中国生物化学与分子生物学报杂志

核辅激活因子PGC-1表达的分子调控机制

关键词: 辅激活因子  转录调节  药物分子靶点  

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator-1,PGC-1)是一种多功能的转录调节因子,其广泛参与线粒体生物合成及能量代谢、糖脂代谢等多条代谢通路调节的特点预示PGC-1在现代医学中可能极具应用潜力.其表达量的降低或上调,对于生物体的代谢调节均具有相当的生理或病理意义.本文从转录水平...

平滑肌细胞迁移的肌球蛋白轻链非磷酸化途径

关键词: 花生四烯酸  平滑肌细胞  肌球蛋白轻链非磷酸化  肌球蛋白轻链激酶  迁移  

为了阐明平滑肌细胞迁移存在肌球蛋白轻链非磷酸化调节途径,研究花生四烯酸(arachidonic acid,AA)对肌球蛋白轻链非磷酸化状态下平滑肌细胞迁移的影响及其相关的信号传导途径.经Boyden小室跨膜迁移实验发现,AA对培养的兔血管平滑肌SM3细胞具有明显的诱导迁移作用.然而,当预先用10μmol/L肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)特异性...

Na^＋ -K^＋ -2Cl^- 共转运蛋白在L6骨骼肌细胞调节性体积增加中的作用

关键词: 共转运蛋白  调节性体积增加  高渗透压刺激  流入  l6肌管细胞  

在许多类型的哺乳动物细胞中,细胞体积对介导胰岛素发挥其生理功能起关键作用.细胞体积调节机制在胰岛素的主要靶组织-骨骼肌中尤为重要.为了解该组织中细胞体积调节的机制,对Na+-K+-2Cl-共转运蛋白在大鼠L6骨骼肌细胞中的表达及其在调节性体积增加中的作用进行了研究.应用免疫印迹法,在L6肌管细胞中检测到分子量为170 kD的钠-钾-氯共转运蛋白.K...

第五届金属硫蛋白（Metallothionein，MT）国际会议将于2005年10月8～12日在北京召开

关键词: 金属硫蛋白  international  国际会议  第五届  北京  metal  会议名称  and  the  

一、会议名称：The Fifth International Conferenceon Metallothionein 简称：MT-2005主题：Metal and Metallothionein in Biology and Medicine。

肿瘤坏死因子诱导B16细胞凋亡的核蛋白质组分析

关键词: 凋亡  促凋亡蛋白  蛋白质组学分析  

为深入了解细胞凋亡的机制,研究了细胞凋亡过程中细胞核蛋白的变化.通过分离肿瘤坏死因子TNF-α诱导的小鼠黑色素瘤B16细胞的细胞核并进行二维电泳分析,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.图像分析比较对照细胞和凋亡细胞的核蛋白发现,在凋亡细胞中有11个蛋白发生了明显的变化,6个蛋白下调,5个蛋白上调,对这11个差异蛋白质点分别进行肽质指...

Tat蛋白转导区域位于融合蛋白C端时的跨膜递送作用

关键词: gfp的羧基端  跨膜递送  

对Tat蛋白转导区域(PTD-Tat)的C端融合蛋白的跨膜递送作用进行探讨.采用DNA重组技术将PTD-Tat融合在绿色荧光蛋白(GFP)的羧基(C)端,构建重组表达质粒pGEX-GFP-Tat,IPTG诱导其表达后,采用谷胱甘肽-Sepharose 4B(GS-4B)亲和层析,获得纯化的谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合的重组蛋白GST-GFP-Tat.该蛋白与HeLa细胞共培养,荧光显微镜观察其荧光强度随着蛋...

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海洋细菌QD80低温碱性蛋白酶的基因克隆和性质

关键词: 低温碱性蛋白酶  基因克隆  抗氧化性  低温适应性  鉴定  

对海洋细菌QD80所产低温碱性蛋白酶进行了基因克隆和序列分析,对此酶的性质进行了初步研究.此酶基因开放阅读框架为1 377 bp,分子量为49.9 kD.此序列上游-8 bp处为该基因的SD序列,-10区和-35区分别有5'-TAGAAT-3'和5'-TTGACC-3'的保守序列.该酶最适pH为9.5,最适反应温度为30℃,在10℃酶活力仍能保持30%以上.该酶对氧化剂H2O2的抗氧化作用明显,浓...

