中国兽医学报杂志

几种中国鸡传染性支气管炎致弱毒株对流行毒株CK／CH／LDL／97I保护作用的评价

关键词: 鸡传染性支气管炎病毒  s1基因  交叉保护  同种  异种  

选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK／CH/LHLJ／04V F110、tl／CH／LDT3／03F120和1株同种毒株CK／CH／LDL97 I F115，研究其对中国流行强毒株CK／CH／LDL97I的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析，研究了CK／CH／LDL97I与其他病毒的基因型关系。结果显示，CK／CH／LDL97I属于有别于其他IBV毒株的一个独立...

单抗介导的银加强金标免疫技术检测传染性支气管炎病毒

关键词: 传染性支气管炎病毒  单克隆抗体  胶体金  银加强胶体金检测技术  

利用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG，建立了一种银加强金标免疫技术（SECGA）检测IB抗原。检测抗原时先将抗原点样于硝酸纤维素膜（NCM）中央，封闭后浸于l：40IBV单抗中作用10min，洗涤后再浸于1：4金标羊抗鼠IgG液中作用1h，银染10min后观察，在膜上出现灰黑斑点的为阳性结果，反之，不出现斑点为阴性结果。SECGA对IB抗原最低检测量为0．703ng／...

猪葡萄球菌ExhB基因在E．coli中的表达及生物学活性分析

关键词: 猪葡萄球菌  exhb基因  基因表达  生物活性  

以猪葡萄球菌基因组DNA为模板，利用PCR方法扩增ExhB基因，克隆测序鉴定后，插入质粒pET32a，构建重组表达载体pET32a-ExhB，通过大肠杆菌BL21表达重组融合蛋白，利用Ni亲和层析的方法纯化重组的融合蛋白，并用纯化的蛋白攻毒裸鼠，鉴定其生物学活性。结果显示，扩增出了猪葡萄球菌EcchB基因并纯化出了重组的融合蛋白，SDS-PAGE分析表明，融合蛋...

生物素标记寡核苷酸探针原位检测石蜡切片鸭瘟病毒核酸

关键词: 鸭瘟强毒  原位杂交  检测  分布  

据GenBank中有关鸭瘟病毒（DPV）的1个765bp的EcoR I片段序列，用Oligo软件设计长度为37bp的寡核苷酸并用生物素标记制备探针，经blast分析和斑点杂交检测探针的特异性后，建立从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法并对人工感染死亡鸭的各组织器官进行检测，结果显示：（1）寡核苷酸探针能特异性检测到DPV强毒CHv株DNA，对鸭病毒性肝炎病毒Q...

鹅源副黏病毒NA-1株全长cDNA克隆的构建及鉴定

关键词: 鹅源副黏病毒  race  全长cdna  拯救  

应用cRACE法扩增鹅源副黏病毒NA-1株cDNA5’末端。参照Peter等的方法设计引物，扩增鹅源副黏病毒NA-1株cDNA的3’末端。根据GenBank上发表的鹅源副黏病毒序列设计6对引物，应用RT-PCR方法分6段扩增此病毒结构基因序列，并将其连接完成后与连接有鹅源副黏病毒NA-1株末端序列的转录载体连接，构建得到全长cDNA克隆。鹅源副黏病毒NA-1株全长cDNA克...

ILTVgB基因重组BCG菌株的构建及其免疫原性

关键词: 鸡传染性喉气管炎病毒  gb糖蛋白基因  rbcg  免疫原性  

gB基N是传染性喉气管炎病毒（ILTV）的主要保护性抗原基因，本试验以ILTV基因组为模板，利用PCR特异扩增出gB基因，将其连接到含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的表达载体pRR3上，从而构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pR-α-gB，再电转化至BCG中，形成重组菌株rBCG-gB。热激后gB蛋白在耻垢分枝杆菌M．smegmatis...

“拯救”NA－1株鹅源副黏病毒微型基因组的构建

关键词: 病毒拯救  丁肝病毒核酶  微型基因组  

根据GenBank上已发表的NA－1株GPMV全序列设计并合成2对特异性引物，克隆得到GPMV的Leader及Tralier序列，与T7启动子、丁肝病毒核酶序列及T7终止子重叠PCR连接后，将连接产物克隆至改造的pVAX－1载体中，并用增强型绿色荧光蛋白基因代替GPMV的整个编码区，只保留与病毒复制、转录和病毒包装相关的调控序列，酶切、测序及荧光鉴定后，与pCI－NP...

