关键词：猪 伪狂犬病病毒 双重pcr 检测方法 

摘要：为了检测猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）的感染情况,并进行强弱毒株的鉴别诊断,本研究建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的鉴别猪PRV的双重PCR方法.针对PRV gE和gB基因序列,分别设计了2对特异性引物,通过对退火温度（50～60℃,按照1℃递增）、引物浓度（0.2～1.4 μL,依次增加0.2μL）的优化,结果表明,双重PCR反应的最佳退火温度为56℃、最适引物添加量为1 μL.特异性试验结果表明,该方法可以扩增出PRV gE（316 bp）和gB（432 bp）的目的片段,对PCV2、PTV、CSFV、PPV、PRRSV、大肠杆菌的DNA或eDNA均无扩增.敏感性试验结果表明,PRV gE和gB的最低核酸检出量分别为4.4×103和3.3×103拷贝/μL,与单一PCR方法的敏感性相近.应用该方法对广东、广西地区临床送检的56份组织样品进行检测,检测结果显示,强毒感染阳性率为53.6％（30/56）,阴性率为46.4％（26/56）,未发现有弱毒感染.

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