美国生物化学与分子生物学会（ASBMB）代表团访问北京

关键词: 美国宾夕法尼亚大学  分子生物学  生物化学  代表团  学会  北京  bond  生物学领域  教授  

以现任主席Judith Bond教授为团长的美国生物化学与分子生物学会（ASBMB）代表团于2005年6月4～6日访问北京。Bond教授目前还担任该学会主办的生物化学与分子生物学领域最权威刊物《生物化学杂志》（Journal of Biological Chemistry）的副主编（Associate Editor），她同时还是美国宾夕法尼亚大学生物化学和分子生物学系主任。

微丝相关新蛋白hHBRK1相互作用蛋白质的鉴定

关键词: brk1  肌钙蛋白  肌动蛋白  鉴定  

为了鉴定hHBRK1的相互作用蛋白,通过DNA重组构建重组表达质粒pGEX-hHBRK1,并以谷胱甘肽-Sepharose 4B亲合层析法,获得纯化的重组融合蛋白GST-hHBRK1.以小鼠心肌组织为研究对象,采用GST pull-down技术结合Western印迹法,证实hHBRK1与小鼠心肌肌钙蛋白T Ea亚型(Ea-cTnT)相互作用.结果提示,hHBRK1与Ea-cTnT结合,可能参与心肌微丝的聚合,为小鼠cTnT...

分子生物学基础实验技术培训班

关键词: 技术培训班  分子生物学  基础实验  生物学领域  科学发展  技术人员  

培训宗旨：适应科学发展需要，培养分子生物学领域初级技术人员。

人ppGalNAc-T2的原核表达、纯化及其蓖麻蛋白样结构域的结构预测

关键词: 融合表达  蛋白印迹  蓖麻蛋白样结构域  结构模拟  

多肽:Ⅳ-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T)是催化O-糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,获得相应表达产物,用谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和层析柱进行纯化,并进行了Western印迹检测和初步的酶...

2001-2004年郑集基金奖励优秀论文评选结果

关键词: 评选结果  中国生物化学与分子生物学会  论文  奖励  基金  会员代表大会  学术会议  编委会  第9届  

2005年6月21日，本刊编委会对2001～2004年期间在本刊发表的论文进行了认真的审核，评选以下8篇论文为2001～2004年郑集基金奖励优秀论文。2005年10月12～15日在陕西省西安市召开的中国生物化学与分子生物学会第9届会员代表大会暨全国学术会议期间，中国生物化学与分子生物学会及本刊将对获奖优秀论文予以表彰，向获奖作者颁发获奖证书和奖金。

静脉注射4-1BBL-GFP融合表达质粒体内表达及其生物学活性

关键词: bbl  gfp  融合蛋白  静脉注射  体内表达  

通过RT-PCR方法扩增小鼠4-1BBL cDNA,以pEGFP-N1为载体,构建融合蛋白4-1BBL-GFP重组表达质粒p4-1BBL-GFP.采用基于流体力学原理建立的裸DNA体内转染技术,从小鼠尾静脉快速(15 s)注射质粒p4-1BBL-GFP进行体内转染.荧光显微镜观察组织切片,见小鼠肝、脾、肾及肺中均有报告基因GFP表达,尤以肝细胞中荧光最强.进一步用Western印迹和免疫组织化学染色...

重组Rhodobacter sphaeroides hemA表达的调控

关键词: 同工酶hema  基因表达调控  宿主菌  培养基  

Rhodobacter sphaeroideshemA编码5-氨基乙酰丙酸合酶(ALAS),催化磷酸吡哆醛依赖性琥珀酰CoA和甘氨酸缩合成ALA.将R.spaeroides hemA导入E.coli进行表达,当hemA具有与lac启动子相同的转录方向时,ALAS有活性.lac启动子与hemA之间的距离会影响ALAS在不同培养基上的表达.E.coli宿主菌对ALAS表达、ALA产量有显著影响,在实验所用6种菌株中,E.coli DH1...

一个新的HMT家族成员SET07的理化性质及其功能

关键词: 组蛋白甲基转移酶  set结构域  set07基因  鉴定  

近年来发现组蛋白的甲基化可以改变染色体的状态,进而调节基因的转录、细胞周期、个体发育以及肿瘤发生.对本实验室新近克隆的组蛋白甲基转移酶基因家族新成员SET07理化性质,是否具有甲基转移酶的功能进行初步研究.构建pGEX-4T-2-P2RP2质粒,并对其进行表达和纯化;利用硝纤膜及原核表达产物免疫昆明鼠制备抗SET07多克隆抗体;采用Western印迹对其...

