生物技术通讯杂志

多拷贝异种化前列腺干细胞抗原融合基因片段的构建及真核表达

关键词: 前列腺肿瘤  前列腺干细胞抗原  dna疫苗  真核表达  

目的：构建一系列含有人前列腺干细胞抗原（PSCA）主要T细胞表位的多拷贝异种化融合基因片段,并分别在人胚肾293T细胞中表达。方法：通过重叠延伸PCR法合成单拷贝异种化PSCA基因片段PSCA1,随即应用同尾酶法将该片段串联形成2、3、4拷贝异种化PSCA基因片段PSCA2、PSCA3和PSCA4,并将上述4种基因片段分别插入真核表达载体pCI-Fc-GPI中,构建最终目的...

异种化人肾细胞癌特异性抗原G250真核表达载体的构建及表达

关键词: 肾细胞癌  基因疫苗  真核表达  g250  

目的：构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250（CAⅨ）主要T细胞表位区域、猴和鼠CAⅨ部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达。方法：通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igκ链前导信号肽（sig）、人IgG-Fc和糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达...

功能歧化分析揭示代谢型谷氨酸受体亚家族VFTM的分化决定位点

关键词: g蛋白偶联受体  代谢型谷氨酸受体  捕蝇夹结构模块  功能歧化  系统进化  

目的：研究哺乳动物代谢型谷氨酸受体（mGluR）亚家族捕蝇夹结构模块（VFTM）的系统进化形式,确定其VFTM的功能分化决定位点。方法：通过基于系统进化的功能歧化分析,根据贝叶斯模型计算VFTM的选择性限制位点,推测功能分化决定位点。结果：mGluR亚家族VFTM的祖先通过2次基因复制,在不同的氨基酸位点进行选择性限制,形成3组不同的mGluR亚家族成员...

炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体的构建

关键词: 炭疽杆菌  基因敲除  

目的：构建炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体,以进行后续SLP的功能研究,为炭疽芽孢杆菌重要基因功能的研究建立技术平台。方法：利用PCR技术,分别扩增得到目的基因的上游同源臂（slp-F）和下游同源臂（slp-R）,将抗性基因（S）和上、下游同源臂先后连入穿梭质粒pKSV7,构建打靶载体pKSV7-FSR,经去甲基化后,电转化入炭疽芽胞杆菌A16R,通过同...

丙型肝炎病毒核心蛋白对胞外基质金属蛋白酶诱导物基因转录的影响

关键词: 丙型肝炎病毒核心蛋白  胞外基质金属蛋白酶诱导物  双萤光素酶报告基因系统  转录  

目的：探讨丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白对胞外基质金属蛋白酶诱导物（EMMPRIN）基因转录的影响。方法：构建HCV核心蛋白真核表达载体和EMMPRIN启动子删除突变体pGL3载体,应用双萤光素酶报告基因系统检测EMMPRIN启动子不同删除突变体的转录活性,并寻找核心蛋白上调EMMPRIN转录相关的关键启动子区段。结果：HCV核心蛋白可以显著上调EMMPRIN的表达...

parp10基因RNA干扰有效靶点的筛选及验证

关键词: rna干扰  parp10  g418  

目的：合成并筛选有效抑制parp10表达的siRNA。方法：根据parp10 cDNA序列,设计并合成prap10基因潜在的RNA干扰（RNAi）片段,将合成的寡核苷酸序列构建到pEGFP-C1H1U6载体中;通过双萤光素酶试验、Western blotting筛选有效的干扰序列;进一步用G418对A549细胞进行耐受度筛选,确定最低耐受度;用G418溶液对转染RNAi重组质粒的A549细胞进行筛选,通过...

利用λRed重组系统敲除伤寒沙门氏菌rfaH基因

关键词: 伤寒沙门氏菌  rfah基因  基因敲除  

目的：利用λRed重组系统敲除伤寒沙门氏菌的rfaH基因。方法：以伤寒沙门氏菌（Salmonella typhi Ty2,S.ty2）基因组为模板扩增得到的同源臂,与两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段共同构建同源重组载体;以重组载体为模板扩增打靶片段,将其转化S.ty2;在抗生素压力和λRed重组系统帮助下,打靶片段和菌体基因组发生同源重组,通过卡那抗性筛选得到...

