨了培养基种类和激素组合对其产生的影响。结果表明，最适的沙枣愈伤组织诱导培养基为NT（包括0．1mg·L^-1 BA和0．1mg·L^-1 TDZ）；沙枣悬浮细胞在MS，NT，WPM，B5和IS培养基中均可生长，其中在NT培养基中生长状态最好．呈现生长均一的绿色...

猪下丘脑发育差异表达基因的分离、克隆与表达

关键词: 猪  下丘脑  基因  克隆  

在小梅山猪下丘脑不同发育阶段，用mRNA差异显示技术分离并筛选出一个差异表达片段，命名为CQ01，221bp。测序与BLAST分析发现，CQ01与猪血管内皮生长因子A（VEGVA）高度同源96％。半定量分析结果显示，CQ01在初情期时下丘脑中表达量较高。

酶法对猪皮胶原蛋白水解物紫外吸收能力的影响

关键词: 猪皮  胶原蛋白  紫外线  

旨在获得具有良好紫外线吸收能力的猪皮胶原蛋白水解物，使之能作为一种天然的防晒素材应用于保养品中。以猪皮为材料，获取胶原蛋白后，经不同温度预热，应用凤梨酶、木瓜酶、胃蛋白酶等进行不同时间水解。结果显示，所得的水解液均对短波紫外线吸收能力最佳，其次为中波紫外线，三者中以胃蛋白酶组较佳。以0．5％胶原蛋白经95℃预热30min。再...

奶牛结核病诊断方法的比较研究

关键词: 牛结核  ppd  indirect  elisa  胶体金  

旨在比较目前实验室用于检测牛结核方法及PPD皮内变态反应检测牛结核的敏感性和特异性。对145头进行了PPD结核菌素实验的牛进行了IFN-γ体外释放试验，ELISA方法检测ESAT-6，CFP-10，MPB70，MPB83四个蛋白的抗体，胶体金检测两种相似蛋白MPB70和MPB83。结果表明，IFN-γ体外释放试验的敏感性和特异性最高，与PPD皮内变态反应有较高的符合性。在抗...

富甘氨酸果蝇抗菌肽在大肠杆菌中的直接表达和纯化

关键词: 果蝇  富甘氨酸抗菌肽  直接表达  纯化  葡萄糖效应  

利用RT—PCR技术从果蝇总RNA中克隆出富甘氨酸果蝇抗菌肽基因，将该基因插入原核表达载体pET-32a（＋）的Nde I和Xho I酶切位点之间，然后用重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）利用乳糖操纵子的葡萄糖效应IPTG诱导表达，经15％SDS—PAGE、Western blot分析，在大约8kD处出现了含6×His标签的抗菌肽蛋白。再以Ni—N TA纯化树脂进行亲和层析、脱盐、...

家蝇幼虫抗菌肽对铜绿假单胞菌感染小鼠创面的抗菌活性

关键词: 家蝇  抗菌肽  超声诱导  铜绿假单胞菌  伤口感染  

通过超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽，观察抗菌肽对铜绿假单胞菌感染小鼠创面的抗菌作用。超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽，经分离纯化后，体外试验分析抗菌肽的抑菌特性。结果表明，术后对照组小鼠相比其他两组活动减少，且3组白细胞计数均减少。14d后对照组存活率为30％，明显少于磺胺米隆组90％（P〈0．05）和抗菌肽组80％（P〈0．05）。对...

脂多糖快速银染检测方法的改良

关键词: 脂多糖  快速检测  银染  改良方法  

为了建立一种快速、高效的脂多糖（LPS）银染检测方法，利用大肠杆（Escherichia coli 0111：B4）制备的LPS为研究对象，在传统LPS银染检测方法的基础上，通过调整凝胶的固定氧化试剂和银染试剂等措施，对LPS经SDS—PAGE电泳后的结果进行银染检测。结果表明，改良的LPS快速银染检测方法在保持传统方法灵敏度的基础上，操作过程更为简单，安全性...

新基因PRR11的克隆、原核表达及鉴定

关键词: prr11基因  原核表达  

克隆新基因PRR11的开放阅读框区，构建其原核表达载体，并进行表达检测及鉴定。以Hela细胞cDNA为模板，RT—PCR扩增PRR11基因，克隆入原核表达载体PET-28a中，酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a—PRR11。然后把PET-28a—PRR11重组载体转化到BL21中，经IPTG诱导蛋白表达，提取细胞蛋白并采用SDS—PAGE和蛋白质免疫印迹法...

人类3-磷酸甘油醛脱氢酶的原核表达、纯化和鉴定

关键词: 原核表达  免疫印迹  

为了研究3-磷酸甘油醛脱氧酶（GAPDH）化生物学功能，以pcDNA3．1-GAPDH质粒为模板．PCR方法扩增删PDtt基因，经BomHI和SalI双酶切后插入相同酶切的pET32a（＋）载体，构建His—GAPDH融合蛋白表达质粒pET32a（＋）-GAPDH；转化JM109感受态细胞，并进行阳性克隆筛选，扩增目的质粒；转化大肠杆菌BL21菌株，经IPTG诱导产生融合蛋白，亲和层析柱纯...