吉林株犬新孢子虫的分离与鉴定

关键词: 犬新孢子虫  流产胎儿  分离与鉴定  

将疑似感染犬新孢子虫而流产的牛胎儿脑组织接种于Vero细胞进行体外培养，同时感染长爪沙鼠进行动物试验。提取牛流产胎儿脑组织DNA、沙鼠脑组织DNA、细胞培养虫体DNA，用犬新孢子虫特异性引物进行PCR扩增。结果显示，PCR扩增出了1条约为681bp的目的奈带；测序结果表明，扩增出的特异性目的基因序列与GenBank中发表的犬新孢子虫NcSAG1基因（AF11...

猫杯状病毒自然弱毒株的分离鉴定及对猫的免疫试验

关键词: 猫杯状病毒  分离  免疫  

在进行猫狂犬病流行病学调查时，从猫的唾液中发现了杯状病毒。通过对病毒进行分离和形态学、理化学、动物感染试验和分子生物学等鉴定，证明该病毒为猫杯状病毒（FCV）自然弱毒株。免疫试验证明，该毒株可以诱导猫产生较高水平的中和抗体，且能持续50周以上，并能抵抗FCV强毒株攻击而不发病。

GC02鸡球虫病疫苗免疫对雏鸡血清自由基代谢的影响

关键词: gc02鸡球虫病疫苗  免疫  自由基  

将100只雏鸡随机分为试验组和对照组（150只／组），试验组于7、14日龄时各免疫接种8000个GC02鸡球虫病疫苗卵囊。第2次接种后7、14、21、28d时，随机选取试验组和对照组鸡各10只，颈静脉采血分离血清，测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力和丙二醛（MDA）含量。结果显示：（1）试验组接种7、2...

实时荧光定量PCR检测伪狂犬病病毒方法的建立与初步应用

关键词: 伪狂犬病病毒  荧光定量pcr  检测  

根据GenBank中猪伪狂犬病病毒（PRV）gE基因的序列（EF552427），利用Premier express设计并合成1对引物和相应的TaqMan探针，从猪伪狂犬病病毒（PRV）感染的细胞中提取DNA，进行PCR扩增。将鉴定正确的gE基因片段克隆入pGEM-T Easy载体中，转化大肠杆菌JM109，经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒。以该阳性重组质粒为荧光定量PCR标准品模板建立...

产肠毒素性大肠杆菌K88与K99菌毛蛋白的串联表达

关键词: 大肠杆菌  k88  k99  串联表达  

根据GenBank中发表的E．coli K88、K99基因序列，分别设计合成1对引物。利用PCR技术，以大肠杆菌C83907和C83644的质粒为模板分别扩增不合信号肽的K88及K99基因。通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切、连接和转化，构建了含K88-K99串联表达载体的重组菌株BL21（DE3）（pETK88CK99）。结果显示，经酶切、PCR鉴定和DNA序列分析，证实了构建的重...

奶牛乳腺炎源性大肠杆菌csgC基因的克隆及载体构建

关键词: 大肠杆菌  curli菌毛  csgc基因  表达  

根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列设计了1对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌，经生物学鉴定后，提取全基因组DNA为模板，PCR扩增出csgC基因，连入pMD18-T克隆载体，测序，结果表明，扩增片段含有333个核苷酸，编码111个氨基酸的成熟蛋白，与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近，氨基酸...

人工感染鸭瘟的病理学研究

关键词: 鸭瘟  病理组织学  超微结构  病毒形态  

用从自然病例中分离鉴定的鸭瘟病毒-乐山株（DPV-LS株）人工感染四川麻鸭，成功复制出鸭瘟（DP），并对其病理组织学和宿主细胞超微结构变化及病毒的形态结构进行观察。试验组鸭出现高热、神萎、不食、腹泻，剖解见食道、小肠、泄殖腔及各实质器官出血；组织学变化表现为各脏器出血、组织细胞变性、坏死，血管内皮受损，纤维素样坏死。超微病理...