酵母双杂交筛选人乳腺cDNA文库中与Gankyrin相互作用的蛋白

关键词: gankyrin  酵母双杂交  rhogdi2  免疫共沉淀  

目的：应用酵母双杂交技术,筛选与Gankyrin有相互作用的蛋白质。方法：应用酵母双杂交系统,以Gankyrin基因全长为诱饵,在人乳腺cDNA文库中筛选能与Gankyrin相互作用的蛋白质,并运用营养缺陷型培养基和X-α-Gal等实验提供的信息,筛除假阳性克隆。结果：以Gankyrin为诱饵筛选出了5个阳性克隆,对其中一个蛋白质RhoGDI2与Gankyrin进行了免疫共沉淀与G...

雌激素受体β转录激活系统的构建

关键词: 转录激活  

目的：构建雌激素受体β（ERβ）的转录激活系统。方法：以pcDNA3-ERβ质粒为模板,利用PCR技术扩增ERβ全长及转录激活结构域1（AF1）、DNA结合结构域（DBD）、转录激活结构域2（AF2）等不同长度的基因片段,分别插入pGAL载体中,构建重组质粒,转染293T细胞,利用免疫杂交方法鉴定其表达情况,用萤光素酶报告基因（Gal4-LUC）检测转录活性。结果：构建了...

乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

关键词: 乙型肝炎病毒  x蛋白  毕赤酵母  真核表达  

目的：在巴斯德毕赤酵母中表达乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白,为探讨HBVX蛋白与慢性乙型肝炎及肝细胞癌发生的关系奠定基础。方法：用PCR方法扩增X基因序列,并分别在上下游引入XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点,插入pPICZαA载体,转化大肠杆菌TOP10,筛选阳性克隆,对其进行PCR和双酶切及测序鉴定,构建HBVX蛋白毕赤酵母表达质粒pPICZαA-HBx;电击转化毕赤酵母GS115,...

手掌参γ-硫素的原核表达及纯化

关键词: 手掌参  原核表达  

目的：在原核系统中高效表达手掌参γ-硫素,并对其进行纯化。方法：通过筛选手掌参cDNA文库获得γ-硫素基因（gcthionin）,分别对其全长及信号肽编码序列缺失的cDN段进行PCR扩增,克隆入原核表达载体pET-32（a）,构建重组质粒pET-32（a）/gcthionin和pET-32（a）/Δgcthionin;测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达融合蛋白;SDS-PAGE分...

胆汁三烯结合蛋白在大肠杆菌中的表达、复性与纯化

关键词: 胆汁三烯结合蛋白  大肠杆菌  融合蛋白  

目的：合成胆汁三烯结合蛋白（BBP）基因并在大肠杆菌中表达,获得重组BBP纯化制品。方法：根据天然BBP的基因序列和大肠杆菌偏好密码子设计并合成BBP基因的引物,PCR扩增优化的BBP基因序列,克隆至载体pEasy-T3;测序正确后,将该序列克隆至表达载体pET-32a上,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21（DE3）pLysS,在IPTG诱导下表达融合蛋白;采用Ni柱纯化融...

应用生物信息学方法筛选幽门螺杆菌疫苗候选抗原

关键词: 幽门螺杆菌  疫苗  抗原  筛选  生物信息学  

目的：应用生物信息学分析方法筛选幽门螺杆菌新的疫苗候选抗原。方法：从TIGRCMR下载幽门螺杆菌26695和J99株全基因组序列,应用生物信息学SignalP、PredTMBB、LipoP、TMHMM、Phobius、PSORT-B和SubLoc等分析软件,筛选幽门螺杆菌新的外膜蛋白和分泌蛋白疫苗候选抗原。结果：从幽门螺杆菌26695株筛选得到54个编码β-桶型跨膜蛋白、脂蛋白或分泌表...

