细胞与分子免疫学杂志

小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响

关键词: 树突状细胞  b7分子  原核表达  

目的：研究重组谷胱甘肽S-转移酶（GST）-小鼠B／T细胞弱化因子包外功能区（mBTLAext）融合蛋白（GST-mBTLAext）对小鼠树突状细胞系DC2-4表面B7分子表达的影响。方法：采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB-TLA cDNA。将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中，构建重组表达质粒pGEX-4T-2／mBTLAext并转化E．coliBL21（DE3），...

大鼠CD4^＋CD25^＋T调节细胞的分离培养及其功能分析

关键词: foxp3  免疫抑制  

目的：研究大鼠CD4^＋CD25^＋T调节细胞（Tr）的分离培养，并对其功能进行初步分析。方法：无菌条件下切取大鼠脾脏分离脾淋巴细胞。用免疫磁珠细胞分离系统（MACS）分选CD4^＋CD25^＋T细胞，并以流式细胞术检测其纯度后，对其进行扩增。采用混合淋巴细胞反应研究CD4^＋CD25^＋Tr细胞对CD4^＋CD25^＋T细胞的免疫抑制作用。用ELISA法检测培养上清...

高效转染人T细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用

关键词: 逆转录病毒载体  t细胞  内部核糖体进入位点  

目的：构建能高效转染人T细胞并带有快速筛选标签的逆转录病毒载体系统，并与传统的逆转录病毒载体系统做比较。方法：首先在原载体pCMMP-EGFP的基础上，构建携带内部核糖体进入位点（IRES）基因的逆转录病毒载体pCMMP-IRES-GFP。将嵌合T细胞受体基因插入该载体中，与另外两个辅助载体pMD．MLVgag．pol和pHDM．G共同转染包装细胞293T。48h后收培...

HCV-C蛋白抗原在人肝细胞株中的表达和鉴定

关键词: hcv  c蛋白  真核表达  

目的：构建HCV—C蛋白基因的真核表达载体，并在正常人肝细胞HL-7702中表达与鉴定。方法：从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM／HCV1-3011质粒中，扩增HCV core基因片段，构建pcDNA3．1（-）／core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人正常肝细胞HL-7702，用免疫组化染色（SP）法检测HCVC蛋白的表达，并通过Western blot进行鉴...

转染人CXCR4细胞株的构建及其生物学功能的研究

关键词: cxcr4  逆转录病毒  稳定表达  迁移  

目的：构建稳定表达人CXCR4基因的L929细胞株，分析CXCR4分子对转基因细胞迁移能力的影响。方法：TRIzol一步法抽提人外周血单个核细胞（PBMC）总RNA，RTPCR扩增出CXCR4基因，双酶切装入逆转录病毒载体pEGZTerm，与辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T，用其培养上清感染L929细胞72h后，经Zeocin筛选出稳定表达CXCR4分子的L929细胞株；利...

多CTL表位DNA疫苗诱导特异性CTL应答的研究

关键词: 表位  dna疫苗  ctl  hcv  

目的：构建多CTL表位DNA疫苗诱导特异性CTL应答。方法：将编码两个HCVCTL表位（H-2^d）的基因序列插入真核表达载体pcDNA3．1中，构建多CTL表位DNA疫苗。用其免疫BALB／c小鼠后，以经不同CTL抗原肽冲击的P815细胞（H-2^d）作为靶细胞，进行CTL杀伤试验。结果：多CTL表位DNA疫苗可诱导机体产生针对其编码的两种HCVCTL表位的特异性CTL免疫应答，且...

间充质干细胞对混合淋巴细胞反应体系中T淋巴细胞的免疫调节作用

关键词: 混合淋巴细胞培养  表面标记  

目的：探讨间充质干细胞（MSC）在体外对T淋巴细胞免疫调节作用的特点。方法：通过Ficoll梯度密度离心法分离出正常人骨髓单个核细胞，体外培养扩增MSC，获取第3代细胞。将其按照不同的比例加入双向混合淋巴细胞培养（MLC）体系中，在第3、5天，采用MTT比色法检测各组MLC中的T淋巴细胞的增殖情况，再用流式细胞术分析其与MSC共孵育前后细胞表面...