高致病性猪蓝耳病自然病例与美洲株（VR-2332）人工感染猪的比较病理学

关键词: 猪蓝耳病  美洲株  高致病性毒株  比较病理学  

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲株与我国当今流行的高致病性毒株在致病性上的差异，对高致病性PRRSV自然感染病例和美洲株VR-2332人工感染猪进行比较病理学研究，探讨PRRSV高致病性毒株的致病特点及发病机制。结果显示，高致病性PRRSV会引起发病猪耳和四肢末端迅速发绀、皮肤点状出血、急性肺实变、全身出血性坏死性淋巴结炎、急性...

生长调控因子与GHRP-6微球的制备及对水貂生长的影响

关键词: 微球  生长激素释放因子  生长激素释放抑制因子  

以乳酸-乙醇酸共聚物为载体，利用复乳液中蒸发法制备pcDNA3GRF微球、pIRES-HBs／AgSSM微球和GIIRP-6微球。将空微球、pcDNA3-GRF微球（1mg／kg），pIRES-HBs／AgSSM微球（1mg／kg）和GHRP-6微球（1mg／kg）分别肌肉注射至水貂骨骼肌。120d后，3个试验组水貂体长均高于空微球组（P〈0．01）；采用RIA法测定各组水貂血清IGF-I浓度，3个试验组水貂...

大豆黄酮和染料木素对奶牛血清生化及血液流变学指标的影响

关键词: 大豆黄酮  染料木素  奶牛  血清生化  血液流变学  

采用单因素随机分组试验设计，将15头泌乳中期荷斯坦奶牛随机分为3组，每组5头，进行为期60d的饲养试验。每组奶牛分别饲喂不同日粮：Ⅰ组（基础日粮）、Ⅱ组（基础日粮＋200mg大豆黄酮／d）、Ⅲ组（基础日粮＋200mg染料木素／d），试验期60d内每隔15d晨饲前空腹采集血样，进行血液生化及流变学指标分析。结果显示，大豆黄酮组（Ⅱ组）球蛋白（G...

鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备

关键词: 克隆  原核表达  纯化  多克隆抗体  

根据NCBI上已发表的序列自行设计引物，通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因，将其克隆至pMD18-T，经酶切分析及序列测定鉴定后，进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a。转化大肠杆菌BL21中诱导表达。电洗脱纯化蛋白，用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。结果表明：克隆了鸭MHCⅡα基因，大小为633bp，经核苷酸测序与已登录的基因序...

蛋白酶激活受体2在断奶腹泻仔猪胃肠道组织中的定位及其作用

关键词: 蛋白酶激活受体2  腹泻  免疫组织化学  断奶仔猪  

以体质量均约为20k的10头断奶仔猪为研究对象（腹泻仔猪7头、健康仔猪3头），采用常规HE染色法观察腹泻仔猪胃肠道病理组织的变化，采用免疫组化检测蛋白酶激活受体2（Proteinase-activated receptar-2，PAR-2）的量。结果显示，通过HE染色观察发现病理组织学变化主要表现为粘膜上皮细胞脱落变性，肠壁平滑肌变薄，固有层内中性粒细胞、嗜酸粒细...

β-葡萄糖苷酶对肉鸡骨骼生长及抗氧化功能的影响

关键词: 大豆异黄酮  肉鸡  抗氧化  骨骼  

选用240羽1日龄艾维茵肉用仔公鸡，随机分为4个组，每组设4个重复，每个重复15羽。在玉米-豆粕基础日粮中添加不同水平的β-葡萄糖苷酶制剂（0、2、4、6g／kg）。试验期为42d。结果显示，饲粮中添加口葡萄糖苷酶的水平为0．2％时，肉鸡生长最佳，但对肉鸡的股骨、胫骨生长无显著影响，血清中钙、磷及碱性磷酸酶（ALP）指标均无显著变化；可显著提...