不同烟草中谷氨酰胺合成酶2基因的生物信息学分析

关键词: 烟草  谷氨酰胺合成酶2  生物信息学  

目的：分析不同烟草中谷氨酰胺合成酶2（GS2）基因的结构特点、差异与进化的关系。方法：对NCBI已公布的皱叶烟草（Np）、渐狭叶烟草（Na）和美花烟草（Ns）及拟南芥（At）、籼稻（Os）的GS2序列,利用MEGA进行聚类分析,用ProtParam、NETPHOS 2.0 Server、TargetP1.1Server、ProtScale、Scansite和SOPMA进行肽链的理化性质、磷酸化修饰、亲水性/...

柠檬酸钠对L-组氨酸发酵代谢流分布的影响

关键词: 发酵  柠檬酸钠  代谢流  

目的：建立谷氨酸棒杆菌TL1105生物合成L-组氨酸的代谢网络模型,并进行代谢网络计量分析。方法：通过所构建的L-组氨酸代谢网络模型,利用MATLAB软件计算出添加柠檬酸钠和不添加柠檬酸钠发酵中后期代谢网络的代谢流分布。结果：在L-组氨酸分批发酵过程中,在发酵初期未添加柠檬酸钠的条件下流向戊糖磷酸途径（HMP）的代谢流为9.59,合成组氨酸的代...

有机膜在谷氨酸发酵液分离中的应用研究

关键词: 谷氨酸  有机膜  微滤  超滤  

目的：采用有机微滤膜和超滤膜连续过滤谷氨酸发酵液,去除菌体蛋白,以利于后续的提取操作。方法：利用微滤膜去除菌体及大分子蛋白等杂质,微滤透过液进入超滤膜系统,进一步去除小分子蛋白及色素等,再利用浓缩连续等电法进行提取,得到谷氨酸。结果：发酵液经过滤后,可溶性蛋白、色素去除率分别可达到86.7%和63.2%,谷氨酸的损失率仅为0.6%;谷氨酸...

人白细胞抗原G在结直肠癌中的表达及意义

关键词: 人类白细胞抗原g  结直肠癌  免疫组织化学  

目的：在蛋白水平检测人白细胞抗原G（HLA-G）在结直肠癌组织中的表达,探讨HLA-G分子在结直肠癌不同分级和不同分期中的表达差异及在肿瘤逃逸中作用。方法：用免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁正常结直肠组织HLA-G的表达情况,用SPSS13.0软件、Kruskal-Wallis test进行分析。结果：HLA-G分子在结直肠癌组织中的表达率为42.3%（41/97）,在癌旁正...

弗氏志贺菌4c和2a型菌株的脉冲场凝胶电泳分型特征

关键词: 志贺菌属  细菌分型技术  脉冲场凝胶电泳  

目的：了解北京部分地区弗氏志贺菌4c型（F4c）和2a型（F2a）菌株的分子分型特征。方法：对2005年和2006年自北京部分地区腹泻监测分离的弗氏志贺菌菌株（4c型10株,2a型20株）进行生化鉴定和血清分型,用PCR检测侵袭性抗原基因ipaH,用改良Kirby-Bauer纸片法检测菌株的耐药谱,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对菌株进行分子分型。结果：10株血清型鉴定为...

利用高效液相色谱法分离和测定棉花组织培养过程中4种内源激素

关键词: 陆地棉  外植体  非胚性愈伤组织  胚性愈伤组织  内源激素  外源激素  高效液相色谱法  

目的：优化利用高效液相色谱法测定棉花组织培养过程中吲哚-3-乙酸（IAA）、玉米素（ZT）、赤霉素（GA3）和脱落酸（ABA）等4种植物内源激素的条件,了解棉花胚性愈伤组织发生过程中4种内源激素及激素含量比例的规律性变化,以及添加不同外源激素对内源激素和愈伤组织的影响,为棉花组织培养由经验型变为理论型提供基础。方法：采用高效液相色谱法...