《中国生物化学与分子生物学报》自2006年1月起改为月刊

Arg26和Lys27突变对海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ生物活性影响

关键词: 海南捕鸟蛛  突变体  固相多肽合成  生物活性  

海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ(hainantoxin-Ⅳ,HNTX-Ⅳ)是一种新型的从海南捕鸟蛛粗毒中分离纯化的作用于河豚毒素敏感型(tetrodotoxin-sensitive,TTX-S)钠通道阻断剂.采用2D1H-NMR技术解析HNTX-Ⅳ的空间结构为胱氨酸抑制剂结模体,为进一步阐述HNTX-Ⅳ结构与功能的关系,应用固相Fmoc方法化学合成了用丙氨酸代替海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ第26位精氨酸的单残基突变...

IL-1023-57-PE40可溶表达、纯化及其细胞活性

关键词: 可溶性表达  纯化  细胞毒性  

以IL-10的功能短肽(35肽,即IL-10第23至57氨基酸残基)为导向部分与PE40(绿脓杆菌外毒素除去受体结合区后的剩余部分)融合分别置入pet-20b(+)和pet-28a(+)构建重组毒素IL-1023-57-PE40的两种表达质粒,其中置于pet-20b(+)的重组毒素在BL21(DE3)pLysS中以周质分泌可溶形式表达,置于pet-28a(+)的重组毒素在Rosettablue(DE3)中以高效胞质可溶形式表达...

重组人胰高血糖素样肽-1突变体的分离纯化及活性分析

关键词: 重组突变体  分离纯化  血糖  胰岛素  

对基因工程构建的含人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)突变体的工程菌株进行诱导表达,分离纯化N末端第二位突变的2Gly-hGLP-1突变体.IPTG诱导4 h,收获的菌体经超声破碎后,裂解液用Glutathione-Sepharose 4B亲和层析纯化GST-2Gly-hGLP-1融合蛋白,经CNBr裂解、Sephadex G-25柱脱盐、QAE-Sepharose F F阴离子交换柱层析和RP-C18柱脱盐,得到纯度大于98%的...

F43Y及I354M,L358F定点突变对植酸酶热稳定性及酶活性的改善

关键词: 植酸酶  phya基因  定点突变  毕赤酵母  热稳定性  

对重组酵母PP-NP^m-8的植酸酶phyA^m基因进行PCR介导的定点突变，即将植酸酶43位的苯丙氨酸替换为酪氨酸（F43Y），将其354、358位的异亮氨酸、亮氨酸分别替换为甲硫氨酸和苯丙氨酸（I354M，L358F），得到了2个突变体PP-NP^m-1（F43Y）及PP-NP^m-2（I354M，L358F）。含突变基因的重组表达载体pPIC9k-phyA^m-1，pPIC9k-phyA^m-2在毕赤酵母GS115中...

草坪草狗牙根中抗逆基因BeDREB的克隆及功能鉴定

关键词: 狗牙根  bedreb转录因子  dre元件  分子克隆  转录激活  

DREB(dehydration-responsive element-binding protein)蛋白是一类在植物中所特有的,能与DRE(dehydration-responsive element)顺式作用元件特异性结合的转录因子,调控与干旱、高盐以及低温等逆境胁迫应答有关基因的表达.根据狗牙根近缘植物的DREB转录因子的AP2/EREBP保守结构域的基因序列,通过RT-PCR和RACE的方法分别从冷诱导和盐诱导的狗牙根...

绿色荧光蛋白基因mRNA反义寡核苷酸的筛选和应用

关键词: mrna  反义寡核苷酸  靶点  parass  gfp  

基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(poly-A anchored RNAaccessible sites screening)方法,即通过在mRNA末端引入poly A,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3'末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的3个反义...

用基因疗法恢复豚鼠听觉

关键词: 听觉丧失  基因疗法  豚鼠  胚胎发育阶段  声波振动  听力恢复  毛细胞  生物学方法  听觉中枢  

研究者利用正常时只有在胚胎发育阶段才具活性的基因，使一组重度耳聋的豚鼠恢复听觉。研究者说，该发现可导致上百万后天性听觉丧失的人得以治疗。豚鼠与人一样，利用内耳内深部的听毛细胞来察觉声音，当声波到达听毛细胞时，听毛细胞随声波振动而投射并传导电信号至听觉中枢，听觉细胞的永久性损害见于老年、疾病、某些药疗法，甚至响声，这些...

蚯蚓纤溶酶原激活剂的分离纯化及其性质

关键词: 赤子爱胜蚓  纤溶酶原激活剂  纯化  纤溶活性  丝氨酸蛋白酶  

为了从赤子爱胜蚓中获得主要表现为纤溶酶原激活活性的蛋白酶,采用盐析、离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水吸附层析从蚯蚓组织匀浆中纯化出6种具有纤溶活性的酶组分(F1、F2、F3、F4、F5和F6).它们均为单一多肽链;表观分子量分别为28 500、29 500、26 100、26 300、14 850和32 800;经非还原型SDS-PAGE和扫描仪扫描,纯度分别为100%、95.2%、96.5%...

