微小RNA-150对鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响研究

张先锋; 黄远见; 肖娟; 张志伟; 黄卫国 南华大学附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科; 湖南省衡阳市421001; 南华大学肿瘤研究所

关键词:鼻咽肿瘤 放射疗法 糖原合成酶激酶类 

摘要:目的探讨微小RNA(miR)-150对于鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响,并分析其机制。方法 2014年1月—2015年6月,建立放疗抵抗的鼻咽癌细胞株CNE-2R。取CNE-2和CNE-2R,通过克隆形成实验计算不同放疗剂量下(0、3、6 Gy)的克隆形成率(PE)、细胞存活率,采用MTS法检测照射1、2、3、4、5 d时的细胞增殖活性,实时定量荧光聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测miR-150、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)mRNA水平,Western blotting法检测GSK3β水平。将CNE-2随机分为miR-150模拟物组(转染miR-150模拟物)、微小RNAs(miRs)无关序列组(转染miRs无关序列),通过荧光素酶报告载体实验检测荧光素酶活性。结果 0 Gy放疗剂量时,CNE-2与CNE-2R的PE、细胞存活率比较,差异无统计学意义(P〉0.05);3 Gy、6 Gy放疗剂量时,CNE-2R的PE、细胞存活率高于CNE-2(P〈0.05)。照射1-5 d时,CNE-2R的细胞增殖活性高于CNE-2(P〈0.05)。CNE-2R中miR-150水平高于CNE-2,GSK3βmRNA水平低于CNE-2(P〈0.05)。CNE-2R中GSK3β水平低于CNE-2(P〈0.05)。转染GSK3β野生型质粒后,miR-150模拟物组荧光素酶活性低于miRs无关序列组(P〈0.05);转染GSK3β突变型质粒后,miRs无关序列组与miR-150模拟物组荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论miR-150参与了鼻咽癌细胞的放疗抵抗,GSK3β是miR-150的直接靶基因,miR-150-GSK3β轴可能成为一种新的用于合理治疗鼻咽癌的策略。

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