中国预防兽医学报杂志

靶向PB2基因的特异性siRNA抑制禽流感病毒（AIV）复制

关键词: aim  pb2  sirna  抑制  

根据siRNA设计原则，设计并合成5对靶向禽流感病毒（AIV）PB2基因的siRNA（PB2374，PB2665．PB2936，PB21031和PB21233），将其转染MDCK细胞，分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A／Goose／Guang dongl／96株；在转染后24h、48h和72h分别收集上清液；通过血凝试验（HA）和Real-timePCR检测siRNA抑制A1V增殖的效果。血凝试验结果表明：所设...

2型猪链球菌强毒株与无毒株胞外蛋白的双向电泳图谱比较分析

关键词: 2型猪链球菌  双向电泳  蛋白质组  胞外蛋白  

利用双向电泳技术可以对体外培养的2型猪链球菌强毒株和无毒株进行胞外蛋白质组比较，寻找与毒力相关的蛋白质。2型猪链球菌强毒株和无毒株在无蛋白细菌培养液中37℃摇床培养16h，从培养物上清中获得胞外蛋白。第一向电泳用pH4．7线性IPG胶条进行等电聚焦，第二向电泳用SDS．PAGE凝胶再分离蛋白，经过考马斯亮蓝R350染色，图像扫描后，利用软件...

伪狂犬病病毒Ea株UL18基因的克隆、序列分析及表达

关键词: 伪狂犬病病毒  ul18基因  序列分析  表达  

本研究以伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA为模板，PCR扩增含UL18全长基因的片段并克隆至pMD18-T载体，采用双脱氧末端终止法测序。序列分析显示UL18全长891bp，可编码297个氨基酸。将该基因亚克隆到原核表达载体pQE-82L的6×His标签下游，获得原核表达质粒pQE-UL18，转化大肠杆菌DH5α，经IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达，表达的融合蛋白6×His-UL18的分...

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次学术研讨会通知

马巴贝斯虫Be82基因截短片段的克隆与表达

关键词: 马巴贝斯虫  克隆  表达  

本实验在人工合成马巴贝斯虫Be82／236-381A基因的基础上，通过PCR扩增、酶切、串联的连接方法构建了3个Be82／236-381基因截短片段，并连接克隆于pGEX-4T-1中进行了重组蛋白表达。经PCR鉴定，3个重组表达的Be82／236-381基因截短片段的大小分别为192bp、306bp和420bp，与国外发表的基因序列进行比对，其核苷酸的同源性分别为100％、97．3％和96...

副结核分枝杆菌hsp65基因在大肠杆菌中的表达

关键词: 副结核分枝杆菌  hsp65基因  原核表达  

本研究以EcoRV和EcoR I双酶切pGEM-T-hsp65和pET-32a（＋），并将纯化的hsp65基因亚克隆至pET-32a（＋）中，构建出原核表达载体pET-hsp65。将pET-hsp65转化至感受态E．coli BL21（DE3）中，经IPTG诱导和SDS-PAGE分析，可见一条约76ku的外源蛋白带。Western blot分析表明，该蛋白具有与副结核分枝杆菌多克隆抗体发生反应的特性，为进一步研究有...

1O株巨型艾美球虫rDNA-ITS-1部分序列测定与分析

关键词: 巨型艾美球虫  序列分析  系统发育  

用一对种特异性引物，对国内10株巨型艾美球虫ITS．1区进行PCR扩增，对扩增产物纯化、测序与分析，并用DNAStar软件对所检测的10株巨型艾美球虫与GenBank中的所有巨型艾美球虫的ITS．1相应序列进行系统发生进化关系分析。结果显示，扬州株、龙岩株和福州株的ITS-1部分序列片段长度为152bp，其余各株均为151bp。10株巨型艾美球虫的同源性为90．7...

产肠毒素性大肠杆菌F41与987P菌毛蛋白的串联表达

关键词: 大肠杆菌  987p  f41  串联表达  

根据GenBank中发表的E．coliF41、987P基因序列，分别设计合成一对引物。利用PCR技术．分别以大肠杆菌C83707的基因组和C83710的质粒为模板扩增F41、987P基因。通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切、连接和转化，构建了含F41-987P串联表达载体的重组菌株BL21（DE3）／pETF41-987P。经酶切、PCR鉴定和DNA序列分析，证实了构建的重组质粒pETF41-...

重组鸡白介素18真核表达质粒（pCI-ChlL-18）胚胎接种的研究

关键词: 胚胎接种  接种剂量  绒毛尿囊膜接种  尿囊腔接种  

通过对孵化率、平均囊指数、脾指数、外周血淋巴细胞增殖反应和白介素18（IL-18）蛋白水平表达的检测，评定了重组鸡真核表达质粒（pCI-ChIL-18）胚胎接种的不同接种剂量和接种方法的效果。结果表明，pCI-ChlL-18质粒接种18日龄鸡胚不影响孵化率，对鸡的生长发育无影响，不同的接种途径和接种剂量对鸡体内IL-18的表达有影响。与1日龄雏鸡肌肉接...

猪Toll样受体2基因的克隆和序列分析

关键词: 猪toll样受体2基因  序列分析  克隆  生物信息学  

本研究从猪肠系膜淋巴细胞中，克隆了猪Toll样受体2基因（pTLR2）。基因序列分析表明，克隆的pTLR2基因ORF为2358bp，编码785个氨基酸，合15．01％的亮氨酸，合有一段21个氨基酸的信号肽序列；与GenBank中登录的pTLR2序列（NM213761）的同源性为99．2％；与牛、马、绵羊和人的同源性较高，与家鼠、中国仓鼠相比次之．而与鱼类的最低。蛋白分子结...