治疗血友病药物rFⅦa用于治疗脑出血

关键词: 紧急治疗  出血性  血友病  药物  大脑  rf  静脉注射  国际研究  神经细胞  

目前对大脑出血尚无有效的紧急治疗方法。在罹患所谓出血性卒中的病人中，粗略估计有60％的病人会在1年内死亡。一项新的国际研究指出，有一种加速血凝的药物，若及时用于出血性卒中的病人，便可以减少死亡率与致残率。有一项关于卒中后脑组织将如何发生损害的预测说明，该药物能减少受血液渗漏所损害的脑组织数量，大脑出血杀死出血范围内的神...

肝细胞中活化转录因子ATF6抑制SREBP1的转录活性

关键词: 活化转录因子6  葡萄糖  脂质调节元件结合蛋白1  脂代谢  肝细胞  

内质网膜定位的活化转录因子ATF6和SREBP1均是经过蛋白酶切水解激活,激活后的ATF6(N)和SREBP1(N)进入细胞核内,分别指导内质网膜未折叠蛋白聚集反应相关基因和脂肪酸合成相关基因的表达.研究发现,肝细胞内葡萄糖饥饿激活ATF6并抑制SREBP1的转录活性及其靶基因的表达.过表达ATF6(N)能够抑制SREBP1介导的转录及其下游基因的表达.免疫共沉淀实验显...

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esiRNA分析人源驱动蛋白MKLP1在胞质分裂中的功能

关键词: esirna  驱动蛋白  人源驱动蛋白1  胞质分裂  hela细胞  western印迹  有丝分裂  细胞分裂指数  

为探讨人源驱动蛋白MKLP1在有丝分裂和胞质分裂中的作用,以E.coli RNaseⅢ制备MKLP1的3'UTR esiRNA转染HeLa细胞,通过定量RT-PCR、Western印迹检测MKLP1 esiRNA对MKLP1基因的沉默效率.再利用FACS分析、免疫荧光染色和活细胞成像分析检测MKLP1表达缺失后在有丝分裂和胞质分裂不同时期的细胞形态学、细胞分裂指数、细胞百分数,动态观察有丝分裂和...

大鼠肝脏F抗原基因的克隆、表达及产物纯化

关键词: 抗原基因  大鼠肝脏  产物纯化  克隆  抗原含量  血清学  相对分子量  损伤程度  哺乳动物  

肝脏F抗原是一种新型的能直接反映肝损伤程度的血清学标志,它是1968年由美国学者Fravi从小鼠肝中分离出来的[1].

B3（ds-scFv）靶向超抗原的制备及活性鉴定

关键词: 活性鉴定  超抗原  主要组织相容性复合体  金黄色葡萄球菌  细胞毒性t淋巴细胞  制备  t细胞  加工处理  抗原递呈  

葡萄球菌肠毒素A(staphylococcalenterotoxin A,SEA)是金黄色葡萄球菌的产物,是近年来研究较多的一种细菌性超抗原,与普通抗原不同,无需经抗原递呈细胞(APC)的加工处理,即可直接与APC膜上的主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子的肽结合沟外侧的高度保守区结合,使表达有T细胞抗原受体(TCR)Vβ区的T细胞大量激活,强烈诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxi...

创伤修复基因活性预测乳癌扩散情况

关键词: 基因活性  乳腺肿瘤  创伤组织  扩散  预测  修复  癌  肿瘤侵袭  测试方法  

侵袭性肿瘤与创伤组织有许多相同之处，它们都是表现为快速的细胞分裂以及生长出新的血管。这些共同之处激发产生了一项新的测试方法，来预测哪些未经治疗的乳腺肿瘤会迅速扩散，以及哪些乳腺肿瘤侵袭性较低。该测试方法就是追踪正常时修复创伤组织的基因的活性，用来对乳癌扩散或转移进行预测。研究者根据每个肿瘤的基因活性和伤愈组织的基因活...

文昌鱼sfy1基因的克隆及其在早期发育中的表达

关键词: 发育调控基因  早期发育  文昌鱼  脊椎动物  克隆  发育生物学  发育机制  实验模型  分子机制  

文昌鱼是公认现存最接近于脊椎动物的一种头索动物,具有与脊椎动物相似但简单得多的身体图式[1],因而是研究脊椎动物发育机制起源和进化的宝贵材料,也是发育生物学的经典实验模型之一.