中国生物化学与分子生物学报杂志

内质网应激反应分子机理研究进展

关键词: 内质网应激  未折叠蛋白反应  整合应激反应  内质网相关性死亡  

内质网应激是导致心脑组织缺血梗塞、神经退行性疾病等发生的重要环节，目前发现同型半胱氨酸、氧化应激、钙代谢紊乱等都能引起内质网应激级联反应，表现为蛋白质合成暂停、内质网应激蛋白表达和细胞凋亡等，这些表现包括在未折叠蛋白反应(UPR)、整合应激反应(ISR)和内质网相关性死亡(ERAD)三个相互关联的动态过程中，每一过程的分子机理现已逐...

无细胞蛋白质合成系统的研究进展

关键词: 蛋白质  多肽  生物合成  无细胞系统  

无细胞蛋白质合成系统是一种以外源mRNA或DNA为模板，通过在细胞抽提物的酶系中补充底物和能源物质来合成蛋白质的体外系统，与传统的体内重组表达系统相比，体外无细胞合成系统具有多种优点，如可表达对细胞有毒害作用或含有非天然氨基酸(如D-氨基酸)的特殊蛋白质，能够直接以PCR产物作为模板同时平行合成多种蛋白质，开展高通量药物筛选和蛋白...

食蟹猴疟原虫（Plasmodium cynomolgi）中一个真核翻译起始因子4A（eIF-4A）同源蛋白的cDNA克隆、表达和ATP酶活性测定

关键词: initiation  factor  4a  rna解旋酶  atp酶  食蟹猴  

真核翻译起始因子4A(eukaryotic initiation factor4A，eIF-4A)是DEAD盒蛋白家族的ATP依赖性的RNA解旋酶类中的一个原型成员，它在真核细胞的蛋白质合成的起始过程中起着关键性作用，通过PCR扩增和放射探针杂交相结合的方法筛选食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)的cDNA文库，克隆了一个eIF-4A同源蛋白的完整cDNA序列，命名为CH1F．CH1F全长175...

本刊2003年度文献计量指标及Web下载量报告

以TNFα为基础并靶向于白细胞介素15受体的融合蛋白的构建及功能研究

关键词: 肿瘤坏死因子  白细胞介素15  突变  融合  基因工程  

IL-15及IL-15R阳性细胞在成人T淋巴细胞性白血病(ATL)、多发性骨髓瘤及炎症性自身免疫性疾病病理过程中起着重要作用，应用基因重组技术，构建、表达靶向于IL-15受体的两种融合蛋白，为研制特异的可消除IL-15R高表达细胞的导向药物奠定基础，将人IL-15成熟肽基因及IL-15R拮抗剂(IL-15M)基因片段分别与人工改造的人肿瘤坏死因子突变体(TNFαM)基因...

消减杂交筛选2BS细胞衰老过程中差异表达基因

关键词: 复制性衰老  2bs  消减杂交  差异表达基因  

细胞的复制性衰老最终导致不可逆的G1期阻滞，研究此过程中差异表达基因对于阐明衰老发生机制有重要意义，别构建年轻和衰老2BS细胞高表达基因的消减文库，经点杂交筛选后共得53个差异表达基因，其中部分基因的Virtual Northern印迹分析证实差异表达确实存在，选择Y114和S111片段，以Northern印迹分析确证其表达变化；并通过对新生儿和老年人白...

本刊被编入《中文核心期刊要目总览》2004年版

胡萝卜DcPAB基因的分离及其结构与功能分析

关键词: 胡萝卜体细胞胚  dcpab  凝胶阻滞检测  

运用改进的减法杂交技术分离到胡萝卜Poly(A)结合蛋白基因DcPAB．其cDNA编码区长度为1977bp，编码658个氨基酸和1个终止密码子、基因组转录序列区长度为4616bp，包含9个外显子和8个内含子，DcPAB在胡萝卜基因组中为单拷贝基因，该基因在胡萝卜体细胞胚中特异性表达，且其表达活性在调控-解调控前后有明显差异，体外结合实验表明，在大肠杆菌中表...

人骨唾液蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

关键词: 骨  唾液糖蛋白  分泌表达  毕赤酵母  

利用RT-PCR技术，从人骨膜组织总RNA中扩增长度为1kb的人骨唾液蛋白(bone sialoprotein，BSP)基因编码区序列，克隆至pBluescript Ⅱ，进行双链核苷酸序列测定，构建人BSP毕赤酵母表达质粒pPICZaA-hBSP并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115．SDS-PAGE和Westem印迹检测rhBSP的分泌表达，采用镍离子亲合层析纯化rhBSP并检测生物学活性，结果表明，...