EIAV减毒疫苗免疫后马外周血单个核细胞中IFN-γ的转录

关键词: 马传染性贫血病毒  驴白细胞减毒疫苗  转录  

目的：探讨马传染性贫血病毒（Equine infectious anemiavirus，EIAV）驴白细胞减毒疫苗（DLV）免疫马后，外周血单个核细胞（PBMC）中IFN-γmRNA转录水平与免疫保护应答的关系，揭示DLV的免疫保护机制。方法：应用分子克隆及实时定量RT—PCR技术，建立马PBMC中IFN-γmRNA转录水平的定量检测方法，在不同时间点定期观察4组（疫苗免疫组、阴性对照...

幽门螺杆菌Catalase基因的克隆、表达及其抗原性鉴定

关键词: 幽门螺杆菌  catalase  克隆  基因表达  抗原性  

目的：构建含人幽门螺杆菌（Hpylori，Hp）过氧化氢酶（catalase，KatA）编码基因的重组质粒，测定、分析其核酸序列，并在E.coli中表达，研究其抗原性。方法：应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增KatA编码基因片段，将其T-A克隆和测序，并与GenBank公布的其他Hp菌株的基因序列比较，再将目的基因插入至融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达，用GST亲和...

结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠免疫应答及其保护力

关键词: 结核分枝杆菌  疫苗  esat6  cfp10  重组融合蛋白  

目的：研究结核分枝杆菌（MTB）ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法：用预先转移到硝酸纤维素膜条的ESAT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白（CFP）作为抗原，用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。末次免疫后，取部分免疫小鼠脾淋巴细胞，体外用ESAT6-C...

人NKG2D的基因克隆及其在CHO细胞中的表达

关键词: nkg2d受体  基因转染  基因表达  cho细胞  

目的：构建重组人NKG2D真核表达载体并在CHO细胞表达重组人NKG2D。方法：用RT-PCR方法从NK-92细胞中调取NKG2D基因片段，克隆到pGEM-T Easy载体并对克隆的DN段进行序列分析。用限制内切酶EcoR I和BamH I消化pGEM-T Easy／NKG2D重组质粒，分离NKG2D片段，并插入真核表达质粒pEGFP-N1的相应限制酶位点，酶谱分析鉴定重组表达载体pEGFP-N1／NKG2D。...

MAGE-3基因稳定转染的HHCC细胞系的建立及其mRNA的表达

关键词: 基因转染  绿色荧光蛋白  肿瘤  免疫治疗  

目的：构建肿瘤抗原MAGE-3基因的真核表达载体，建立MAGE-3基因稳定转染的人肝细胞癌细胞系（human hepatocellular carcinoma cell line，HHCC）。方法：利用分子生物学方法，构建带有MAGE-3基因和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-3，经脂质体法转染HHCC后，用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察HHCC...

IL-15对人外周血NK细胞内TNF-α表达的促进作用

关键词: nk细胞  胞内  

目的：探讨IL—15对人外周血NK细胞胞内TNF-α表达的调节作用。方法：以密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，在加入IL—15（培养3d）条件下，以双重免疫荧光染色和流式细胞术分析，检测TNF-α在NK细胞胞内表达水平的变化。结果：流式细胞术分析显示，在静止CD56^＋NK细胞的胞内TNF-α表达率为65．0％；加入终浓度为100000U／L的IL—15，培养3d...

Wnt／β-catenin信号通路在实验性大鼠肝癌形成过程中的作用

关键词: 信号转导通路  肝癌发生  大鼠  

目的：探讨Wnt／β-catenin信号转导通路与肿瘤发生的关系，为肝癌的防治提供新的思路。方法：选取Wnt／β—catenin信号转导通路中上下游关键因子wnt1、β—catenin、APC、cyclinD1以及c—myc等，应用RT—PCR法观察它们在正常肝脏，不典型增生肝脏和肝癌组织中的转录水平。用免疫组化染色法研究β—catenin、APC和cyclinD1等3个因子有无表达。结果...

2007年《免疫学杂志》征订启事

附子多糖与阿霉素长循环热敏脂质体的抗肿瘤作用及其机制探讨

关键词: 附子多糖  靶向治疗  抗肿瘤机制  

目的：观察附子多糖（MPS）与阿霉素（ADM）长循环热敏脂质体（ALTSL）联合靶向治疗荷肝癌H22小鼠的作用，并探讨其抗肿瘤作用机制。方法：以荷瘤小鼠的瘤重为指标，观察药物的抗肿瘤活性。以荷瘤小鼠的存活天数计算生命延长率。以乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞的杀伤活性。以MTT比色法检测淋巴细胞的转化率。以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53...