H5N1禽流感病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立

关键词: h5n1禽流感病毒  环介导等温扩增  条件优化  

目的：建立H5N1禽流感病毒环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。方法：从GenBank中获得H5N1禽流感病毒血凝素（HA）基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorerV3软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物和环引物,同时以所克隆的阳性质粒为模板,对试验中的几个重要参数进行优化。结果：LAMP检测方法对H5N1禽...

快速提取类球红细菌中辅酶Q10的方法研究

关键词: 辅酶q10  类球红细菌  超声破碎  正交试验  

目的：建立一种从类球红细菌中快速分离纯化辅酶Q10的方法。方法：对影响超声提取辅酶Q10的各因素,包括提取试剂、超声频率、循环次数及工作时间的最佳条件进行正交试验,比较超声破碎法与碱醇皂化法提取辅酶Q10的差异。结果：在超声提取中,提取试剂和循环次数对辅酶Q10提取效果具有显著性影响;在超声频率0.5s、丙酮提取3min、循环3次的条件下提...

信号转导与转录活化蛋白STAT3在肿瘤发生中的作用

关键词: 信号转导与转录活化蛋白3  肿瘤发生  组成性激活  

STAT3是信号转导与转录活化蛋白（STAT）家族的一个重要成员,也是一个可以被多种调控细胞增殖、分化、发育、存活和炎症的细胞因子、生长因子及肿瘤蛋白所激活的关键信号转导蛋白。在多种肿瘤细胞、细胞性状转化过程和肿瘤形成过程中可以检测到组成性激活的STAT3。我们从STAT3在肿瘤细胞中组成性激活的机制、STAT3作为转录因子对肿瘤细胞调控的...

CD20生物学功能的研究进展

关键词: cd20  b细胞抗原受体  钙信号  钙池调控钙离子进入  

B细胞抗原受体（BCR）信号传导起始于持续的钙离子向细胞内流动,这种钙离子的内流对于B细胞的生长、分化、活化是必需的。CD20是B细胞膜上特有的4次跨膜蛋白,参与了BCR活化的钙离子流入。最近的研究提供了直接的证据,证明CD20形成的同源寡聚体是四聚体。CD20单抗诱导的钙信号也得到研究,研究表明只有Ⅰ型CD20单抗能引起钙离子内流。CD20还通过钙...

限制酶介导整合技术：一种克隆新基因的新策略

关键词: 限制酶介导整合  限制性内切酶  线性质粒  新基因克隆  

限制酶介导整合（REMI）技术是近年发展起来的一种研究新基因的方法,已被用于盘基网柄菌、酵母和丝状真菌等微生物细胞与发育过程的研究。结合质粒拯救技术,可快速分离质粒两侧未知的基因组DNA序列,进而对该序列做进一步分析和研究。我们简要介绍了REMI技术的基本原理、影响因素、缺点及其应用。

蛋白质磷酸化修饰的研究进展

关键词: 磷酸化修饰  磷酸化蛋白鉴定  磷酸化位点检测  

蛋白质磷酸化是最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式,它参与和调控生物体内的许多生命活动。通过蛋白质的磷酸化与去磷酸化,调控信号转导、基因表达、细胞周期等诸多细胞过程。随着蛋白质组学技术的发展和应用,蛋白质磷酸化的研究越来越受到广泛的重视。我们介绍了蛋白质磷酸化修饰的主要类型与功能、磷酸化蛋白质分析样品的富集及制备、...

细胞培养稳定同位素标记技术在蛋白质组学中的应用与进展

关键词: 细胞培养稳定同位素标记  定量蛋白质组学  质谱  

细胞培养稳定同位素标记技术（SILAC）是在细胞培养过程中,利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术,对蛋白表达进行定量分析的一种新技术。它不仅可以对蛋白质进行定性分析,还可通过质谱图上一对轻-重稳定同位素峰的比例来反映对应蛋白在不同状态下的表达水平,实现对蛋白质的精确定量。SILAC结合质谱技术在定量蛋白质组学中发挥了巨大的作用,其...

