中国预防兽医学报杂志

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ基因的克隆、序列分析及表达

关键词: 胸膜肺炎放线杆菌  表达  

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型Ⅰ菌株序列设计了一对特异性引物，用PCR方法扩增毒素Ⅰ基因，得到约920bp的片段，与参考序列的核苷酸同源性达99．3％，定向克隆到pET32a（＋）中，转化BL21（DE3），经诱导后，毒素Ⅰ基因得到高效表达，Westemblot鉴定呈阳性。

传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP3基因的克隆与原核表达

关键词: 传染性法氏囊病病毒  结构蛋白vp3基因  克隆与原核表达  

利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因，将其克隆到表达载体pPRO^EX-HTa中，获得重组质粒命名为VP3／PA，经PCR、酶切和序列分析鉴定表明，插入的位置、大小和读码框均正确。SDS—PAGE检测表明，经重组质粒VP3／PA转化、诱导的受体菌E．coli DH5 α能表达结构蛋白VP3基因，约33 Ku，表达量达到了茵体总蛋白的33．9％，经Western blot等检测表...

传染性法氏囊病超强毒Gx株VP3基因在病毒致弱过程中的变异研究

关键词: 传染性法氏囊病超强毒vp3基因  致弱  变异  

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV Gx株进行培育，通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱，对其结构蛋白VP3基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析，从而揭示vvIBDV Gx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律。对不同代次细胞毒序列分析的结果表明，细胞毒在第8代以前，VP3基因序列没有改变，与标准超强毒HK46株氨基酸同源性...

马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白真核表达载体的构建与瞬时表达

关键词: 马动脉炎病毒  大囊膜糖蛋白  真核表达载体  

将马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白基因GL插入真核表达载体pVAX1中构建真核表达载体pVAX1-GL，酶切和测序结果表明构建是正确的，用脂质体转染试剂将其转染BHK-21细胞并通过问接免疫荧光试验检测其在体外的表达情况，结果在转染的细胞表面观察到绿色荧光，证明基因得到了表达，而对照则无绿色荧光，本研究为马动脉炎基因疫苗的研究奠定了基础。

猪瘟病毒兔化弱毒株与内蒙古分离野毒株（NMW）E2（gp55）基因的克隆与序列分析

关键词: 猪瘟病毒  序列分析  

采用反转录PCR（RT—PcR）和套式PCR（nested-PCR）扩增了猪瘟病毒兔化弱毒株与内蒙古野毒株的E2（gp55）基因，片段长约1200bp，将PCR产物与PMD-18-T载体相连接并克隆后，经酶切、PCR鉴定后进行序列测定和分析，结果显示二者的核苷酸同源性为89．7％，这一结果表明内蒙古近期流行的猪瘟野毒株与目前使用的疫苗株在E2基因上存在一定的差异。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apx ⅢA基因的克隆和表达

关键词: 猪胸膜肺炎放线杆菌  

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型参考株基因组DNA为模板，PCR方法扩增出apx ，ⅢA基因3．1kb的片段，扩增产物克隆于pMD18-T中，重组质粒经酶切鉴定后进行核苷酸序列测定，并与GenBank中不同血清型胸膜肺炎放线杆菌apx11A基因进行比较，结果显示核苷酸同源性均在96％以上。将该基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的BamHⅠ／Sal Ⅰ位点，...

丝状支原体丝状亚种SC型中国不同地区分离株脂蛋白Q基因的分子特征

关键词: 牛传染性胸膜肺炎  丝状史原体丝状亚种sc型  脂蛋白  lppq  分子特征  

根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型（MmmSC）脂蛋白Q（LppQ）基因序列设计并合成一对引物，利用PCR扩增方法，从我国不同省区的MmmSC分离株HVRI—X、BenI、QingI、MuI和模式株PG1中获得了LppQ基因1303 bp的片段，将该片段克隆到PMD18-T载体上，通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定，证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒。采用S...

鸡CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建

关键词: 鸡  cd3  cdna  真核表达  

用Trizol提取4—6周龄白莱航鸡、伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺组织的总RNA，再用Oligo～dT纤维素富集mRNA后，用RT-PCR扩增出鸡CD3γδ基因CDNA。PCIk产物切胶回收后连入T载体，序列分析发现伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡的CD318cDNA比白菜航鸡多一个氨基酸，且在胞外区的一个区域有4个氨基酸的差异。将白莱航鸡的CD318从T载体上切下连入pcDNA3．...

