中国兽医科学杂志

鸡源产气荚膜梭菌重组酶聚合酶扩增检测方法的建立

关键词: 产气荚膜梭菌  重组酶聚合酶扩增技术  荧光定量检测  鸡坏死性肠炎  

为建立鸡源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的快速诊断方法,本研究以产气荚膜梭菌α-毒素的编码基因plc为基础设计、合成引物和探针,并以real-time PCR的方法进行验证,建立了鸡源产气荚膜梭菌的重组酶聚合酶扩增(RPA)检测方法。该方法可在38℃、25 min内对产气荚膜梭菌的α-毒素编码序列进行快速特异性扩增,最低检测限量可达1×10^1copies/μ...

基于不同重组小反刍兽疫病毒N蛋白建立的双抗原S-ELISA抗体检测方法的比较研究

关键词: 原核表达载体  小反刍兽疫  核衣壳n蛋白  双抗原夹心elisa  比较  

为探索建立小反刍兽疫病毒抗体双抗原夹心ELISA方法的原料,本研究成功使用pET-30a与p ET-32a两个不同原核载体分别表达与纯化了小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白N抗原。使用不同原核载体表达的N抗原组合建立的双抗原夹心ELISA抗体检测方法、相同原核载体表达的N抗原组合建立的双抗原夹心ELISA抗体检测方法、N抗原包被建立的抗体间接ELISA检测方法以及血...

鹿流行性出血热病毒实时荧光RT-RPA检测方法的建立

关键词: 鹿流行性出血热病毒  快速检测  

为建立一种快速检测鹿流行性出血热病毒(EHDV)的实时荧光RT-RPA检测方法,本研究根据EHDV保守的非结构蛋白NS1基因(segment 5)设计特异性引物和探针,建立了敏感、快速的EHDV核酸实时荧光RT-RPA检测方法。结果显示,该方法特异性强,能准确检测EHDV核酸,与蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)等病原核酸无交叉反应;敏感性高,...

牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重Nano-PCR检测方法的建立与应用

关键词: 牛传染性鼻气管炎病毒  牛病毒性腹泻病毒  

为了对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)同时进行检测,提高检测效率,根据IBRV gE基因序列(GenBank登录号:L27212.1)和BVDV 5′端非编码区序列(GenBank登录号:AY-278459.1)的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1对BVDV的特异性引物,建立用于IBRV和BVDV的双重纳米PCR(Nano-PCR)检测方法。特异性试验结果显示,该方法对牛副...

猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立与应用

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征  sybr  实时荧光定量pcr  

本研究根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计出一对引物,建立了检测该病毒的SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法。此法特异性高,与猪流行性腹泻(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、塞内卡谷病毒(SVV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;采用不同滴度的PRRSV测定,当Ct≤32且有明显的指数扩增曲线,判定...

抗牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白中和活性单克隆抗体的制备及鉴定

关键词: 牛传染性鼻气管炎病毒  gd蛋白  单克隆抗体  

为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的单克隆抗体,本研究用纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,然后以纯化的昆虫细胞表达的gD蛋白作为ELISA包被抗原筛选杂交瘤细胞株。结果获得3株能够稳定分泌抗gD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B4、3E8和4F12。采用夹心ELISA鉴定单克隆抗体的Ig亚类,结果显示,1B4、3E8为IgG2b,4F12为IgG1。免疫印迹试验与间接免...

犬圆环病毒Rep基因SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

关键词: 犬圆环病毒  sybr  pcr  rep基因  

为建立一种检测犬圆环病毒的快速诊断方法,本试验拟采用普通PCR方法扩增犬圆环病毒Rep基因,将目的基因克隆到T-Vector pMD19 (Simple),以测序正确的重组质粒作为模板,建立针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性试验。结果显示,Ct值与标准品在6.18×10^9~6.18×10^2copise/μL范围内呈良...

过表达TPL2蛋白BHK21细胞系的建立及其初步应用

关键词: tpl2基因  口蹄疫病毒  svv病毒  慢病毒表达系统  

利用慢病毒表达系统将TPL2(COT和MAP3K8)质粒稳定整合在乳仓鼠肾细胞(baby Hamster Syrian kidney)BHK21细胞基因组染色体上,建立稳定表达TPL2的BHK21/TPL2细胞系。构建TPL2质粒,通过基因合成将TPL2基因和慢病毒载体Lv-PCDH连接,得到重组慢病毒载体Lv-TPL2。通过嘌呤霉素筛选得到的阳性细胞株BHK21/TPL2即为稳定表达TPL2蛋白的BHK21细胞株。运用...

鸡堆型艾美耳球虫gam56基因的克隆及其表达产物的免疫原性分析

关键词: 堆型艾美耳球虫  gam56基因  克隆  原核表达  免疫原性分析  

为了研究堆型艾美耳球虫gam56基因的功能,提取堆型艾美耳球虫(扬州株)卵囊DNA,应用PCR扩增gam56基因,克隆至pGEM-T-Easy载体;测序、密码子优化后连接至pET-28a质粒,构建pET-28aEagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示:gam56基因全长1 323 bp,编码440个氨...