Bcl-2硫代反义寡核苷酸对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

关键词: 基因  反义寡核苷酸  a375  

目的：研究bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 ASODN）对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法：采用MTT法、激光共聚焦显微镜、TUNEL法和AnnevinV／PI双染法检测bcl-2 ASODN对A375细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR方法，观察bcl-2 ASODN处理前后bcl-2 mRNA在A375细胞表达水平的变化。结果：MTT法检测显示bcl-2 ASODN抑制A375...

新型人趋化素样因子超家族成员8对肿瘤细胞增殖和EGFR表达的影响

关键词: cklfsf8  肿瘤细胞  增殖  egfr  

目的：研究新型细胞因子CKLFSF8对肿瘤细胞增殖及EGFR表达的作用。方法：首先利用RT—PCR了解CKLFSF8基因在肿瘤细胞株BGC823和K562中的表达，然后在脂质体介导下将CKLFSF8基因转染这两种肿瘤细胞，倒置显微镜观察细胞生长，MTT法检测细胞增殖，免疫细胞化学法检测肿瘤细胞中EGFR的表达。结果：两种肿瘤细胞生长过程中均可测到CKLFSF8基因的表达...

人IL-6、TNF-α对登革病毒感染人树突状细胞的影响

关键词: 登革病毒  人树突状细胞  细胞因子  感染  

目的：探讨IL-6和TNF—α对登革病毒感染人树突状细胞（DC）的影响。方法：从人外周血中常规分离单核细胞，以GM-CSF和IL-4诱导成DC并进行形态学特征、细胞表型和淋巴细胞刺激能力的鉴定。用不同浓度的IL-6、TNF—α作用于Ⅱ型登革病毒（DV2）感染的DCs，于感染后6、24、48、72、96h收集上清，采用甲基纤维素微量病毒空斑法检测病毒的滴度，以MTT...

重组hCGPx腺病毒对人肾小管上皮细胞（HK-2）缺氧再复氧损伤的保护作用

关键词: 人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶  转染  肾小管上皮细胞  缺氧再复氧损伤  

目的：研究重组腺病毒介导的人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶（hCGPx）转染对人肾小管上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法：将含hCGPX cDNA的质粒pGEM—T—hCGPx和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA重组，构建pACCMV—hCGPx穿梭质粒后，与包装质粒pJM17共转染293细胞，构建重组腺病毒AdCMV—hCGPx。以重组腺病毒载体AdCMV—hCGPx转染体外培养的人...

慢性HBV感染患者中Th细胞的检测及其临床意义

关键词: 慢性hbv感染  th1细胞  th2细胞  

目的：了解慢性HBV感染患者中Th1、Th2细胞的百分率及其与肝炎活动指标、免疫球蛋白水平和病毒复制的关系。方法：通过免疫荧光染色技术标记乙肝患者和正常对照者外周血单个核细胞表面CD4分子和细胞内IFN-γ或IL-4分子，用流式细胞术分析标记结果。结果：慢性HBV感染患者Th1细胞数量和Th1／Th2细胞的比值明显低于正常人（13．1±4．3vs18．7±10．0...

正常人外周血和脐血中TCR Vβ亚家族sjTRECs的检测情况

关键词: t细胞受体  t细胞受体重排删除环  

目的：检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点，从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法：采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×10^5、5×10^4、1×10^4和1×10^3个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增。结果：在细胞数相同的情况下，各Vβ-Dβ1 sjTRECs的检出率胸腺细胞最...

Hsp701A的RNA干涉诱导K562细胞凋亡

关键词: rna干涉  热休克蛋白70  慢性粒细胞白血病  细胞凋亡  

目的：研究RNA干涉（RNAi）Hsp701A基因的表达及其诱导慢性粒细胞白血病（慢粒）细胞株K562的凋亡。方法：构建Hsp701A基因小干涉RNA（siRNA）的真核表达载体，转染K562细胞并证实RNAi的有效性。用MTF比色法、AnnexinV-FITC／PI染色和流式细胞术，分别检测K562细胞的增殖、凋亡和细胞周期。结果：构建了Hsp701A siRNA的真核表达载体。将其稳定转...