温氏附红细胞体部分16S rRNA基因的序列测定和分析

关键词: 温氏附红细胞体  16s  rrna基因  序列分析  

从确诊为附红细胞体感染的黄牛无菌采集血样，抽提附红细胞体基因组DNA，用实验设计的能扩增多种动物血营养菌部分16SrRNA基因的通用引物进行PCR扩增，结果扩增出大小约为370bp的DN段。PCR产物序列测定和系统进化分析显示，实验获得的核苷酸序列为温氏附红细胞体的16SrRNA基因，与国外报道的温氏附红细胞体的同源性为97％。反映出不同地理株的温...

传染性喉气管炎病毒gB基因的主要免疫原片段在大肠杆菌中的表达

关键词: 传染性喉气管炎病毒  表达  

利用DNASIS等软件分析传染性喉气管炎病毒（ILTV）WG株的gB蛋白抗原性，筛选出一段抗原性较强的片段，该片段位于gB蛋白的403位至686位氨基酸残基之间。设计引物，引入双酶切位点EcoR Ⅰ，Sal Ⅰ，将目的片段t—gB插入原核表达载体pET30a（＋），得到重组表达质粒pET-tgB并转化到大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导后，表达分子量为37Ku的融合蛋白His—...

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在原核细胞中的高效表达

关键词: ltb  原核细胞  表达  

从含有LT全毒素基因操纵子的质粒EWD299中扩增出LT的B亚单位基因后定向克隆于原核表达载体pET28a中，转化大肠杆菌BL21（DE3）plyss，用IPTG诱导表达后，将全茵裂解，用SDS—PAGE和Western blot检测重组茵中外源蛋白的表达情况。结果表明，在原核细胞中高效表达了LTB蛋白，表达的重组蛋白占菌体蛋白总量的38％。

旋毛虫各隔离种ITS Ⅱ区基因克隆和序列分析

关键词: 旋毛虫  隔离种  its  

克隆了6个不同旋毛虫隔离种的核糖体RNAITSⅡ区的基因片段，序列分析结果表明，黑龙江省猪旋毛虫和猫旋毛虫为旋毛形线虫（Trichinella spiralis）；犬旋毛虫为本地毛形线虫（Trichinella nativa）。结果与传统的分类结果基本一致，为传统的分类学方法提供了基础依据。

猪囊尾蚴小热休克蛋白的免疫原性研究

关键词: 猪囊尾蚴  小热休克蛋白  免疫原性  

利用反转录聚合酶链式反应（RT—PCR），从猪囊尾蚴虫体中扩增出小热休克蛋白（small Heat shock protein，sHSP）基因，克隆至原核表达载体pGEX-4T-1，在大肠杆菌BL21中以GST融合蛋白的形式表达。SDS-PAGE分析证明，表达产物为64Ku的融合蛋白，经凝胶扫描分析，表达量约占菌体可溶性蛋白的30％。免疫学分析（Western blot，ELISA）结果表明，sH...

鸡传染性支气管炎病毒D971分离株与M41株、T株接种鸡的病理形态学比较研究

关键词: 腺胃病变型鸡传染性支气管炎  病理变化  

鸡传染性支气管炎病毒D971分离株感染SPF鸡后主要表现为消瘦、稀便、伴有轻微的呼吸症状；剖检可见腺胃乳头肿胀、充出血、或乳头凹陷，并附有大量黏液；组织学观察可见腺胃黏膜上皮和固有层有坏死、脱落或溃疡，个别病例见有淋巴样细胞浸润，肌胃黏膜有中度坏死，伴有少量淋巴样细胞浸润，实质器官细胞变性、坏死，脾、胸腺及法氏囊的淋巴细胞...

鹅高致病性禽流感病理组织学观察

关键词: 禽流感  h5n1  鹅  病理  

本文对发生H5N1高致病性禽流感禽场的鹅进行了病理学观察，证实此场鹅禽流感在剖检上以眼结膜潮红出血；心肌条纹状坏死，条带样出血；胰腺有白垩状或透明坏死点；胃肠出血等为特征。组织学观察以非化脓性脑炎，胰腺坏死，心肌坏死，坏死性脾炎为主要病变，揭示了鹅禽流感的病理学变化特征。

伊氏锥虫、马媾疫锥虫、布氏锥虫、刚果锥虫的18SrDNA部分序列测定与系统发育关系

关键词: 伊氏锥虫  马媾疫锥虫  布氏锥虫  刚果锥虫  18s  rdna  pcr  

对伊氏锥虫（Trypanosoma evansi）：新疆株（XJCA）、湖北株（HBM）、云南株（YNB）、广东株（GDB2）；马媾疫锥虫（Trypanosoma equiperdum）、布氏锥虫（Trypanosoma brucei）、刚果锥虫（Trypanosoma congolense）提取基因组DNA，根据已报道的伊氏锥虫株18SrDNA基因序列设计合成引物，用PCR扩增了锥虫虫株基因组DNA,伊氏锥虫新疆株、湖北株...

