关键词：大肠癌 蟾毒灵 上皮间质转化 侵袭 迁移 

摘要：目的观察蟾毒灵（Bufalin）对大肠癌HCT-116细胞上皮间质转化作用的影响及其可能的机制。方法使用TGF-β1诱导大肠癌HCT-116细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,制备EMT模型。实验分为空白对照组、模型组、蟾毒灵组。72 h后,应用光学显微镜、侵袭实验、迁移实验观察蟾毒灵对HCT-116细胞形态学、侵袭与迁移能力的影响,Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin及β-catenin表达,免疫荧光法观察β-catenin蛋白分布。结果模型组较空白组细胞明显伸长变窄且细胞间连接相对疏松。与模型组相比,蟾毒灵组部分细胞呈不典型鹅卵石样上皮细胞改变,部分细胞拉长变窄,细胞间连接较紧密;72 h穿膜侵袭细胞数较模型组明显减少（110.00±26.46 vs.413.33±41.63,P〈0.05）,72 h迁移细胞数亦较模型组明显减少（507±38.16 vs.898±49.49,P〈0.05）,两者与空白对照组均无差异。Western blot检测显示：模型组较空白对照组上皮标志物E-cadhrin下降,间质标志物Vmentin上升;蟾毒灵组则较模型组E-cadhrin上调,Vimentin下调,β-catenin表达无差异。免疫荧光观察示,模型组β-catenin较空白对照组从细胞膜、胞质移至胞核内,蟾毒灵组β-catenin则较模型组集中于细胞质,胞核表达较少。结论 TGF-β1可诱导结肠癌HCT-116细胞EMT;蟾毒灵可能通过抑制β-catenin核移位、阻止HCT-116细胞EMT发挥抑制HCT-116细胞侵袭、迁移的作用。

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