胰岛素对TNF-α诱导U937细胞可溶性ICAM-1表达的影响

关键词: 胰岛素  肿瘤坏死因子  细胞间黏附分子  葡萄糖  

目的：探讨不同浓度的胰岛素和葡萄糖对TNF-α诱导单核细胞系U937可溶性ICAM-1表达的影响。方法：采用正交试验方法，将U937细胞置于含不同浓度（0、20、30、40和100mU／L）的胰岛素和不同浓度（5、10、20和30mmol／L）的葡萄糖及20μg／L TNF-α的RPMI1640培养液中培养。18h后，取培养液用ELISA法测定可溶性ICAM-1的水平。结果：U937细胞表达可溶...

吸入糖皮质激素对哮喘患者嗜酸性粒细胞活化及IFN-γ的影响

关键词: 糖皮质激素  哮喘  嗜酸性粒细胞  

目的：研究糖皮质激素对嗜酸性粒细胞（Eos）的活化及干扰素-γ（IFN-γ）的影响，探讨嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）、IFN-γ的变化与肺功能状态的相关性，以及ECP与IFN-γ之间的相关性。方法：哮喘患者经糖皮质激素治疗前后对外周血Eos进行计数、并检测血清ECP、IFN-γ的水平及1s用力呼气容积占用力肺活量比值（FEV1％）。结果：（1）哮喘患者经糖...

STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8和NO的影响

关键词: stat1  肺泡巨噬细胞  反义寡核苷酸  肺纤维化  

目的：探讨STAT1（signal transducer and activator of transcription1）反义寡核苷酸（ASON）对博莱霉素（BLM）致肺纤维化1周大鼠肺泡巨噬细胞（AM）分泌TNF-α、IL-8和NO的影响。方法：取Wistar大鼠5只，向气管内灌注BLM复制肺纤维化模型后7d处死动物，通过支气管肺泡灌洗获取AM，并分为STAT1 ASON组、STAT1正义寡核苷酸（SON）组、地塞米松...

UVB照射前后银屑病T细胞趋化因子受体7及其基因的表达

关键词: 银屑病  记忆性淋巴细胞  趋化因子受体7  逆转录聚合酶链反应  uvb  

目的：探讨CC趋化因子受体7（CCR7）在寻常型银屑病（psoriasis vulgaris，PV）患者外周血T细胞上的表达及其UVB照射对其表达的影响。方法：应用流式细胞术（FCM）和RT-PCR，检测23例PV患者和12例健康人外周血T细胞上CCR7的表达。结果：通过FCM发现PV患者外周血T细胞表面CCR7的表达率为（60．5±10．4）％，显著高于健康人（31．7±2．1）％（P〈0...

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的表型及其侵蚀软骨的特性

关键词: 类风湿性关节炎  成纤维样滑膜细胞  流式细胞术  scid小鼠  

目的：分离培养类风湿关节炎（RA）滑膜细胞、检测其表面标志及研究其对软骨的侵蚀特性。方法：取6例RA患者滑膜，分别采用组织块、胰蛋白酶消化及胶原酶、胰蛋白酶先后消化培养后，用相差显微镜观察细胞的形态、用流式细胞术（FCM）检测培养细胞表面标记CD3、CD19、CD14、CD68、CD44、CD55、CD90及细胞内脯氨酰-4-羟基化酶（Prolyl-4-hydroxyla...

2007年《现代免疫学》征订启事

原发性高血压患者体液免疫功能的临床研究

关键词: 原发性高血压  体液免疫功能  临床研究  

目的：探讨原发性高血压患者的体液免疫功能及其临床意义。方法：随机选取我院住院的原发性高血压患者112人为实验组，以同期的健康体检者73人（排除继发性高血压及其他免疫系统疾病）为对照组，通过体液免疫系统指标测定，分析不同性别、年龄、病期、脉压差及不同并发症组各组患者体液免疫功能的变化。结果：与对照组相比较，男女原发性高血压...

新生儿溶血病患儿母亲血清中IgG亚类水平的临床意义

关键词: 新生儿溶血病  igg亚类  abo血型系统  

目的：探讨IgG抗体亚类与新生儿溶血病发病的关系。方法：用ELISA法对89例有无新生儿溶血病新生儿母亲的血清及22例献血员的血清中IgG亚类进行定量分析。结果：发病患儿与不发病新生儿的血型及其母亲血清IgG抗体的效价均存在显著性差异（P〈0．05）。IgG各亚类的水平在发病组、未发病组的母体及正常对照组之间，存在显著性差异（P〈0．05）。结...

