关键词：大肠杆菌 奶牛乳腺成纤维细胞 tlr4 

摘要：为研究大肠杆菌对奶牛乳腺成纤维细胞（BMFB）TGF-β1表达的影响以及对其信号转导通路Toll样受体4（TLR4）的表达和核转录因子κB（NF-κB）活化的影响,采用热灭活的不同浓度大肠杆菌菌液（0、1×10^5、1×10^6、1×10^8 CFU/mL）作用于奶牛乳腺成纤维细胞,分别于不同时间点（作用后第6、12、24、48小时）运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测TGF-β1和TLR4mRNA的表达,运用Western-blot检测TGF-β1、TLR4和p-NF-κB-p65蛋白的相对表达量。结果显示,大肠杆菌作用BMFB后,TGF-β1mRNA和蛋白的表达量显著的升高,并且TGF-β1mRNA的表达呈明显的时效及量效关系,于第24小时达到高峰后降低（P〈0.05）;TGF-β1蛋白的表达量呈量效性（P〈0.05）。TLR4mRNA和蛋白表达水平显著升高,并且TLR4mRNA和蛋白的表达呈时效性和量效性,分别于作用后第24和12小时达到最高后逐渐下降（P〈0.05）。p-NF-κB-p65的表达与大肠杆菌作用浓度呈正量效关系,表达量随作用时间延长先升高后逐渐降低（P〈0.05）。上述研究结果表明,热灭活的大肠杆菌能够促进BMFB的TLR4表达,并激活BMFB p-NF-κB-p65蛋白的表达,从而促进TGF-β1的表达。

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