生物技术通讯杂志

核孔蛋白p62促进非受体酪氨酸激酶c-Abl进入细胞核

关键词: 核孔蛋白p62  

非受体酪氨酸激酶c-Abl广泛表达于各组织细胞中,其序列高度保守,它的亚细胞定位与其功能密切相关.c-Abl借助其C端的3个核定位信号(NLS)和1个核输出信号(NES)完成细胞核-细胞质间的穿梭过程.关于c-Abl核-质穿梭的详细机制还不清楚.通过酵母双杂交系统,以人类Ib型c-Abl作为诱饵蛋白进行HeLa细胞cDNA文库的筛选,获得了可能在c-Abl核-质穿梭过程中具...

利用小干涉RNA抑制肿瘤细胞MCF-7中NF-IL6的表达

关键词: 小干涉rna  蛋白表达  转录活性  肿瘤  

RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术.转录因子NF-IL6特异地在肿瘤组织中过量表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利.构建能够沉默转录因子NF-IL6表达的小干涉RNA(siRNA)质粒,转染肿瘤MCF-7细胞后,用Western印迹法和荧光素酶活性实验检测NF-IL6表达水平和转录活性的改变.结果发现NF-IL6的表达水平被下调80%,转录激活...

表面活性蛋白A启动子指导Cre重组酶在转基因小鼠Ⅱ型肺上皮细胞中表达

关键词: cre重组酶  表面活性蛋白a启动子  转基因小鼠  

Ⅱ型肺上皮细胞合成和分泌肺表面活性物质(PS),与肺损伤后的修复有关,很多肺相关疾病的发生伴随有Ⅱ型肺上皮细胞功能不全及PS系统缺陷.Ⅱ型肺上皮细胞在肺的发育、机体免疫及疾病的发生发展过程中的具体功能尚不明确,对调控Ⅱ型肺上皮细胞功能的遗传机制也知之甚少.为了利用Cre-loxP系统研究调节Ⅱ型肺上皮细胞功能的遗传机制,研制了表面活性蛋...

SARS冠状病毒囊膜E蛋白的重组表达与单克隆抗体制备

关键词: sars冠状病毒  囊膜蛋白  原核表达  单克隆抗体  

从基因库中调取SARS冠状病毒囊膜E蛋白基因序列,用连接PCR方法合成完整片段.测序确认后与人免疫球蛋白(IgG)序列Fc段连接并克隆至原核表达载体pPRO EX Hta中.从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb).连接PCR扩增出231 bp的DNA,测序结果与GenBank公布的序列一致,与人IgG序列Fc段基因连接后克隆至原...

痢疾杆菌酸抗性系统相关基因缺失突变体的构建

关键词: 痢疾杆菌  基因敲除  red重组系统  酸抗性  

依赖于谷氨酸脱羧酶的酸抗性系统对痢疾杆菌在宿主细胞内的生存和繁殖至关重要,hdA、hdeB、yhiE和yhiF是其中几个重要的酸抗性基因.借助Red系统的重组功能,PCR扩增两翼与目的基因上下游同源的抗性基因片段,电击转化痢疾杆菌2457T,对筛选到的阳性转化子再导入编码FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20以去除抗性基因.结果成功的敲除了hdeA、hdeB、yhiE...

小鼠脂联素与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达

关键词: 脂联素  绿色荧七蛋白  融合基因  真核表达  

以绿色荧光蛋白(GFP)基因(gfp)为报告基因,构建小鼠脂联素(mADPN)基因(mAd)与gfp的融合基因mAd/gfp表达载体pCI-neo-apoEHCR-hAATp-mAd-gfp,脂质体法转染体外培养的COS-7细胞,荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达可间接反映mADPN的表达,并通过RT-PCR在核酸水平进一步确证mAd的表达.荧光显微镜观察及RT-PCR结果均证明mADPN在COS-7细胞中获得了高效表...

结构生物学研究中的eIF-5A的表达与纯化

关键词: 表达  纯化  核磁共振  结构生物学  

真核细胞翻译启始因子eIF-5A(eukaryotic initiation factor 5A)是迄今发现的惟一含有特殊氨基酸hypusine残基的蛋白质,其具体生物学功能仍不明确.为了推进对其功能的研究,拟从结构生物学入手,对其结构进行核磁共振(NMR)结构解析.利用GST融合蛋白原核表达系统,将eIF-5A进行原核表达,经过优化表达与纯化条件,得到了高产率与高纯度的可溶性eIF-5A...