软体动物基因改写性激素进化史

关键词: 软体动物  基因  性激素  进化  甾体激素受体  

进化生物学家已发现加利福尼亚海兔，一种科学名字为却Aplysia california的软体动物，含有一种蛋白质相似于人体中对雌激素以及其他甾体激素有反应的蛋白质，这一令人惊喜的发现提示，雌激素是这类激素中第一个发生进化的激素，而雌激素信号系统开始发生的年代可追溯到6亿年前，与过去概念相反的是，雌激

HCV IRES介导萤火虫荧光素酶翻译的双顺反子载体的构建与在小鼠体内的表达

关键词: 丙型肝炎病毒  hepg2肝癌细胞  内部核糖体进入位点  荧光素酶  

将HCV IRES插入双报告基因海肾荧光素酶(Rluc)基因和萤火虫荧光素酶(Fluc)基因之间，建立了“依赖帽子的扫描机制”翻译表达Rluc，HCV IRES调控Fluc翻译的双顺反子表达载体pCIRluc-HCV IRES-Fluc，通过酶切反应及转染HepG2细胞鉴定双荧光素酶瞬间表达活性等试验，证实获得了表达双荧光素酶的双顺反子载体，并应用水压转染法将双顺反子表达质粒导...

CETP基因变异使长寿老人血中多大颗粒胆固醇

关键词: cetp基因  变异  长寿老人  血液  胆固醇  心脏健康  

67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响

关键词: 层粘连蛋白受体  肝癌细胞  克隆  表达  侵袭  

探讨细胞膜表面67kD层粘连蛋白受体(67kD laminin receptor，67LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用，从肝癌细胞中提取RNA，通过RT-PCR扩增67LR的前体——37kD层粘连蛋白受体前体(37kD laminin receptor precursor，37LRP)基因并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1／myc-His(-)A，采用脂质体将重组质粒转染到HepG2肝癌细胞中，通过G418筛选和RT-PCR、流...

利用随机多肽文库研究ZO-1中PDZ3结构域的配体结合特点

关键词: pdz3结构域  蛋白质相互作用  随机多肽文库  酵母双杂交  

建立一种研究PDZ结构域配体结合特点的简单方法，利用酵母双杂交技术从随机多肽文库中寻找所有可能与ZO-1中PDZ3结构域结合的C末端序列，从现有蛋白质数据库中检索所有具有该C末端蛋白，利用液体培养物β-半乳糖苷酶检测实验，比较文库中筛选的C末端序列和已知的PDZ3结构域结合配体——JAM的C末端(SFLV)与PDZ3结构域结合的强弱，共筛选到3个阳性...

第三届国际人类蛋白质组大会将于2004年10月在北京召开

Hsp／Hsc70相互作用蛋白CHIP在大鼠肾纤维化组织中的高表达

关键词: chip  表达  肾纤维化  

利用DNA重组技术，将编码人Hsp／Hsc70相互作用蛋白CHIP(carboxyl terminus of Hsc 70-interacting protein，CHIP)全长、N端TPR及C端U-box结构域的DN段分别构建于融合表达质粒pGEX-5X-1中，转化大肠杆菌，纯化GST-CHIP融合蛋白，制备了特异性识别人、小鼠及大鼠组织细胞内CHIP蛋白的多克隆抗体，利用该抗体，对多种组织、细胞的内源性CHIP蛋白...

刘思职院士纪念铜像揭幕仪式在北京大学医学部举行

2004年5月4日上午，刘思职院士诞辰100周年纪念座谈会及纪念铜像揭幕仪式在北京大学医学部生化楼举行，全国人大常会副委员长、北京大学常务副校长韩启德院士和我国著名科学家、中国生物化学与分子生物学会前理事长邹承鲁院士为铜像揭幕、

TLR4全长及其截断体重组腺病毒的制备和功能鉴定

关键词: 腺病毒  tlr4基因  报告基因  

干细胞生长因子促使肝脏快速再生

关键词: 肝脏  再生  干细胞生长因子  外科手术  

mTOR及其底物在HeLa细胞的细胞周期不同时相中的表达

关键词: 细胞生长  mtor  p70s6激酶  细胞周期时相  

为探讨细胞生长的机制，用RT-PCR、Western印迹及蛋白激酶活性测定等方法对同步化的HeLa细胞的细胞周期不同时相中mTOR(mammalian target of rapamycin)，p70 S6激酶(p70 S6K)的α1、α2、β1、β2不同亚型及起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的表达进行了检测，RT-PCR的结果表明：在G1、S1、G2、M1、M2几个细胞周期时相中，mTOR的mRNA表达无明显变化，mTO...

ERα与Sp1相互作用激活LRP16启动子转录活性

关键词: 雌激素  lrp16  sp1  

根据已报道的LRP16启动子序列(2.6kb)，采用PCR反应获得6个启动子5′删除突变体，分别插入pGL3-Basic载体，构建6种5′缺失报告基因表达载体(pS1～pS6),分别与ERα真核表达载体共转染MCF-7细胞，用双荧光素酶报告系统测定荧光素酶活性，以明确LRP16基因上游启动子区域中的雌激素反应序列．结果显示，pS1～pS6均有雌二醇反应性，进而对pS5的3′端...