外体（exosome）在肿瘤免疫治疗中的应用

关键词: 外体  肿瘤  免疫治疗  

外体（exosome）是由细胞分泌至细胞外的膜性小囊泡。研究发现,来源于树突状细胞和来源于肿瘤细胞的外体富集MHCⅠ/Ⅱ类分子、协同刺激分子、热激蛋白70和90等多种活性分子和肿瘤抗原,在体内外免疫调节中起关键作用,以外体为基础的肿瘤免疫治疗已成为热点。我们简要介绍外体的特征、分离制备和临床应用研究。

丙型肝炎病毒核心蛋白对转录因子的调控作用

关键词: 丙型肝炎病毒核心蛋白  转录因子  调控作用  

丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白是HCV病毒粒子核衣壳的组分,同时又是一种多功能蛋白。它能与胞内多种蛋白相互作用,调控NF-κB、AP-1、Sp1、Elk-1、STAT3、ATF-2、NF-AT等多种转录因子,影响一系列基因的表达。核心蛋白在HCV感染的病理发生和慢性化及致癌等过程中起着重要作用。

结核分枝杆菌诊断技术研究进展

关键词: 结核分枝杆菌  细菌学检测  血清学检测  分子生物学诊断  

近年来,结核病的诊断方法逐渐得到完善,将传统细菌学检验方法、免疫学方法和分子生物学的方法相结合,加速了对结核病的诊断研究。特别是分子生物学技术的发展,对于阐明分枝杆菌和结核分枝杆菌的遗传变异规律及分子进化等都有重要的意义。我们结合近年来结核分枝杆菌诊断在免疫学检测、PCR技术、基因技术等方面的进步,从细菌学检测、免疫学检测、...

噬菌体展示技术的理论基础及其在感染性疾病防治中的应用

关键词: 噬菌体展示  感染性疾病  微生物感染  宿主  

噬菌体展示技术是一种高通量研究基因功能、蛋白质表达及其相互作用的有效方法,具有与生物芯片一样的大量快速检测、发现并鉴定功能基因及蛋白质-蛋白质相互作用的优点。我们着重介绍噬菌体展示技术的种类、原理,及其在感染性疾病防治中的应用。

治疗性单克隆抗体研究进展

关键词: 单克隆抗体  治疗性抗体  抗体人源化  

杂交瘤技术使鼠源单克隆抗体（鼠单抗）被广泛用于人类疾病的诊断和研究,建立了治疗性抗体的第一个里程碑。但随后出现的人抗鼠抗体等副作用极大地限制了鼠单抗的临床应用。随着生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明,应用DNA重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造,先后出现了嵌合抗体、改型抗体和全人抗体,同时也涌现了各种单抗衍生物,它...

分泌型免疫球蛋白A的研究进展

关键词: 分泌型免疫球蛋白a  多聚免疫球蛋白受体  重组分泌型免疫球蛋白a  

大部分感染都起源于黏膜表面,而黏膜免疫的主要抗体是分泌型免疫球蛋白A（SIgA）,它能有效地阻断病原体的感染和侵入。SIgA是由1个IgA二聚体、1条J链和1个分泌片（SC）共价结合构成的异源十聚体。IgA和J链由活化B细胞产生,SC则由黏膜上皮细胞合成。SIgA分子具有极高的稳定性和极强的抗微生物活性。我们就SIgA合成的相关机制、IgA单体和SIgA的结...

胰高血糖素样肽-1在胰腺中作用机制的研究进展

胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是胰高血糖素原基因编码的一种激素,主要由肠道L细胞产生并分泌进入血液。GLP-1能激活胰腺、肾脏、肺、胃、心脏和脑等组织中存在的特异性G蛋白偶联受体（GPCR）。通过GLP-1受体（GLP-1R）的激活,活化腺苷酸环化酶,产生3＇,5＇-环腺苷酸,随后通过cAMP依赖性第二信使途径激活蛋白激酶A和鸟苷酸交换因子。大量围绕胰岛素...