欢迎订阅2006年《医疗卫生装备》杂志

R6基因在小鼠胚胎发育中期肾组织的表达

关键词: r6基因  细胞增殖  细胞凋亡  肾  

用原位杂交法检测小鼠肾组织中细胞周期调控基因Rb的表达；用免疫组织化学及缺口末端标记法观察小鼠肾组织发育过程中的细胞增殖与凋亡：结果表明，Rb基因主要在肾上皮细胞表达，随胎龄增长而表达颜色加深。肾组织在第13天有一个较大的增殖增长，到第14天生长趋于稳定。以上结果说明Rb基因在小鼠胚胎肾发育中期有表达，该基因在胚胎肾发育中期起...

炭疽芽孢杆菌保护性抗原在大肠杆菌中的表达及纯化

关键词: 炭疽杆菌  保护性抗原  表达  

按照炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)基因成熟肽编码序列设计引物,从炭疽杆菌pOX1质粒中扩增出PA基因片段,将该片段定向插入到原核表达载体pET-28a中;获得了pET-PA原核表达重组质粒,限制性酶切分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为PA基因的成熟肽编码序列.将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白在大肠杆菌表达系统中获得了高效...

结核分枝杆菌furA基因真核表达质粒的构建及表达

关键词: 结核分枝杆菌  fura  基因  真核表达  

以BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切pRSET-furA,获得结核分枝杆菌铁调控基因furA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),构建了重组质粒pcDNA-furA.经酶切鉴定正确后,将重组质粒以阳离子聚合物转染CHO细胞.经RT-PCR分析表明,furA可在CHO细胞中转录;用间接免疫荧光检测,表达有FurA蛋白的细胞着染.以上结果表明,通过构建结核分枝杆菌furA基因的真核表达载体pcD...

绿色荧光蛋白基因在转基因小鼠体内的表达

关键词: 显微注射  绿色荧光蛋白  转基因小鼠  

建立绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠,继而传代建系.采用显微注射法,将GFP基因注入FVB/NJ小鼠受精卵原核内,获得子代鼠.分娩后3周剪取仔鼠尾,提取基因组DNA,应用PCR、Southern印迹技术进行整合检测.结共用雌性小鼠200只,注射受精卵1 586枚,移植卵数386枚,受体鼠32只,怀孕鼠4只,子代鼠18只,有4只为阳性.取2只首建鼠的胚胎,在荧光显微镜下观察GFP表达...

野生大豆种子cDNA文库的构建与分析

关键词: 野生大豆  种子  cdna文库  pcr  

为了分离与鉴定野生大豆优良基因,以双高型优质野生大豆的近成熟种子为材料,采用裂解法提取了总RNA;以Oligo(dT)为引物,经SA-PMPS法分离出mRNA,反转录酶催化合成cDNA,并以cDNA第一链为模板在DNA聚合酶I的作用下合成cDNA第二链,双链cDNA经加接头等步骤,成功构建了野生大豆cDNA文库.文库的重组率约为93.7%,PCR检测重组克隆的插入片段平均大于1 000...

欢迎订阅《遗传学报》、《遗传》杂志

降钙素基因对胡萝卜的遗传转化

关键词: 胡萝卜  降钙素  遗传转化  

以新透心红胡萝卜为植物材料,用微弹轰击法对胡萝卜愈伤组织进行了降钙素基因的遗传转化.对所得再生植株进行了PCR检测及Southern印迹检测.在16棵Kan抗性株中有13棵PCR阳性株;4棵存活的PCR阳性株经Southern印迹检测,有3株为阳性.对收获的2个肉质根做PCR检测,均为阳性;对其中较大的肉质根作Southern印迹检测,结果也为阳性.这些检测结果说明降钙素...

