中国兽医科学杂志

A型副鸡嗜血杆菌血凝素基因的克隆表达及其产物的生物学活性鉴定

关键词: 副鸡嗜血杆菌  血凝素基因  原核表达  

根据GenBank中登录的A型Hpg Hp8株血凝素基因序列，设计合成了1对特异性引物，以Hpg Hp8株中提取的细菌DNA为模板，利用PCR扩增了Hpg血凝素全长基因（1035bp），将其克隆到pET-32a（＋）载体上，构建了原核表达载体pET—HA，表达并纯化了重组蛋白，通过免疫印迹及血凝和血凝抑制试验鉴定了该重组蛋白的生物学活性。结果显示，表达并纯化的Hpg HA...

猪瘟病毒E2基因和牛疱疹病毒Ⅰ型UL49基因的共表达

关键词: 猪瘟病毒  e2基因  ul49基因  体外表达  

为了探讨牛疱疹病毒Ⅰ型（BHV—1）UL49基因编码的膜蛋白VP22对猪瘟病毒E2基因表达水平的影响，构建了单独表达E2蛋白的pcDNA3．1-E2及融合表达E2-VP22的pcDNA3．1 E2-UL49。将pcDNA3．1-E2与pcDNA3．1-E2-UL49分别转染293T细胞，间接免疫荧光试验结果显示，单独表达E2蛋白的细胞，其荧光主要固缩于核周，而融合表达E2-VP22蛋白的细胞在核周及细...

猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究

关键词: 猪瘟病毒  单克隆抗体  酶联免疫吸附试验  免疫组织化学  

通过杂交瘤技术制备猪瘟病毒单克隆抗体，对酶联免疫吸附试验筛选的阳性单克隆抗体进行免疫组织化学研究，从中发现1株单克隆抗体能与感染猪瘟病毒的猪肾、肝病理组织切片及PK15细胞产生特异性染色反应，与非感染猪的肾、肝组织切片和PK15细胞无染色反应。单克隆抗体与猪瘟病毒感染的PK15细胞或猪肝、肾小血管内皮细胞中的猪瘟病毒呈现较强的特...

禽致病性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的分子流行病学调查

关键词: 致病性大肠杆菌  耶尔森菌强毒力岛  流行病学  

为了解耶尔森菌强毒力岛（HPI）在禽致病性大肠杆菌（APEC）中的流行情况，根据HPI结构基因irp2和fyuA参考序列设计了引物，用PCR方法和斑点杂交法对从江苏等地分离的APEC基因组进行了扩增和检测，并对E．coli NTJC040406菌株相关基因进行了克隆和序列分析。结果表明，216株APEC中有44．9％的菌株携带有HPI，序列分析表明相关基因与GenBank中参...

传染性腔上囊病病毒VP3蛋白模拟表位的筛选

关键词: 传染性腔上囊病病毒  vp3蛋白  抗原表位  噬菌体随机15肽库  筛选  

为了研究传染性腔上囊病病毒（IBDV）的致病机理及研制有效的IBDV疫苗，利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子，对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩增淘洗，从每株单克隆抗体筛选到的噬菌斑中随机挑取20个单克隆噬菌斑，通过间接ELISA和竞争抑制ELISA检测...

牛病毒性腹泻病毒P20及P14蛋白基因的表达及其产物的抗原性分析

关键词: 牛病毒性腹泻病毒  p20蛋白  p14蛋白  原核表达  抗原性  

将牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）p20和p14基因分别亚克隆至原核表达载体pGEX-6p-1和pPROEX—HTb，并转化至相应的宿主菌大肠杆菌BL21（DE3）pLysS和DH5α中表达。P20蛋白在2个宿主中都获得了高效表达；P14蛋白在BL21（DE3）pLysS中表达量较低，而在DH5α中未见表达。对P14蛋白诱导表达过程的监测表明，P14蛋白对大肠杆菌...

口蹄疫病毒3D基因的真核表达及其表达产物的功能分析

关键词: 口蹄疫病毒  rna依赖的rna聚合酶  真核表达  

利用RT—PCR技术扩增口蹄疫病毒（FMDV）编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因，经测序确认后将其克隆到真核表达质粒载体pcDNA3．1（＋）中，重组质粒pcDNA3．1（＋）-3D经HindⅢ、XbaⅠ双酶切后转染至BHK-21细胞。用纯化的目的蛋白进行Western—blotting鉴定，并预测该3D基因表达产物的三级结构。结果显示，获得分子质量约55ku的单一3D基因表达产物...

鸡IL-2和IL-15基因真核表达质粒对禽流感疫苗的免疫增强作用

关键词: 禽流感疫苗  hi抗体  

根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物，采用RT-PCR法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因，与pcDNA3．1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15，研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示，免疫后第10d，pDNAIL-15＋AI灭活疫苗组和pDNAIL-2＋AI灭活疫苗组HI抗体水平显著高于AI灭活疫苗组（P〈0．05...