MTT法检测鸡脾脏和外周血NK细胞杀伤活性的条件优化

关键词: 鸡  mtt法  nk细胞杀伤活性  

选取不同日龄的SPF鸡和肉鸡，用贴壁法从血液和脾脏分离出NK细胞作为效应细胞，选择瘤细胞MDCCMSB1和MDCC-MSBCU147分别作为靶细胞，二者按比例混合，孵育，利用MTT法检测靶细胞的活力反映效应细胞对靶细胞的杀伤活性，并对效靶比、作用时间进行比较。结果显示，MSB-1和CU147均可作为NK细胞良好的靶细胞，但CU147更稳定；效靶比为20：1-50：1，...

鹅催乳素基因外显子2变异及其遗传效应

关键词: 鹅  prl基因  变异  遗传效应  

动物垂体前叶分泌的催乳素（Prolactin，PRL）具有广泛的生理效应，在家禽中与就巢、产蛋等繁殖性能有重要关联。本试验以皖西白鹅和莱茵鹅作为研究素材，运用PCR-SSCP法检测鹅PRL基因外显子2的单核苷酸变异并分析了变异的遗传效应。检测发现在皖西白鹅中存在C196T碱基突变，在莱茵鹅群体发现C170T碱基突变。关联分析结果表明，2个品种中的PRL基...

高铜对雏鸡肾脏细胞凋亡和周期的影响

关键词: 高铜  肾脏  流式细胞术  细胞凋亡  细胞周期  雏鸡  

360只1日龄艾维茵肉鸡随机分为6组，分别喂以对照日粮（Cu10．89mg／kg）和高铜日粮（Cu100mg／kg，高铜Ⅰ组；Cu200mg／kg，高铜Ⅱ组；Cu400mg／kg，高铜Ⅲ组；Cu600mg／kg，高铜Ⅳ组；Cu8．00mg／kg，高铜V组）6周，用流式细胞术研究高铜对雏鸡肾脏细胞凋亡和周期的影响。结果表明，肾脏细胞的调亡比例随日粮铜水平的升高而升高，当日粮铜水平...

不同剂量的蛋氨酸铜对肉鸡免疫器官发育和病理变化的影响

关键词: 肉鸡  蛋氨酸铜  免疫器官  病理变化  

选用1日龄健康AA肉仔鸡120只系统研究日粮中添加高剂量的蛋氨酸铜对肉鸡免疫器官发育、铜含量和病理变化的影响。将肉仔鸡随机分成4组，使用蛋氨酸铜作为铜源，饲喂玉米豆粕型基础日粮，对照组饲料铜含量为11mg／kg，3个试验高铜组分剐为：110、220、330mg／kg，试验至60日龄结束。在36日龄，各组随机屠宰6只鸡，计算免疫器官的质量指数；测量60...

真核表达质粒pTracer-CMV2FIL2在鸡体组织中表达及分布规律

关键词: dna疫苗  鸡  表达  体内分布  

将3周龄的三黄鸡肌肉接种200μg真核表达质粒pTraeer-CMV2FIL2，巢式PCR法检测血清、心、脾脏、肺脏、法氏囊、脑、骨髓、胸腺和肌肉接种部位中pTracer-CMV2FIL2出现和存留的时间；荧光定量PCR法检测其在血液中的动态变化；RT-巢式PCR法检测其在上述部位的表达情况。结果显示，接种后2-3h血清中可检测到pTracer-CMV2FIL2，6h时在血液中的含量最高...

饲养层细胞的接种密度对分离培养胚胎干细胞的影响

关键词: 昆明白小鼠  胎儿成纤维细胞  饲养层  胚胎干细胞  

建立有效的昆明白小鼠胎儿成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblast，MEF）饲养层培养体系，用于分离和培养小鼠胚胎干细胞（Embryonic stem cell，ES细胞）的研究。（1）取怀孕14．5d昆明白小鼠胎儿分离成纤维细胞，利用体外培养体系分离传代，选取生长旺盛并且已纯化的P3代的MEF，经丝裂霉素处理后，用细胞计数板计算活细胞数，分别按1×10^4、...