抗HCV的蛋白酶抑制剂BILN2061

关键词: 丙型肝炎病毒  hcv  蛋白酶抑制剂  biln2061  药物  

E1A基因转导抑制小鼠血管内皮细胞的激活

关键词: 延缓性排斥反应  e1a  

延缓性排斥反应(delayed xenograft rejection，DXR)是进行异种器官移植亟待解决的问题之一，在DXR过程中，核心事件之一是核转录因子NF-kB的激活，人腺病毒5(Ad5)的早期转录产物E1A蛋白可抑制以NF-kB为核心的信号转导系统，利用转基因技术向小鼠的受精卵导入了E1A基因，PCR和Southern印迹检测了44只仔鼠，其中有8只整合了E1A基因，RT-PCR检测发...

刘思职院士诞辰100周年纪念活动捐助人和单位名单

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定

关键词: 垂体腺苷酸环化酶激活肽  因子xa  基因合成  纯化与鉴定  

为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide，PACAP)，根据大肠杆菌的密码偏好性，设计并人工合成编码38个氨基酸的PACAP基因，克隆到表达载体pET-35b(+)，构建重组质粒pET-PACAP，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，实现纤维素结合域(cellulose binding domain，CBD)与PACAP融合蛋白的表达...

促酰化蛋白（ASP）诱导3T3-L1前脂肪细胞分化

关键词: 促酰化蛋白  脂肪细胞  分化  

促酰化蛋白(ASP)代替经典激素“鸡尾酒”诱导法中胰岛素，通过形态学观察、油红染色分化百分比测定、脂肪细胞甘油三酯合成率和甘油三酯总量测定，并与经典激素“鸡尾酒”法诱导前脂肪细胞分化情况比较，探讨ASP是否具有诱导3T3-L1前脂肪细胞分化作用，ASP组诱导分化第6d，3T3-L1前脂肪细胞变大、变圆，出现大量脂肪滴，形态由前脂肪细胞向成熟...

四步法消除SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响

关键词: 引物二聚体  sybr  green  四步法  rna定量  

为建立一种新的SYBR greenⅠ实时定量RT-PCR方法，使之能够有效消除引物二聚体(PDs)对实时定量结果的影响，对RT-PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析，依据PDs和扩增产物的熔解温度(Tm)特点，在通用的三步法的延伸步骤之后，增加一个短暂的(5s)恒温和荧光检测步骤，使这个步骤的温度高于PDs的Tm，但低于扩增产物的Tm，...

牛血清白蛋白胰蛋白酶酶解产物的色谱-质谱联用分析及其三种数据库搜寻鉴定方法的比较

关键词: 蛋白质数据库搜寻  鉴定方法比较  

利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)和电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)联用技术直接对模式蛋白分子(牛血清白蛋白，BSA)的胰蛋白酶酶解产物进行分离和测定，获得的一系列BSA酶解片段的一级(MS)和二级(MS/MS)质谱数据经分析软件处理后，分别在不同处理和不同参数条件下，用3种不同的方法通过网上蛋白质数据库进行蛋白质搜寻鉴定，结果显示，3种搜寻法都能...

软件预测和MAST技术筛选mRNA反义核酸靶点的比较

关键词: mrna  mast  gfp  可及位点  反义核酸  

基因mRNA的结构靶点筛选是反义核酸药物研发的一个难题，免(Oryctolagus cuniculus）β珠蛋白基因mRNA的结构靶位点通过运用MAST技术筛选获得，和计算机软件RNAstructure3.71模拟分析的位点进行了比较，也和寡核苷酸微阵列杂交技术筛选获得的靶点结果(M.Natalie，1997)进行了比较，显示：据MAST技术获得的兔β珠蛋白基因2个反义核酸结合靶位点，和...

刘思职院士诞辰100周年纪念活动组委会

利用真菌纤维素结合域（CBD）保守性序列进行草菇木聚糖酶cDNA的克隆

关键词: volvariella  volvacea  xylanase  cdna  

Cellulose-binding domains (CBDs) are present in the majority of fungal cellulases and hemicellulases. Based on the conserved region of CBDs, degenerate primers were designed and used to amplify the 5′-end cDNA fragment of xylanase from Volvariella volvacea by 5′-RACE. Gene specific primer was then designed based on...

猪Ⅱ型圆环病毒ORF1基因克隆及在E.coli中的表达

关键词: porcine  circovirus  type  2  orf1  gene  cloning  expression  

A pair of specific primers were designed and synthesized according to the published sequences of ORF1 gene of PCV-2. The complete DNA fragment of ORF1 gene was obtained by PCR from viral DNA of PCV-2 QD strain. Its nuclectide sequence was determined by the dideoxy-mediated chain termination method. The results showed...

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