肠炎沙门氏杆菌感染雏鸭肝脏抗氧化功能的动态研究

关键词: 肠炎沙门氏杆菌感染  鸭  抗氧化功能  

用肠炎沙门氏杆菌感染雏鸭，研究雏鸭肝脏抗氧化功能的动态，同时，探讨药物治疗对感染雏鸭肝脏抗氧化功能的影响，测定了肝脏组织中抗氧化酶活性和丙二醛（MDA）的含量。结果表明，雏鸭肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性于感染12h、36h极显著升高（P〈0．01），而60h后则显著降低（P〈0．05），过氧化物酶（PoD）、过氧化氢酶（CAT）活性分别于36h...

不同耐药水平大肠杆菌acrA和marA基因转录水平的比较

关键词: 大肠杆菌  acra  mara  转录水平  

为检测不同耐药水平大肠杆菌的acrA和marA基因转录水平，阐明t耐药大肠杆菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系。用定量RT—PCR的方法比较多重耐药菌株SEMR、单药耐药菌株SEICI和SEICH以及质控株ATCC25922的acrA和marA的mRNA水平。结果表明，acrAmRNA水平，SEMR均是SEICI、SEICH和ATcC25922的16倍；marA mRNA水平，SEMR是SEICH的...

检测马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区抗体间接ELISA诊断方法的建立

关键词: eiav跨膜蛋白主要免疫决定区  elisa  建立  

本试验以纯化的重组马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区蛋白作为诊断抗原建立了间接ELISA诊断方法，确定其最佳工作条件为每孔包被重组抗原2仙g，兔抗马IgG酶标抗体以1：4000，血清以1：40倍稀释，底物作用时间为10 min；判定标准为P／N值大于2，且OD值大于0．2的血清为阳性，否则判为阴性。本试验所建立的诊断方法与琼扩试验以及以琼扩抗原作为...

检测肠炎沙门氏菌ELISA方法的建立与应用研究

关键词: 肠炎沙门氏菌  单抗  检测  

从已建立的抗沙门氏茵单抗中筛选出适用于肠炎沙门氏菌ELISA检验的3—47—26单抗．采用筛选强阳性杂交瘤细胞株制备了高效价的3—47—26单抗．改进用辣根过氧化物酶标记高效价单抗的方法，进行了HRP标记单抗的免疫生物学特性的鉴定。确定了包被浓度和酶标抗体的工作浓度：HRP-3—47—26为1：100；LPS的包被浓度为400ng／mL。试验中采用LPS与多聚...

兔出血症病毒VP60蛋白的原核表达及检测方法初步应用

关键词: 兔出血症病毒  衣壳蛋白  vp60基因  原核表达  诊斯  

VP60是免出血症病毒（RHDV）的主要结构蛋白，也是免疫原性蛋白，与诱导抗病毒免疫反应直接相关，因而也是检测用首选抗原。本实验在原核系统pPRoEX^TMHTa中表达了VP60基因，经SDS—PAGE电泳中可见表达带。Western blot鉴定结果表明，重组蛋白可被RHD阳性血清特异性识别，具有相应的抗原性。将表达蛋白经SDS—PAGE电泳切胶纯化后免疫BALB／c小鼠...

胶体金免疫层析法检测猪PRV gE抗体方法的建立及应用

关键词: 伪狂犬病毒  基因表达  胶体金  免疫层析  

利用PCR技术从猪伪狂犬病毒基因组中克隆gE抗原表位基因，并将其插入到载体pET-22b（＋）中，构建成原核表达质粒pET-22b（＋）-gE，使其在E．cobBL21（DE3）中诱导表达，经瘫点杂交证实表达产物具有抗原性。表达产物纯化后作为抗原，结合胶体佥标记技术，运用双抗原夹心法于国内首先建立了猪PRV gE抗体检测的免疫层析试纸务。该方法操作简单灵...

绵羊肺腺瘤病毒JSRV-2基因探针的制备与原位杂交检测

关键词: 绵羊肺腺瘤病毒  探针  原位杂交  

用地高辛随机引物法标记外源性exJSRV特异的JSRV-2片段，制备探针，用原位杂交法检测自然感染绵羊肺腺瘤病（oPA）的病肺组织中JSRV-NM的RNA及前病毒DNA，结果表明’OPA患羊肺肿瘤细胞的胞浆和核内都有JSRV-2基因mRNA的表达，同时也检测到了前病毒DNA，而相应的阴性对照无阳性信号，证实外源性JSRV-NM病毒具有特异性的DNA探针在检测致瘤性前病毒...