鸡食管扁桃体的组织学和免疫组织化学研究

关键词: 组织结构  t淋巴细胞  抗体生成细胞  食管扁桃体  

本研究通过组织学和免疫组织化学方法，观察鸡新型肠相关性淋巴组织-食管扁桃体的组织结构特征。并研究其中T淋巴细胞及其亚群和抗体生成细胞的定位分布。研究发现，食管扁桃体的粘膜形成数目和结构与食管一致的皱襞，粘膜固有层中分布大量的淋巴组织，并存在于前胃腺；在隐窝固有层中，抗体生成细胞以IgM^＋和IgA^＋细胞为主，并主要分布在生发...

猪干扰素-γ哺乳动物细胞重组表达质粒作为疫苗佐剂在小鼠体内的组织分布及环境安全性研究

关键词: 重组表达质粒  生物安全性  组织分布  基因组整合  转移和扩散  

重组表达质粒作为免疫佐剂从实验室走向临床必须解决其对机体和生物环境释放的安全性问题。本研究以pcDNA3．1／IFN-γ重组表达质粒作为免疫佐剂进行试验，探讨了其在小鼠体内组织的分布和生物安全性。将pcDNA3．1／IFN-γ重组表达质粒经肌肉途径免疫小鼠，免疫后不同时间迫杀，并取各种组织抽提基因组DNA：一是利用PCR技术检测其在组织内的分布及...

铅中毒和ND免疫对黄羽鹌鹑免疫功能的影响

关键词: 鹌鹑  铅中毒  新城疫免疫  免疫功能  

采用2×5因子试验设计[新城疫（ND）免疫分为免疫组和未免疫组，铅中毒按饮水中的醋酸铅浓度分为0mg／kg，50mg／kg，500mg／kg，1000mg／kg和2000mg／kg]，将90只14日龄鹌鹑随机分配到各个试验组中，实行自由饮水和采食，研究铅中毒和新城疫免疫对黄羽鹌鹑免疫功能的影响。结果表明，ND免疫对注射植物血球凝集素（PHA）10h后的PHA指数无显著影响...

奶山羊隐性乳房炎模型的建立及早期诊断指标的研究

关键词: 奶山羊隐性乳房炎  血清淀粉样蛋白a  结合珠蛋白  

为选择和建立奶山羊隐性乳房炎的早期诊断指标，人工感染金黄色葡萄球菌并成功建立隐性乳房炎模型．检测了21d内奶山羊感染乳区乳中体细胞数和乳中的细菌浓度，模型奶山羊血液和乳中血清淀粉样蛋白A和结合珠蛋白的变化。同时做了各指标间的相关性分析。发现血清淀粉样蛋白A和结合珠蛋白在感染后血清中的浓度较感染前急剧升高，乳中血清淀粉样蛋...

抗埃博拉病毒VP40蛋白单克隆抗体的制备及在抗原捕捉ELISA中的应用

关键词: ebola病毒  vp40蛋白  单克隆抗体  

本研究以原核表达、纯化的扎伊尔株埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）VP40蛋白片段免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，获得一株分泌抗EBOVVP40蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系。以重组杆状病毒表达EBOV VP40蛋白为抗原，经Western blot和间接免疫荧光检测该单克隆抗体显示出良好的特异性免疫反应。采用该株杂交瘤细胞系经腹腔注射接...

ELISA用于口蹄疫病毒146S抗原快速定量的研究

关键词: 口蹄疫  elisa  146s抗原  抗原定量  

口蹄疫病毒的146S抗原是口蹄疫的主要免疫性抗原，对该抗原进行快速准确的定量对口蹄疫疫苗质量监测、新型疫苗开发和抗原研究有重要的意义。本研究利用酶联免疫吸附实验快速敏感的特性建立了定量146S抗原的检测方法，证明抗原含量和OD值表示的ELISA结果有对数线性关系，相关系数为0．98。实验建立了计算机自动计算程序，可以利用统计学方法快速...

云南牟定狂犬病病毒株N基因和G基因序列分析

关键词: 狂犬病病毒  核蛋白基因  糖蛋白基因  

自英国引进3株荧光素标记的针对狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体，建立狂犬病直接免疫荧光诊断技术。根据已知狂犬病毒核蛋白和糖蛋白基因序列，参照已发表文献，设计合成4对PCR引物和2对克隆引物，以弱毒疫苗毒株为阳性对照，建立狂犬病RT-PCR及套式PCR诊断技术。自牟定采集发病犬脑组织样品15份，免疫荧光及PCR诊断结果均为阳性。对病毒N基因和G基...

介导RNAi的病毒载体研究进展

关键词: rnai  病毒载体  rna干扰  介导  基因沉默  药物靶标  调控方式  调控能力  

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由内源性小分子RNA（MicmRNA，miRNA）或外源性小分子干扰RNA（Small interferingRNA，iRNA）引起的靶基因沉默的基因调控方式。由于RNAi具有很强的、特异的基因调控能力，现已广泛应用于基因功能和人类疾病模型的研究，包括药物靶标的筛选、候选药物的潜在副作用分析、基因治疗的测试和功能缺失筛选等^[1]...

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