Bt棉与常规棉根际土壤Bt毒蛋白和植物激素变化动态

关键词: 抗虫棉  根际  bt毒蛋白  植物激素  

通过ELISA法对常规棉(石远321)和转基因抗虫棉(99B、SGK321)根际土壤苏云金芽孢杆菌(Bt)毒蛋白和植物激素含量进行了分析,结果表明抗虫棉根际土壤Bt毒蛋白含量显著高于常规棉,特别是从苗期到盛花期抗虫棉根际土壤Bt毒蛋白含量高出常规棉200～300 ng/g.抗虫棉根际土壤中脱落酸(ABA)和生长素吲哚乙酸(IAA)含量变化趋势与常规棉相比表现出较大差异....

条斑紫菜R-藻红蛋白提纯工艺研究

关键词: 条斑紫菜  藻红蛋白  提取  纯化  

对条斑紫菜叶状体R-藻红蛋白提纯方法进行了研究和分析.首先分别采用冻融法、化学试剂法、溶胀法等单一及组合细胞破碎方法对条斑紫菜细胞进行破碎,结果表明溶胀+组织捣碎法效果最佳.其次用25%～60%饱和度范围内的硫酸铵沉淀法粗提藻红蛋白,发现25%～45%硫酸铵分步沉淀法效果最好,再经结晶法盐析纯度(D565nm/D280nm)达到2.088.盐析液用Sephadex ...

葛根总黄酮分离纯化的研究

关键词: 葛根  黄酮  大孔树脂  分离  纯化  

筛选分离葛根总黄酮的最佳树脂,并对影响分离的各种因素进行系统研究,使分离工艺达到最优化.采用静态与动态的吸附-解吸2种方法,利用紫外可见分光光度计测量葛根总黄酮的含量.结果以SP70分离效果最好,其最佳工艺为药液浓度0.5 g/mL(相当于原生药)、pH5～6、上样量60 BV(倍体积)、以2 BV/h速率进行上样;以5 BV的70%乙醇、2BV/h的流速进行洗脱效果...

欢迎订阅2006年《草食家畜》杂志

生物隋性纳米粒子的体内分布、移行和排泄

关键词: 纳米粒子  分布  排泄  

给小鼠或兔静脉注射印度墨水或纳米活性炭,取标本进行病理观察或取胆汁和尿液制备涂片进行电镜观察,以研究生物惰性纳米粒子在体内的分布、移行及其排泄.结果在病理切片中发现纳米粒子除广泛分布于网状内皮系统外,也可见于胃肠道上皮细胞、杯状细胞等部位;电镜观察发现胆汁及尿液中存在大量纳米粒子.以上结果表明,生物惰性纳米粒子可在体内进行...

三七总RNA提取方法的对比研究

关键词: 三七  改进的异硫氰酸胍一步法  异硫氰酸胍高盐法  总rna  提取  

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas'RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性.结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA.RT-PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性.这2种方法具...

《医学研究生学报》征订、征稿启事

一种从鱼类肌肉组织中提取基因组DNA的简易方法

关键词: 鱼类  肌肉组织  基因组dna  提取  

以泰山螭霖鱼、黄河鲤鱼、东平湖鲫鱼为材料,采用改进的酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取基因组DNA,并对其进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定.结果表明,本方法提取的鱼类基因组DNA浓度为0.9～3.25μg/μL,D260nm/D280nm值为1.79～1.87,电泳条带整齐明亮,适合微卫星PCR扩增.因此,本方法能够从鱼类...

一种快速提取植物病毒DNA的方法

关键词: 病毒dna  葡聚糖凝胶  提取  pcr  

介绍在PCR检测体系中一种快速提取病毒DNA的方法.利用高盐缓冲液溶液释放病毒DNA,同时利用葡聚糖凝胶微柱纯化提取液,有效消除样品中PCR抑制物质并直接作为PCR反应模板扩增检测病毒.该法无需任何特殊设备,适合对大量植株进行大通量的检测分析.

《中国药学文摘》、中国药学文献数据库网络版、光盘2006征订启事

KCNQ1基因及其编码钾通道的研究概况

关键词: kcnq1基因  钾离子通道  长qt综合征  电生理  

本文介绍了KCNQ1基因和其编码的通道蛋白的结构、生理学功能及电生理特点.归纳了围绕KCNQ1基因的热点研究方向和成果,并展望了未来的研究趋势.对基础医学上关心的KCNQ1基因突变与疾病的关系,及相关的病理药理学研究做了较为详细的介绍.