重组磷脂酰丝氨酸合成酶的分离纯化及酶学性质研究

关键词: 枯草芽孢杆菌  磷脂酰丝氨酸合成酶  纯化  性质  

利对重组枯草芽孢杆菌（pBES-pss）表达的磷脂酰丝氨酸合成酶进行分离纯化及酶学性质研究。pBES-pss发酵后的粗酶液经硫酸铵盐析、中空纤维膜除盐浓缩、SP—SepharoseHP离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析。基本获得电泳纯的重组磷脂酰丝氨酸合成酶，比活力可达13．62U／mg，分子量约为53kD。酶学性质研究表明，该酶催化卵磷脂水解反应的最适p...

V型磷酸二酯酶的活性测定及其抑制剂的研究

关键词: fplc  抑制剂  放射性同位素  cgmp  

研究以3＇，5＇-环鸟苷酸（cGMP）为特异底物的Ⅴ型磷酸二酯酶（PDE5）活性及新合成的化合物CYⅠ、CYⅡ、CYⅢ和CYⅣ对该酶的抑制作用。以人血小板为原料，通过快速蛋白液相色谱系统（FPLC）分离纯化得到PDE5，利用3H—cGMP同位素两步分析法检测PDE5的活性。再以不同剂量的4种化合物作用于PDE5，观察它们对PDE5的抑制效应，从而筛选出PDE5的高效...

合成己酸乙酯脂肪酶产生菌的筛选及发酵条件的研究

关键词: 脂肪酶  筛选  产酶条件  

以有机相中合成酶活为指标，通过对薰衣草根际土壤产脂肪酶菌株的筛选，获得了一株在有机相中合成己酸乙酯转化率相对较高的细菌Arthrobacter Y-605，其己酸乙酯转化率为67．53％。考察了影响该菌株产脂肪酶的各项因素，确定其最佳培养基组分：2％玉米粉，1％黄豆粉，0．1％尿素，0．05％MgSO4，O．1％K2HPO4，0．15％KCl；最适培养条件：初始pH...

纳米金基因芯片结合通用PCR同时检测多个病原性真菌

关键词: 纳米金  基因芯片  聚合酶链反应  真菌  

基于致病性真菌rDNA基因分型技术，构建采用通用引物的一次PCR法，并结合纳米金新型基因芯片检测系统实现一次对多个临床常见致病性酵母菌的检测分析。用生物素标记的通用引物扩增各真菌DN段并与基因芯片杂交，然后将链酶亲和素标记的纳米金结合到杂交体上，杂交信号通过银染反应被放大形成裸眼可见的显色信息。结果表明，通用引物可扩增临床常...

溶解肠杆菌的交流电电解刺激过程

关键词: 交流电  溶解肠杆菌电解刺  激脱氢酶  过氧化氢  

以葡萄糖为惟一碳源，研究了溶解肠杆菌（Enterobacter dissolvens）在外加电场交流电的刺激下细胞的生长矛口代谢的过程。研究表明，在低电流10mA刺激下，交流电刺激下的细菌没有明显的刺激效应；当采用100mA的电流通电24h，交流电刺激下的细菌出现了明显的刺激效应，当通电12h后，菌液葡萄糖的降解率和脱氢酶活性分别为对照参比的1．4倍和2．1...

变性高效液相色谱检测沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌

关键词: 沙门氏菌  空肠弯曲菌  变性高效液相色谱  

应用多重PCR反应（multiplex PCR，mPCR）结合变性高效液相色谱（denaturing high—performance liquid chromatography，DHPLC）技术建立食品中沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌0157：H7的快速检测方法。以编码沙门氏菌的fimY基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码肠出血性大肠杆菌0157：H7的rfbE基因为靶基因，选择3对引物，建立并优化...

福州森林红壤细菌的菌群结构及其功能分析

关键词: 木质纤维素分解  红壤生态系统  rflp分析  细菌菌群结构  生态功能  

福建地区是我国的第二大林区，土壤类型主要表现为红壤。对福州地区森林中因木材腐朽而形成的树洞中的土壤样品进行筛选，构建了一份具有强木质纤维素降解能力的酸性红壤的细菌16S rKNA基因文库，利用限制性片段长度多态性（RFCP）对随机克隆进行筛选；对该生态环境下的细菌菌群进行了系统发育分析。结果表明土壤pH偏酸性严重影响了细菌类群的多...

洋葱伯克霍尔德氏菌HMW DNA的制备及酶切研究

关键词: 高分子量dna  粘粒文库  胶块  脉冲场电泳  

高质量粘粒基因组文库构建的关键是HMW DNA的长度至少为粘粒载体容量的10倍，通常粘粒载体的容量为30-50kb，因此提取的HMW DNA应不小于500kb。HMW DNA在制备时不能受到任何物理的剪切力，以免DNA断裂和损伤。利用琼脂糖凝胶包埋制备的DNA胶块经裂解和纯化后发现其DNA长度远大于500kb，明显优于商品化试剂盒提取和酚抽提法。用BamH Ⅰ、Sau3A Ⅰ...

《生物技术通报》编辑委员会