关键词:鸡白细胞介素18 成熟蛋白 表达 生物学活性
摘要:将编码鸡的白细胞介素18(Chicken Interleukine-18,ChIL-18)成熟蛋白的基因亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBac B上,构建真核转移载体pMelBacBChIL-18,经限制性内切酶消化、ChIL-18特异引物PCR鉴定和确证性序列测定,证明目的基因正确克隆到载体的预期位点.将纯化的pMelBacBChIL-18质粒与杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染sf9昆虫细胞,经四轮蓝斑筛选纯化,获得了重组杆状病毒,命名为rBaculovirusChIL-18.提取病毒染色体DNA,经ChIL-18特异引物和重组杆状病毒特异引物PCR鉴定,证明获得了纯化的重组杆状病毒.用该重组病毒接种sf9昆虫细胞,收获接种后不同时间的细胞进行SDS-PAGE电泳.结果表明ChIL-18基因在昆虫细胞中获得了表达,表达的重组蛋白分子量约为23KD.应用在大肠杆菌原核表达系统中表达的重组蛋白制备的兔抗ChIL-18多克隆抗体进行Western blot分析,表明本研究真核系统表达的ChIL-18成熟蛋白和前期原核系统表达的ChIL-18成熟蛋白均具有生物学活性.
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