核孔复合物的结构、组装及功能

关键词: 核孔复合物  核孔素  

核孔复合物(NPC)是一个巨型分子复合物,相对分子质量约125×106.脊椎动物的NPC由大约30种蛋白质组成,这些蛋白质的序列大多具有FG(苯丙氨酸-甘氨酸)重复序列.NPC锚定于双层核膜上,并且是物质跨核膜运输的惟一通道,它可快速介导小分子物质的被动运输以及大分子物质的主动运输过程.虽然NPC具有较大的相对分子质量和复杂的结构,但它可在细胞分裂过程...

SARS冠状病毒的Spike蛋白以及病毒的细胞侵入机制

关键词: sars冠状病毒  spike蛋白  受体  膜融合  中和抗体  

严重急性呼吸系统综合征(SARS)是由SARS冠状病毒(SARS-CoV)引起的一种新型人类疾病,具有高致病性、高传染性、高死亡率的特点.Spike蛋白是冠状病毒膜表面的糖蛋白突出,构成病毒的包膜子粒,在病毒与其受体结合、通过膜融合进入宿主细胞以及诱导机体产生中和性抗体的过程中发挥着重要的作用.目前利用Spike蛋白开发出的一些防治SARS的药物和疫苗在...

PCR克隆新基因策略研究进展

关键词: pcr  pcr衍生技术  新基因  克隆策略  

自从PCR被开发及其基本反应条件被优化以来,这项技术已被应用于分子生物学研究的各个方面.其中应用最多的是从给定的有机体中扩增和克隆新基因.那些从事新基因的结构和功能分析研究的工作者必须获得第一手资料,也就是新基因的序列.而且快速方便地克隆这些新基因序列在很大程度上依赖于那些由PCR技术演变而来的方法.本文综述概括了建立在PCR基础...

可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的应用

关键词: 单纯疱疹病毒  溶瘤  肿瘤  

单纯疱疹病毒是肿瘤生物治疗中常用的病毒载体之一,可复制性单纯疱疹病毒以其溶瘤效率高、特异性好、可行性强成为近年来研究的热点.其中对溶瘤性单纯疱疹病毒突变株G207的研究开展得早,其溶瘤效果、靶向性及安全性都得到了确认,这也带动了可复制性单疱病毒应用的发展,目前已研究出多种溶瘤单纯疱疹病毒突变株.本文就近几年可复制性单纯疱疹病毒...

蛋白质内含肽及其生物学意义

关键词: 蛋白质内含肽  蛋白质外显肽  蛋白剪接  归巢核酸内切酶  

蛋白质内含肽是存在于前体蛋白质中的一段多肽链,靠自我剪切的方式从前体蛋白中释放出来.蛋白质内含肽的发现,不仅在理论上丰富了遗传信息翻译后加工的内容,而且在实践上有重大的生物学意义,特别是在蛋白质纯化方面有着广泛的应用前景.本文就蛋白质内含肽的发现、特征、鉴定、剪接机制及其生物学意义作一概述.

转基因动物乳腺生物反应器的发展概况及人工染色体在其中的应用

关键词: 转基因动物  乳腺生物反应器  位置效应  酵母人工染色体  细菌人工染色体  

转基因动物乳腺生物反应器位点效应的影响是制备转基因动物乳腺生物反应器过程中的主要问题.酵母人工染色体(YAC)和细菌人工染色体(BAC)具有容量大的特性,可以将乳蛋白的整个基因座包括所有调控序列全部装载进去,有可能克服位点效应的影响,是一种理想的载体.YAC和BAC载体转基因技术可能成为避开基因打靶获得高效表达的转基因动物乳腺生物反应器...

基因剔除小鼠研究的新进展

关键词: 基因剔除  胚胎干细胞  遗传背景  血管紧张扶转化酶启动子  小鼠  

基因剔除小鼠是活体内研究基因及蛋白质功能的理想动物模型.传统的基因剔除技术存在表型分析复杂、周期长、操作繁杂等缺点,如何更科学、更方便地建立基因剔除小鼠模型成为目前使该技术更好地应用于医学研究的关键.本文从胚胎干细胞(ES细胞)的遗传背景、组织特异性基因表达基因剔除小鼠及基因剔除技术上的革新几方面介绍了目前基因剔除小鼠研究...