鸭肝炎病毒单克隆抗体的研制

关键词: 鸭肝炎痛毒  单克隆抗体  间接elisa  

以反复冻融、氯仿处理、滤膜过滤、PEG反透析浓缩和分子筛层析的方法纯化DHV免疫BALB／c小鼠，同时作为包被抗原建立了筛选抗DHV阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法，经特异性和重复性试验，效果良好。经一系列融合、筛选，成功获得阳性杂交瘤细胞株4株，并制备出了腹水，分别命名为285、2E8、5E6和6C11。特性鉴定结果表明4株单抗ELISA效价均比较...

猪伪狂犬病病毒及猪细小病毒二联PCR检测方法的建立

关键词: 猪伪狂犬病病毒  猪细小病毒  二联pcr  

根据猪伪狂犬病病毒（PRV）和猪细小病毒（PPV）2种病原体的基因保守序列，分别设计并合成了与PRv的gp50基因序列和PPV的VP2基因互补的两对引物，进行单相PCR，分别扩增出预期的217bp片段及158bp片段；同时，用这两对引物对混合的样品中的PRV和PPV的DNA模板进行二联PCP扩增及二联PCR反应条件的优化，结果得到2争与试验设计相符的217bp（PRV）和1...

检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用

关键词: 双抗体夹心间接elisa  单克隆抗体  猪伪狂犬病毒ea株  

以猪伪狂犬病病毒（PrV）Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体，纯化的抗PrV IgG为检测抗体，建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为，单克隆抗体576株的包被浓度为12．2μg／mL，IgG的工作浓度为16．0μg／mL，对PrV的检测灵敏度达15．6ng（0．156μg／mL），与乙型脑炎病毒（JEV）、猪瘟病毒（HCV）、猪繁殖与呼吸障碍综合征...

番鸭呼肠孤病毒病蜂胶佐剂灭活疫苗的研制

关键词: 番鸭  呼肠孤病毒病  蜂胶灭活疫苗  

番鸭呼肠孤病毒病是由番鸭呼肠孤病毒感染引起的一种番鸭病毒性传染病。自在我国发生以来，给番鸭养殖业造成了严重损失。为防制本病，我们用分离毒NH9908株作为种毒，研制成一种蜂胶佐剂灭活疫苗。试验表明该疫苗抗原性良好、使用安全和免疫保护效果确实。实验室试验结果表明，用本疫苗免疫7d、14d、49d后攻毒保护指数分别为77．8、100、100。...

利用多重PCR检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌的毒力基因

关键词: 兔肠致病性大肠杆菌  魏氏梭菌  多重pcr  

我们建立了一种同时检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌毒力基因的二重PCR方法。在一次PCR反应中同时扩增兔肠致病性大肠杆菌（REPEC）的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因，扩增产物经电泳，出现与阳性对照细菌条带大小一致的条带即判断为该标本阳性，本试验还对79份腹泻兔粪便或肠内容物样品进行了检测，结果35.4％（28／79）检出eae＋的...

断奶仔猪源大肠杆菌F18菌毛的分子流行病学研究

关键词: 大肠杆菌  f18菌毛  检测  分子流行病学  

利用F18菌毛a因子单克降抗体以及已建立的鉴定F18菌毛及其亚型的双重PCR法，对来自断奶仔猪水肿病和／或腹泻病例的60株VTEC、24株VTEC／ETEC以及24株ETEC的进行了F18菌毛检测，以了解F18ab^＋和F18ac^＋大肠杆菌在江苏省断奶仔猪群的分子流行病学。结果表明：通过F18菌毛a因子单克隆抗体，可检测出52株大肠杆菌为F18^＋，检出率为48．15％；而...

副溶血弧菌基因分型和检测的研究进展

关键词: 微生物检测  副溶血弧菌  基因分型  分子生物学技术  流行病学调查  食物中毒  临床诊断  诊断技术  革兰氏阴性  食源性疾病  

副溶血弧菌（Vibrio Parabaemolyticus，VP）是一种革兰氏阴性嗜盐杆菌，是引起食源性疾病的重要病原之一，可导致患者腹泻、肠痉挛、恶心、呕吐、发烧等典型胃肠炎反应。1998年以来的资料显示，副溶血弧菌引发的食物中毒的发生规模及人群暴露规模呈明显上升趋势，均已超过沙门氏菌食物中毒，跃居首位。为了便于进行临床诊断、流行病学调查、食...

猪流感病毒分子生物学研究进展

关键词: 猪流感病毒  分子生物学研究  呼吸道疾病  接触传染性  规模化猪场  呼吸困难  群发性  咳嗽  

猪流感（Swine influenza，SI）是由猪流感病毒（SIV）引起的一种急性高度接触传染性的群发性呼吸道疾病，其特征为突发咳嗽、呼吸困难、发热、衰竭及迅速康复，猪不分年龄、品种和性别均能感染，是规模化猪场普遍存在难以根治的群发性疾病之一。

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