抗人精浆蛋白／抗CD3双特异性单链抗体的活性研究

关键词: 前列腺肿瘤  cd3  单链抗体  双特异性抗体  

目的：构建并表达抗人精浆蛋白／抗CD3的双特异性单链抗体（BsscFv），并检测其生物学活性。方法：利用重叠延伸拼接PCR，拼接抗人精浆蛋白scFv基因和抗CD3 scFv基因，并在中间引入柔性短肽（GlySerGly）2，构建抗人精浆蛋白／抗CD3的BsscFv基因。测序正确后，将融合基因亚克隆入真核表达载体中，并在HeLa细胞中进行表达，采用流式细胞术（FCM）...

《细胞与分子免疫学杂志》2007年由双月刊改为月刊启事

去唾液酸糖蛋白受体特异性单链抗体的优化表达及亲和常数的测定

关键词: 去唾液酸糖蛋白受体  单链抗体  表达  亲和常数  

目的：表达及纯化抗去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）的单链抗体的可溶性，并测定其亲和常数。方法：用噬菌体Cl克隆感染E.coli HB2151，挑取单个菌落接种于2×TY培养基中，于37℃震荡培养过夜。将培养物作1：100稀释并转种后，用终浓度为0．25、0．5、1．0mmol／L的IPTG，分别在37℃、25℃和20℃下诱导表达过夜。取其培养上清，用饱和硫酸铵沉淀后，...

抗人乙酰胆碱受体scFv-人血清白蛋白融合蛋白的构建及在大肠杆菌中的表达

关键词: 重症肌无力  乙酰胆碱受体  单链抗体  融合蛋白  

目的：制备抗人乙酰胆碱受体单链抗体637（scFv637）与人血清白蛋白（HSA）的融合蛋白，提高scFv637的稳定性。方法：用PCR扩增人HSA基因，并克隆到含有抗人乙酰胆碱受体scFv637基因的载体pHEN2中构建重组载体pHEN2-scFv637-HSA。以重组载体转化E．coli HB2151，表达产物用斑点杂交试验检测，并以SDS-PAGE和Western blot鉴定其融合蛋白的相对分...

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

关键词: 单克隆抗体  

目的：制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体（mAb）。方法：应用淋巴细胞杂交瘤技术，以重组菌BL21（DE3）（pET-ChIFN-γ）表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB／c鼠，以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原，制备抗鸡γ-干扰素mAb；采用ELISA、Dot-ELISA和Western blot鉴定mAb的特异性。结果：获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3，其Ig亚...

H11亚型禽流感病毒血凝素特异性单克隆抗体的制备

关键词: h11亚型禽流感病毒  单克隆抗体  血凝抑制试验  

禽流感（avian influenza，AI）是由A型流感病毒（AIV）引起的一种禽类的感染和（或）疾病综合征。本病在世界各国均有存在，我国自1992年报道AI以来，已分离到了多株病毒，绝大多数都是低致病力毒株，却也给养禽业造成巨大的经济损失。血凝抑制试验（HI）试验快速、简便，且价格低廉，因此是最常用的一种检测AIV的方法。但多抗血清的制备比较繁...

抗死亡受体-5单克隆抗体的制备及特性鉴定

关键词: dr5  单克隆抗体  特性鉴定  亲和常数  

目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jurkat细胞膜上DR5结合的阻断作用。以鉴定mAb的特异性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分...

抗人LSECtin单克隆抗体的制备与初步鉴定

关键词: lsectin  单克隆抗体  肝窦内皮细胞  

目的：制备抗肝脏、淋巴结窦内皮细胞C型凝集素（LSECtin）单克隆抗体（mAb），并进行特性鉴定。方法：采用原核表达的LSECtin免疫BALB／c小鼠，以间接ELISA法筛选分泌特异性mAb的杂交瘤细胞，采用蛋白印迹、间接免疫荧光、流式细胞术和免疫组化染色法鉴定mAb的特异性。结果：共获得8株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。mAb的Ig亚类均为IgG，效价达...

兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定

关键词: 唾液酸转运蛋白  融合蛋白  原核表达  抗体制备  

目的：制备兔抗人唾液酸转运蛋白（sialin）的抗体，并进行特性鉴定。方法：应用RT—PCR从培养的人颌下腺细胞系HSG中扩增编码sialin N端1～38氨基酸的DNA序列，构建重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin，测序鉴定后，转化大肠杆菌JM109，在0．1 mmol／L IPTG的诱导下表达GST—sialin融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定后，利用GSTrap FF^TM柱纯化融合蛋白，并...