结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合基因的表达及其多克隆抗体的制备

关键词: 结核分枝杆菌  表达  多克隆抗体  

以结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组DNA为模板，经重叠PCR扩增获得CFP10-ESAT-6融合基因片段，克隆于pET21a表达载体中，获得了重组质粒pET21a—CFP10—ESAT—6，将其转化大肠杆菌BL21细胞，经IPTG诱导表达，得到了25ku的目的蛋白。表达产物经纯化和定量分析后免疫新西兰大白兔，收集兔血清进行抗体ELISA检测。结果显示，成功构建了CFP10-ESAT-6...

牛结核病巢式PCR快速检测方法的建立

关键词: 牛结核病  巢式pcr  ppd  

根据分枝杆菌（mycobacteria）保守的插入序列IS1081设计4条特异性引物，建立了快速检测牛结核病的巢式PCR方法。该方法一次扩增的敏感性是1．35pg，二次扩增的敏感性是1．35fg。在对95份PPD阳性牛临床病料组织和23份血液样本的PCR检测中，用引物TB—Q1和TB-Q2做一次扩增，阳性检出率分别为36／95（37．5％）和5／23（21．7％）；用引物TB—B1和...

鸡传染性腔上囊病病毒Gt株全基因组序列分析及真核表达载体的构建

关键词: 传染性腔上囊病病毒  gt株  分子标签  核酶  真核表达载体  

采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组，对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签，且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构（HamRz）和丁肝病毒核酶结构（HdvRz）。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的口肌动蛋白启动子下游，构建了IBDV真核表达载体pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT，...

黄牛足螨的形态学观察

关键词: 黄牛  足螨  形态学  

采用光学显微镜和扫描电子显微镜对采自四川黄牛的足螨进行了形态学观察和测量。结果表明：各发育阶段的足螨均呈长椭圆形，幼螨大小为（160．9±26）μm×（124．7±17）μm，3对足；雌性若一螨大小为（210．8±29）μm×（160．1±22）μm；雌性若二螨大小为（235．2±18）μm×（183．1±16）μm，体末具有圆柱形突出物1对；雌性成螨大小为（311．4±27）μm×...

卵丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟及其后续发育的影响

关键词: 体外成熟  卵丘卵母细胞复合体  生发泡破裂  

观察了卵丘细胞共培养对小鼠生发泡期部分裸露（PNO）和裸卵（NO）成熟和发育能力的影响；分别用小鼠、大鼠、猪的卵丘细胞与小鼠PNO和NO进行了共培养。检测了小鼠PNO和NO的减数分裂能力、生发泡构型、受精和胚胎发育能力。结果，PNO、NO的减数分裂能力显著（P〈0．05）低于卵丘完整复合体（COCs）的减数分裂能力。COCs中SN型卵母细胞比率显著高...

鼻腔免疫禽流感灭活疫苗对鸡呼吸道肥大细胞分布的影响

关键词: 禽流感灭活疫苗  免疫佐剂cpg  鼻腔免疫  肥大细胞  鸡  呼吸道  

用添加CpG的禽流感病毒（H5亚型）灭活疫苗对7日龄罗曼公鸡进行鼻腔免疫，14日龄加强免疫一次；分别于首免后第3、5、7周剖杀，取鼻腔、喉部、气管、气管叉及肺组织，通过甲苯胺蓝染色法显示肥大细胞，观察呼吸道各部位肥大细胞的分布及数量变化。结果显示，首免后第3周气管和气管叉黏膜中的肥大细胞数量显著增加（P〈0．05），第5周时喉部和气...

猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化

关键词: 原核表达  蛋白纯化  

以pcDNA3．1-pIL-18为模板，采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18（IL-18）的成熟蛋白基因，通过KpnⅠ＋SacⅠ双酶切及连接反应，构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中的基因片段连接正确。之后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），于37℃、1．0mmol／L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解...

大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理

关键词: 产肠毒素大肠杆菌  耐热肠毒素b  腹泻  机理  

介绍了大肠杆菌耐热肠毒素b（STb）的编码基因、理化性质、免疫学特征、分泌特征、毒性相关氨基酸残基、空间结构、膜受体以及STb致动物腹泻的机理。认为STb是一种十分重要的肠毒素，应进一步加强对STb及其致腹泻机理的研究。

鸡传染性支气管炎病毒分子变异机理和免疫机理的研究进展

关键词: 传染性支气管炎病毒  病变型  分子变异  免疫机理  

为阐释鸡传染性支气管炎病毒（avian infectious bronchitis virus，IBV）的高变异特性及其原因，从IBV的不同病变型、分子变异及免疫机理几方面概述了IBV的研究进展，提出了IBV基因组突变、免疫压力和不同毒株基因组间的同源重组所导致的病毒血清型、基因型和组织嗜性的改变是造成免疫失败的主要原因。

中国畜牧兽医学会期刊编辑学分会2007年联合征订目录