中国生物制品学杂志

逆转录病毒靶向介导HDV核酶体外抑制HBV表达

关键词: 靶向性逆转录病毒载体  hdv核酶  乙型肝炎病毒  

目的包装携带HDV核酶的肝细胞靶向性逆转录病毒载体，并检测体外HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的影响。方法采用脂质体法，分别包装出携带针对HBV不同基因组区域的HDV核酶的肝细胞靶向性重组逆转录病毒，感染HepG2215细胞，ELISA及荧光定量PCR检测HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的抑制作用。结果pMSCV—U6-PreS2-Rz和pMSCV-U6-C-Rz对乙型肝炎病毒表面抗...

DNA表达载体构建及HIV多表位核酸疫苗的设计与表达

关键词: 人免疫缺陷病毒  塞姆利基森林病毒  复制子  核酸疫苗  

目的利用塞姆利基森林病毒（SFV）复制子构建新型真核表达载体，并对含HIV-1中国流行株B亚型核心蛋白p24及多表位MEG嵌合基因的核酸疫苗进行表达与鉴定。方法将含SFV复制子的元件从pSFV-MCS中切下，连入含CMV启动子及增强子的pIRESneo载体中，构建新型真核表达载体pCS，再将含HIV-1 MEGp24基因插入至pCS载体中，构建重组核酸疫苗pCS-MEGp24。用...

人鼻病毒3C蛋白酶基因的克隆、表达、纯化及活性

关键词: 人鼻病毒  蛋白酶  工具酶  基因工程  

目的获得重组3C蛋白酶，开发一种新型的基因工程工具酶。方法通过RT-PCR方法获得人鼻病毒3C蛋白酶基因，克隆人表达载体pBV220，构建非融合表达载体pBV220-3C，转化大肠杆菌BL21（Gold）进行表达。表达产物经变性阳离子交换层析纯化后复性，再经Superdex-75凝胶过滤进一步纯化，获得的3C蛋白酶在4℃条件下，酶切融合蛋白IL-11，进行活性测定。结...

草原兔尾鼠卵透明带3融合蛋白抗原的制备及免疫反应性

关键词: 草原兔尾鼠卵透明带3  融合蛋白  免疫反应性  免疫不育  

目的大量制备重组的草原兔尾鼠卵透明带3（Recombinant Lagurus lagurus zona pellucida 3, r-LZP3 ）融合蛋白，并检测其免疫反应性。方法经密码子优化的Lzp3基因在E.coli BL21（DE3）中以包涵体形式表达融合蛋白，表达产物经洗涤、纯化、溶解、复性后，用Western blot、ELISA和抗生育试验鉴定免疫反应性。结果得到纯度达93％的r-LZP3蛋白。Wes...

梅毒螺旋体特异抗原TP0684的克隆和表达

关键词: 梅毒密螺旋体  外膜蛋白  基因克隆  表达  

目的克隆并表达梅毒螺旋体外膜蛋白TP0684，为研制早期诊断试剂盒提供依据。方法PCR法扩增TP0684编码基因。T-A克隆后构建表达质粒pET-22b（＋）．TP0684，经酶切鉴定后，转化E.coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经Western blot鉴定。结果PCR法扩增出了1212bp的目的片段，原核表达质粒pET-22b（＋）-TP0684酶切鉴定正确，测序结果与GenB...

结核分枝杆菌复活促进因子E的原核表达及纯化

关键词: 结核分枝杆菌  复活促进因子e  原核表达  

目的构建结核分枝杆菌复活促进因子E（RptE）的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达并纯化。方法采用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfE基因，双内切酶消化后，与同样酶消化的pET32a（＋）载体连接，转化大肠杆菌Top10。阳性克隆经酶切和DNA测序鉴定正确后，将重组质粒转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导，由17启动子调控表达RpfE蛋白...