乙酰胆碱酯酶的构效关系研究进展

关键词: 乙酰胆碱酯酶  构效关系  x线衍射  活性中心狭谷  催化机制  

乙酰胆碱酯酶是胆碱能神经传导中的一种关键酶,对其构效关系的研究一直是生命科学的重要课题,目前主要研究手段有X线衍射晶体学、分子生物学、电子顺磁共振等.本文重点介绍应用这些方法研究乙酰胆碱酯酶构效关系所取得的新进展,包括芳香族引导、后门开放、环的纳秒机制与高效催化的关系等.

乙内酰脲酶及其在氨基酸手性合成中的应用

关键词: 乙内酰脲酶  氧基酸  手性合成  

乙内酰脲水解酶、氨甲酰化酶和乙内酰脲消旋酶构成的酶系能够以5-取代乙内酰脲类化合物为原料合成天然和非天然D-或L-氨基酸,用于各种手性氨基酸的生产.近来的研究重点在分离新酶或提高原酶的活性,包括定向突变、三维结构解析与结构功能关系研究、酶固定化、蛋白融合和构建完整细胞生物催化剂等.

miRNA研究方法进展

关键词: mirna  靶基因  研究方法  

miRNA(microRNA)是一类长约22个核苷酸的小分子非编码RNA.miRNA可以通过与靶基因mRNA的特定位点结合,抑制该蛋白的合成或诱导该mRNA的降解,从而参与基因的表达调控.miRNA在各种生物中普遍存在,近年来利用直接克隆和生物信息学方法已从动物、植物、培养细胞和病毒中克隆及预测了数百种miRNA,并通过正反向遗传学技术、碱基互补靶标基因鉴定技术等,...

分子标记在雀形目鸟类研究中的应用

关键词: 雀形目鸟类  线粒体dna  基因组dna  分子遗传标记  

雀形目鸟类一直以来都是动物学工作者研究的热点.目前,针对雀形目鸟类研究的标记主要有2部分:一部分是线粒体DNA中12S rRNA、细胞色素b序列、ND2基因和ZENK等基因序列;另一部分是基因组DNA中的c-myc、RAG-1、肌球素基因和核β-纤维蛋白原基因等DNA序列以及微卫星DNA和单核苷酸多态性(SNP)等.本文概述了这些分子遗传标记在雀形目鸟类中的应用和研...

聚乙二醇化修饰对蛋白多肽药物药代动力学的影响

关键词: 聚乙二醇化  蛋白多肽  药代动力学  生物分布  

聚乙二醇(PEG)化修饰在生物制药领域被认为是改变蛋白多肽类药物生物、理化性质的最佳方法之一.众多研究表明,PEG化后的蛋白多肽在生物体内的药代动力学行为有了很大改变,主要表现在:吸收相半衰期及消除相半衰期延长,血药峰浓度提高,达峰时间滞后,表观分布容积变小,免疫反应性减弱,血浆清除减慢.这些变化极大地改善了蛋白多肽药物在机体内清除快...

代表性差别分析方法及其改进

关键词: 代表性差异分析  基本原理  筛选  改进  

代表性差别分析方法(RDA)以及改进的cDNA代表性差别分析方法(cDNA RDA)是近年发展起来的新技术,在基因差异表达分析和筛选差异基因的研究中有着广泛的应用前景.本文较为详细地介绍了代表性差异分析方法的基本原理和技术流程,同时针对该技术存在的缺陷和不足,总结了近年来在具体应用过程中对代表性差别分析方法的一些优化改进,并对该技术的发展趋...

自身免疫性疾病治疗性疫苗研究进展

关键词: 自身免疫性疾病  治疗性疫苗  进展  

自身免疫性疾病的发生与体内自身反应性T/B细胞的异常活化有关.病理性自身免疫应答是多发性硬化、重症肌无力等自身免疫性疾病的主要致病原因.针对已感染致病原的无症状携带者或发病的患者的自身免疫性疾病治疗性疫苗能特异性地调节异常的免疫应答,具有重要的理论价值和应用前景.