关键词：大鼠细小病毒 krv 双重pcr 

摘要：目的建立大鼠细小病毒H-1和KRV株双重PCR方法并对方法进行初步应用。方法根据NCBI发表的H-1（NC001358）和KRV（U790330）基因组序列分别设计特异引物,以H-1和KRV病毒DNA为模板建立双重PCR方法,对方法进行优化后验证方法的敏感性和特异性;经口感染大鼠,分为H-1和KRV单独感染组和混合感染组,感染后第2,4,6,8,10天采集大鼠粪便,第10天处死所有大鼠,采集心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物等组织,用建立的方法对粪便和组织样本进行检测。结果建立的双重PCR方法以H-1和KRV为模板能够分别扩增出183 bp和302 bp 2个条带,敏感性验证显示能够检测到的最低H-1量为3.8 pg/m L,最低KRV量为0.73 pg/m L;在以小鼠微小病毒、犬细小病毒和猫细小病毒为模板时无任何条带扩增出,特异性良好。感染第2天在所有大鼠粪便中均检测到病毒核酸,感染大鼠均无明显临床症状,感染第10天采集组织,H-1在各组织的检出率分别是心50%（4/8）,肝50%（4/8）,脾62.5%（5/8）,肺50%（4/8）,肾37.5%（3/8）,盲肠内容物62.5%（5/8）,且单独感染组检出率高于混合感染组;KRV在各组织的检出率分别是心0（0/8）,肝25%（2/8）,脾87.5%（7/8）,肺12.5%（1/8）,肾25%（2/8）,盲肠内容物62.5%（5/8）,混合感染组检出率高于单独感染组。结论建立的H-1和KRV双重PCR方法能够高效的检测大鼠粪便及组织中的病毒感染,可作为实验动物国家标准的有力补充。

中国比较医学杂志要求:

{1}来稿请署明作者姓名、出生年、性别、民族（汉族可省略）、籍贯、学位、职称、工作单位、详细通信地址、邮政编码、联系电话、电子信箱等。

{2}来稿须遵守学术规范，严守学术道德，保证论文不违背国家宪法，不涉及国家机密，无抄袭、剽窃、伪造数据等学术不端行为。

{3}图表要求：图、表必须清楚，应顺序标号，若系采用其他资料，应注明资料来源。

{4}正文：正文应层次清楚，方便阅读，行文符合规范。

{5}投稿时请同步提供：文章所有作者姓名、工作单位、职务（职称）、联系方式（手机号码、办公电话、邮箱、通讯地址及邮编等）、个人简介以及照片。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社