PCNA与AgNOR检测在诊断子宫内膜病变中的应用

关键词: 增殖细胞核抗原  核仁组成区嗜银蛋白  子宫内膜病变  

目的探讨增殖细胞核抗原（PCNA）与核仁组成区嗜银蛋白（AgNOR）在子宫内膜样腺癌早期诊断与预后中的作用。方法采用免疫组化SP法及银染法，检测132份不同子宫内膜组织中PCNA的增殖指数与AgNOR颗粒数，并分析其与各临床病理指标的相关性以及二者之间的联系。结果PCNA增殖指数与AgNOR颗粒数在正常子宫内膜（16％，2．51±1．97）、子宫内膜增殖症...

重组人促红细胞生成素的HPLC与UPLC肽图谱分析

关键词: 重组人促红细胞生成素  hplc  图谱分析  c肽  rhuepo  相对分子质量  制品质量  

重组人促红细胞生成素（rHuEPO）是一种糖蛋白，相对分子质量约为30000，目前多用于治疗贫血。其活性主要由蛋白部分决定，因此反映EPO一级结构的肽谱图通常是控制制品质量的重要标准。目前《中国药典》三部（2005年版）规定的方法是在特定条件下，以胰蛋白酶水解rHuEPO，用HPLC分离酶解后的肽段，与对照品进行对比，应保持一致。但HPLC分析rHuE...

人HSP70与MAGE-4表位基因原核表达载体的构建及表达

关键词: 热休克蛋白  黑色素瘤抗原  原核表达  

目的构建热休克蛋白70（HSP70）与黑色素瘤抗原-4（MACE-4）抗原表位基因的原核表达载体，并对表达产物进行鉴定。方法在热应激条件下，用PCR法从结肠腺癌细胞获取HSP70基因。在线用蛋白质二级结构预测软件分析MAGE-4抗原表位，PCR获取MAGE-4抗原特征表位基因。将二者分别克隆入pGEM-T easy载体，酶切鉴定后，将HSP70基因亚克隆入pET28a原核表达...

百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

关键词: 百日咳毒素  s1亚单位  突变体  原核表达  

目的克隆百日咳毒素S1亚单位，获得其突变体（S1／9K-129G，rS1），构建原核表达系统，并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体，将其与pMD18-T连接，转化至大肠杆菌DH5α，筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1，经双酶切得到rS1活性结构域编码片段。将其插入pQE-30载体中，转化大肠杆菌M15株，经IPTG诱导表达。表达产物...

C3d分子多表位DNA疫苗体液免疫应答的增强作用

关键词: dna疫苗  多表位  c3d  体液免疫应答  

目的研究C3d分子对多表位DNA疫苗体液免疫应答的增强作用。方法通过PCR方法合成多表位HME基因，分别插入真核表达载体pcDNA3．1和pcDNA3．1-3C3d，构建多表位DNA疫苗pcDNA3．1-HME和pcDNA3．1-HME-3C3d，经肌肉注射免疫小鼠，ELISA检测小鼠特异性抗体水平。结果经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体，且pcDNA3.1-HME-3 C3d免疫组小鼠...

SPF金黄仓鼠原代肾细胞的安全性

关键词: spf金黄仓鼠  原代肾细胞  安全性  

目的验证SPF金黄仓鼠原代肾细胞的安全性。方法采用ELISA法检测10种鼠源病毒血清抗体。通过细胞直接观察、细胞培养试验和血吸附病毒试验检测外源因子。并用直接XC蚀斑法、S＋L检验法、电镜观察和双模板法以及联合培养与F-PERT法检测逆转录病毒及逆转录酶活1生。结果10种鼠源病毒抗体为阴性，未检出外源因子、逆转录病毒和逆转录酶。结论SPF金黄...