鸡IL-18成熟蛋白基因变构体毕赤酵母表达载体的构建及表达

关键词: 定点突变  毕赤酵母表达系统  

为使鸡IL-18成熟蛋白基因在真核系统中高效表达，对其进行定点突变，将酵母低频密码子突变为偏嗜性密码子，构建了鸡IL-18成熟蛋白变构基因真核重组表达载体pPICZαA-MChIL18＊，并将其转化入P．pastoris X-33。重组菌株X-33／pPICZαA-MChIL18＊经甲醇诱导后，表达产物的上清液经SDS-PAGE检测，结果在约23000处有目的条带，与预期的相对分子质量...

大鼠颅骨极量缺损模型的建立

关键词: 颅骨极量缺损  模型  骨修复  骨膜缝合  

通过大鼠颅骨极量缺损（Critical size defect，CSD）模型的建立，比较骨膜缝合与否对极量骨缺损修复的差异。手术制造大鼠颅骨极量缺损模型，分为骨膜缝合组（FH）与骨膜不缝合组（BF），分别于2、4、8、12周时进行大体观察、x线检查、病理组织学观察；24h和2、4、8周进行血清中碱性磷酸酶（ALP）的测定。结果显示，FH组、BF组大体观察没有明显...

12种藏药对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响

关键词: 藏药  鸡胚成纤维细胞  安全浓度  生长  

用MTT法测定了藏菖蒲、红景天、决明子、灵芝盖、灵芝柄、龙胆、天冬、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味珍珠丸、二十五味松石丸等12种藏药对体外培养的鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度和生长的影响。结果显示，各藏药的最大安全质量浓度红景天为31．25mg／L，天冬、降香、决明子和二十五味松石丸为62．5mg／L，乳香为125mg／L，二十五味珍珠丸...

富铜酵母对西门塔尔牛发情周期生殖激素分泌的影响

关键词: 西门塔尔牛  富铜酵母  发情周期  生殖激素  

选用16头18月龄、体况良好、体质量390kg的西门塔尔牛育成母牛，采用完全随机分组设计分为4组，研究富铜酵母（0、8、16、24mg／kg）对发情周期外周血清促黄体素、促卵泡素、孕酮和雌二醇分泌规律的影响。结果显示，8mg／kg组和16mg／kg组显著提高了发情周期促黄体素、促卵泡素、孕酮和雌二醇水平（P〈0．05）；24mg／kg组有提高趋势，但与对照...

猪精液5mL大管冷冻方法的初步研究

关键词: 猪  精液  5  ml大管  冷冻  人工授精  

以5mL大管解冻后的精子活力、质膜完整率、顶体完整率以及人工授精结果为判定指标，筛选冷冻液Ⅰ和冷冻液Ⅱ中N-乙酰-D-氨基葡萄糖（N-Acetyl-D-Glucosamine，N-AcGA）、甘油和卵黄的适宜浓度，寻找适宜的平衡时间和冷冻高度。结果显示：（1）在冷冻液Ⅰ中添加0．1％的N-AcGA，解冻后精子的活力和顶体完整率最高，分别为50．00％和56．60％；（2...

猪孤雌胚胎体外培养影响因素

关键词: 猪孤雌激活胚胎  体外培养  氨基酸  

对NCSU-23和PZM-3等2种培养基体外培养猪孤雌激活（PA）胚胎的效果进行了比较，结果显示，PZM-3组与NCSU-23组PA胚胎囊胚孵化率差异显著（32．6％vs 18．9％，P〈0．05）；NCSU-23中添加2％必需氨基酸（EAA）显著降低猪PA胚胎的囊胚发育率（20．1％vs 25．1％，P〈0．05）；添加1％非必需氨基酸（NEAA）显著提高猪PA胚胎的囊胚率（24．7％vs 19...

获能处理对山羊精子结合外源DNA能力的影响

关键词: 山羊  精子  体外获能  外源dna  质膜  

鲜精离心洗涤除去精浆，然后用0．4／μmol／L钙离子载体（IA组）作用10min或用10mg／L肝素（HE组）作用90min获能后，与DNA孵育，再用地高锌（DIG）末端标记的线形外源DNA进行转染，用免疫组化的方法分别检测它们的转染效率；用透射电镜观察精子获能前后的超微结构变化，并用碘化丙锭和羟化荧光素双探针检测获能对精子质膜完整性的影响，探讨精...

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