关键词：禽流感病毒 血凝素基因 重组鸡痘病毒 

摘要：以鸡痘病毒（FPV）疫苗株为载体，将H5亚型AIV血凝素基因（HA）和鸡白细胞介素18（IL-18）基因分剐插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI—P7．5×20）和单一启动子（P7．5）下游，构建了携带AIVHA基因和鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL—H5HA—ILl8。将H5亚型AIVHA基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTA2复合启动子（ATI—P7．5×20）下游构建了携带H5亚型AIVHA基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pU—TA2-H5HA。应用脂质体转染法，将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），在BrdU药物加压下进行3次蚀斑筛选。以不同代次细胞的mRNA为模板，利用H5亚型AIVHA基因和鸡IL-18基因特异引物进行RT—PCR和蛋白印迹检测，筛选出能共表达H5亚型AIVHA基因与鸡IL-18基因和单独表达H5亚型AIVHA基因的重组鸡痘病毒rFPV—H5HA—ILl8和rFPV—H5HA，这些重组鸡痘病毒的构建为AIV活载体疫苗的研制奠定了基础。

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