A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗的研制

关键词: 脑膜炎球菌  多糖疫苗  内毒素  

目的研制A、C、W135、Y群脑膜炎球菌四价多糖疫苗，并采用新方法去除细菌内毒素。方法经细菌培养后，分别提取A、C、W135和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖，纯化后，采用超速离心和层析技术相结合去除内毒素，按一定的配比制成四价多糖原液，加入保护剂，制成冻干疫苗，并进行检定。结果所研制的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗各项指标均达到了质控...

人用冻干无佐剂狂犬病疫苗的临床观察

关键词: 狂犬病  无佐剂疫苗  安全性  免疫效果  

目的观察人用冻干无佐剂狂犬病疫苗（武生欣宁）接种人体后的临床反应和免疫效果。方法40名健康者分别于0、3、7、14和28d接种疫苗，观察接种者副反应，并于接种后采血，用快速荧光灶抑制试验检测血清中和抗体水平。结果第1针和第2针接种后副反应率分别为2．5％和7．9％，后3针副反应率为0。免疫前抗体均为阴性，接种后第7天抗体阳转率为76％，...

18C型肺炎球菌荚膜多糖的水解及水解片段的特性

关键词: 肺炎球菌荚膜多糖  水解  乙酸  

目的探索不同乙酸水解条件对18C型肺炎球菌多糖的水解效果。方法选择60℃和92℃2种温度，以不同乙酸浓度和不同时间对多糖进行水解，用层析法检测相对分子质量，免疫双扩散法和ELISA抑制法分别检测活性。结果0．2mol／L乙酸92℃水解16h，水解程度趋于稳定，相对分子质量可达57000；1．0mol／L乙酸60℃水解40h，水解程度趋于稳定，相对分子质量可...

重组人骨形态发生蛋白-7复合体对牙槽骨再生的影响

关键词: 骨形态发生蛋白  复合体  牙槽骨  再生  

目的观察基因重组人骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）与明胶海绵的复合体对犬牙槽骨再生的影响。方法犬拔牙刨内植入rhBMP-7与明胶海绵的复合体，以自然愈合拔牙创为对照。于术后2、4、8周分别将犬处死，取拔牙创处牙槽骨标本，行X线和组织学切片检查，观察成骨情况及牙槽骨萎缩情况。结果X线及组织学切片显示实验侧成骨速度及成骨质量明显优于对照...

第三次全国现代免疫诊断与疫苗学术研讨会征文通知

阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体的构建

关键词: 阿尔采默病  治疗性疫苗  原核表达  

目的构建阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体。方法选择Aβ42的B细胞优势表位的15个氨基酸基因序列，与趋化因子BCA-1基因连接，克隆至经突变改造的原核表达质粒pRSET／no His中，经酶切和DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定及DNA测序确定已将BCA-1／A β1-15克隆到表达载体pRSET／no His中。结论已成功地构建了Aβ42亚单位疫苗的原核表达质粒。

不同浓度抗菌素对血浆纤维蛋白原的影响

关键词: 血浆  纤维蛋白原  抗菌素  

目的研究4种常用抗菌素的浓度对血浆纤维蛋白原的影响。方法采用凝固法，以加入抗菌素后血浆中纤维蛋白原的凝固时间为指标，观察不同浓度的头孢哌酮钠、氯霉素、乳酸环丙沙星和硫酸庆大霉素对血浆纤维蛋白原的影响。结果随着氯霉素、硫酸庆大霉素和乳酸环丙沙星浓度的降低，血浆中纤维蛋白原的凝固时间延长；而随着头孢哌酮钠浓度的降低，凝固...

快速细胞培养法在呼吸道合胞病毒感染早期诊断中的应用

关键词: 呼吸道合胞病毒  早期诊断  快速细胞培养  

目的建立检测呼吸道合胞病毒（RSV）的快速细胞培养法，并应用于呼吸道合胞病毒感染的早期诊断。方法采用自制的抗RSV的单克隆抗体，经快速细胞培养法和直接涂片法检测165份急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽分泌物及咽拭子中RSV，并与病毒分离培养比较，再将自制试剂盒与进口呼吸道病毒荧光检测试剂盒检测结果进行比较，探讨其临床实用性。结果57份...