猪链球菌病与副猪嗜血杆菌病二联四价灭活疫苗的研制

关键词: 猪链球菌  副猪嗜血杆菌  二联四价灭活疫苗  

为研制安全有效的猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病二联四价灭活疫苗,将分离的猪链球菌(Streptococcus suis,SS)血清2型SS2-NT株、9型SS9-CZ株与副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)血清4型HPS4-YC株、5型HPS5-SQ株菌液灭活后稀释至所需浓度,再与Montanide GEL 02 PR佐剂混合,制备猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病二联四价灭活疫苗。将制备的疫苗接种2...

河北省鸡肉中四种主要致病菌的多重定量PCR检测方法的建立与应用

关键词: 鸡肉  主要致病菌  多重定量pcr  

为了建立鸡肉中沙门菌、金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌和肠球菌等病原菌的快速检测方法。设计4种病原菌特异引物,建立多重SYBR Green Ⅰ定量PCR方法,对河北地区销售的鸡肉进行检测。结果,建立了多重定量PCR方法,与大肠杆菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、志贺菌、绿脓杆菌、链球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、阴沟肠杆菌等菌无交叉,最低检出...

实时荧光定量PCR所用仔猪组织内参基因的筛选

关键词: linreg  pcr  genorm  内参基因  实时荧光定量pcr  仔猪  

为了保证在应用实时荧光定量PCR方法检测仔猪目的基因时,检测结果可以科学地用于多组织间的纵向比较,减少因内参基因在多组织间变化而带来的误差,筛选出能够在多组织间稳定表达的内参基因,对于目标基因的准确校正具有重要意义。本试验以4周龄仔猪不同组织(心、肝、脾、肺、肾、胰、气管、骨骼肌、肺门淋巴结、大肠、小肠、大脑、小脑)为试验样本...

Ghrelin在幼犬消化器官的表达及定位研究

关键词: 犬  消化管  消化腺  ghrelin  免疫组化染色  

为探索Ghrelin在幼犬体内的表达及分布情况,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组化染色对Ghrelin在消化器官的表达情况进行了定量及定位检测。RT-qPCR结果显示,在检测的12个消化器官中,Ghrelin相对表达量差异显著。胃的表达量最高,显著高于其他组织,其次是舌、十二指肠、肝、回肠、空肠、食管,而下颌腺、胰腺、盲肠、直肠的表达量较低,结肠的...

玉屏风多糖脂质体对雏鸡外周血集落刺激因子以及T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞亚群的影响

关键词: 玉屏风多糖  脂质体  集落刺激因子  淋巴细胞  

胆汁酸TGR5受体在疾病中的研究进展

关键词: tgr5受体  二型糖尿病  肥胖症  炎症  癌症  肝脏再生  

TGR5受体是G蛋白偶联受体家族(G protein-coupled receptors,GPCRs)中的成员。TGR5受体在人类和动物中的许多组织如肾、肝、胃、小肠、肺等中都处于高表达,其中在胎盘和脾中的表达最高。TGR5不仅是胆汁酸的受体,也可以被其他的一些合成激动剂所激活介导一系列的信号通路,参与机体的生理和病理过程,如4-苯氧基-烟酰胺或4-苯氧基-嘧啶-5-甲酰胺化...

Cu^2+对小鼠精原细胞活性氧及线粒体功能的影响

关键词: spg细胞  线粒体功能  活性氧  线粒体膜电位  

通过终浓度含Cu^2+为0μmol/L(对照组)、10μmol/L(低浓度组)、50μmol/L(中浓度组)、100mol/L(高浓度组)的体外培养体系分别处理小鼠精原细胞(GC-1 spg细胞),在培养12、24、36 h时,应用流式细胞仪检测GC-1 spg细胞的活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位(Δψm)变化,应用高分辨率呼吸仪检测基础呼吸、质子漏、呼吸控制比率(RCR)、剩余氧通量(ROX),以评价不...

内质网IP3R钙通道在玉米赤霉烯酮诱导TM4细胞自噬中的作用

关键词: 玉米赤霉烯酮  睾丸支持细胞  内质网应激  自噬  

镉暴露对BRL 3A细胞溶酶体的影响

关键词: 镉  溶酶体降解功能  细胞损伤  

为了探究镉(Cd)对肝细胞溶酶体的影响以及溶酶体降解功能在镉致肝细胞损伤中的作用,本研究以大鼠肝细胞系(BRL 3A细胞)为研究对象,将BRL 3A细胞暴露于不同浓度氯化镉,利用x CELLigence细胞实时分析系统(real-time cell analysis,RTCA)检测Cd对BRL 3A细胞指数的影响,Lyso-Tracker-Red染色检测溶酶体酸性,Western-blot法检测组织蛋白酶B(CTSB)表达...