胰岛素受体底物PH结构域相互作用蛋白结构和功能研究进展

关键词: ph结构域  ph结构域相互作用蛋白  胰岛素受体底物  结构与功能  

PHIP是一种与胰腺β细胞中胰岛素受体底物（IRS）的PH结构域相互作用的蛋白。根据小鼠PHIP（mPHIP）mRNA翻译的不同起始位点,除全长的PHIP1外,mPHIP基因还编码其他3种不同变异体。在胰岛素诱导的信号途径中,主要分布于细胞核的PHIP1和IRS-1的PH结构域相互作用,介导IRS蛋白酪氨酸的磷酸化。IRS-2和PHIP1的共表达能诱导IRS在细胞膜上的定位,促进葡...

拟南芥非生物胁迫应答基因表达的调节子研究概况

关键词: 拟南芥  脱水效应元件结合蛋白1  脱落酸  环境胁迫  调节子  转录因子  

分子生物学研究表明,植物中由诸如干旱、高盐和低温等环境胁迫因子诱导的几个基因具有多种功能。大多数干旱应答基因是由植物激素脱落酸（ABA）诱导的,但也有少数基因例外。对模式植物拟南芥基因表达中的干旱应答基因的分析表明,至少存在4个独立调节系统（调节子）。对典型胁迫诱导表达的一些基因中启动子的顺势作用元件和影响这些基因表达的转...

花生抗病基因分离克隆研究进展

关键词: 花生  抗病基因  克隆  

花生是重要的油料作物和经济作物。近年来多种病害严重威胁着花生产业的发展,筛选花生抗病基因并对其进行研究成为花生抗性育种的新热点。结合抗病基因分离克隆在花生育种工作和遗传研究等领域逐渐显现的广阔前景,我们简要综述了国内外花生抗病基因分离克隆的研究现状,介绍了抗病基因分离克隆的类型及特点,并探讨了今后的研究方向。

植物与病原真菌互作机制研究进展

关键词: 植物  真菌  互作机制  

植物与病原真菌之间的互作是当今植物病理学研究的热点问题之一,相关的研究有望为植物抗病机制的解析和抗病品种的选育奠定理论基础。我们从形态、细胞、生理生化和分子等水平综述了植物与病原真菌互作机制的研究进展。

木霉菌防治植物真菌病害研究进展

关键词: 木霉菌  拮抗作用  植物病原真菌  生物防治  

木霉菌是一种重要的植物病害生防因子,尤其在防治植物病原真菌病害中一直受到极大的关注。木霉菌依靠其菌株在包括趋向生长、识别、接触、缠绕与穿透等步骤的真菌寄生过程中分泌产生的几丁质酶、葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶等一系列细胞壁降解酶,进行重寄生作用,拮抗其他植物病原菌,行使其生防功能。我们简要概述了木霉菌的种类、拮抗对象、抑菌...

植物光调控因子COP1、HY5的研究进展

关键词: 光形态建成调控因子1  hy5  光形态建成  

植物光形态建成调控因子COP1黑暗中积累在细胞核内,直接与碱性亮氨酸拉链（bZIP）类转录因子HY5相互作用,并被蛋白酶降解,负调控下游基因的表达;而在光下COP1从细胞核内转移到细胞核外,HY5得以在细胞核内积累,可特异结合于查尔酮合成酶基因CHS等光诱导基因启动子上,正调控相关基因的表达。

口蹄疫新型疫苗及其免疫特性研究进展

关键词: 口蹄疫  疫苗  免疫应答  

口蹄疫是世界性重大动物疫病,接种疫苗是预防该病的重要策略之一。随着现代分子生物学技术的发展,对一些新型口蹄疫疫苗如亚单位疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗、可饲疫苗、多表位疫苗等的研究和探索已全面展开。我们简要介绍了近年涌现的口蹄疫新型疫苗,以为口蹄疫分子疫苗的设计提供参考。