《中国药学大辞典》（2007年）征订启事

猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用

关键词: 猪细小病毒  pcr  特异性  敏感性  

目的建立猪细小病毒（PPV）PCR检测方法。方法设计一对针对PPV的特异引物，经方阵滴定法确定PCR检测的最佳条件，以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增，并对扩增产物进行斑点杂交鉴定。提取已知滴度的病毒培养物DNA为模板，稀释后进行PCR扩增，测定PCR方法的敏感性。采用此方法检测了180份猪各种组织样品的DNA及PPV-猪组织混合感染PK-15细胞模型。结...

毕赤酵母表达乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化和免疫效果

关键词: 乙型肝炎病毒  pres2蛋白  s蛋白  纯化  免疫效果  

目的研究重组毕赤酵母表达的乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化方法及免疫效果。方法甲醇诱导含preS2S基因的重组毕赤酵母菌，采用蔗糖区带速率离心、Butyl-S-Sepharose 4FF疏水层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析等方法，对表达产物进行纯化。纯化后蛋白经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定，制备成疫苗，并进行效力试验。放射免疫法检测免...

小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体试验条件的优化

关键词: 白喉类毒素  抗体  veto细胞  

目的优化小鼠-Veto细胞法测定白喉类毒素抗体的试验条件。方法用含吸附白喉类毒素的制品免疫NIH小鼠，35d后眼眶采血，分离血清，对用小鼠-Veto细胞法测定白喉类毒素抗体的试验条件进行优化。结果确定了小鼠-Veto细胞法测定白喉类毒素抗体的最佳试验条件。结论优化试验条件的小鼠-Vero细胞测定白喉类毒素抗体的方法，能客观准确地评价白喉类毒素...

重组酵母疫苗载体技术的应用

关键词: 酵母  载体  治疗性疫苗  

治疗性疫苗在感染性疾病和肿瘤防治方面的应用已成为当前疫苗研究的热点。重组酵母疫苗载体技术为新型的治疗性疫苗技术，主要诱导抗原特异性T细胞免疫，从而增强保护性细胞免疫反应。利用基因工程改造的重组酵母疫苗进行恶性肿瘤和传染性疾病的治疗已成为疫苗研发的一个新方向。国内外全酵母疫苗临床前药效学、药理毒理研究和临床观察等已取得...

幽门螺杆菌疫苗的研究进展

关键词: 幽门螺杆菌  疫苗  

幽门螺杆菌是慢性胃炎和消化性溃疡乃至胃癌的主要致病菌，在人群中感染率较高，世界卫生组织已将其列为Ⅰ类致癌因子。目前对幽门螺杆菌的联合药物治疗由于费用昂贵、病人依从性差、抗生素耐药等原因受到一定限制，为了有效控制幽门螺杆菌感染，疫苗的研发逐渐成为幽门螺杆菌研究领域的热点，疫苗接种是防治幽门螺杆菌感染最有前景的方法。本文...

出血性大肠杆菌O157:H7感染和免疫的动物模型

关键词: 出血性大肠杆菌  动物模型  

出血性大肠杆菌O157：H7是危害严重的肠道致病菌。对于该菌感染和免疫动物模型的研究，受到该领域众多研究者的关注。本文对近年来国内外家兔、小鼠、猪和反刍动物等O157：H7感染和免疫动物模型的研究进行了综述。

中国最大的专业化疫苗研发与生产基地——长春长生生物科技股份有限公司

关键词: 生物科技  疫苗研发  专业化  生产基地  股份  长生  长春  高新技术企业  

长春长生生物科技股份有限公司是我国疫苗研发与生产的大型专业化医药技术企业，也是科技部和吉林省科技厅认定的高新技术企业。它有着良好的发展环境和高素质的科技队伍，拥有现代化的疫苗研究实验室和国家级标准的GMP生产车间。