中国预防兽医学报杂志

感染马传染性贫血病毒的巨噬细胞差异表达蛋白质组分析

关键词: 马传染性贫血病毒  emdm  差异蛋白  双向电泳  生物信息学  

为研究马传染性贫血病毒（EIAV）感染其主要靶细胞马巨噬细胞（eMDM）后与细胞蛋白的相互作用，本研究采用EIAV强毒株EIAVDLV34感染48h后的马外周血单核细胞分化的eMDM，并以未感染eMDM为对照，提取细胞的蛋白质样品，进行双向凝胶电泳（2．DE）分离，并分析凝胶中差异蛋白点。结果共检测出19个表达差异的蛋白点（ratio〉1．4，p〈0．05），其中...

H9N2亚型禽流感病毒细胞高产株的拯救

关键词: 禽流感  h9n2亚型  反向遗传  细胞苗  

为构建能够在MDCK细胞中高水平复制的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）疫苗株，本研究在对病毒生长特性及HA基因遗传进化分析的基础上，筛选出一株细胞高度适应的国内流行株A／chicken／Shanghai／11／2011（H9N2）（SHll），并通过反向遗传操作技术拯救出全部基因均来自亲本株的AIVrSHll株。生物学试验结果表明rSHll在鸡胚半数感染量（EID50）、组织...

表达鹅α干扰素基因重组禽痘病毒的构建及表达产物抑制鹅细小病毒活性的初步研究

关键词: 延边白鹅  重组禽痘病毒  抗病毒  

为研究表达鹅α干扰素（GolFN—α）基因重组活载体疫苗对抑制病毒增殖活性，本实验从植物血凝素刺激的延边白鹅外周血淋巴细胞中提取总RNA，采用RT—PCR扩增glFN-α基因，其大小为576bp。将其与LacZ表达盒串联克隆于pSY681质粒中构建pSY681-IFN-α-LacZ转移重组质粒。采用脂质体将重组质粒转染于预感染禽痘病毒（FPV）017株的鸡胚成纤维细胞（CEF）...

猪繁殖与呼吸综合征病毒在猪干扰素-β免疫压力下传代后的变异研究

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒  免疫压力  变异  

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在猪干扰素-β（swIFN-β）免疫压力下的分子变异情况，本研究将高致病性PRRSVJXAl株在添加适量swlFN-β的Marc-145细胞中连续传20代后，获得PRRSV-A1βf20株及正常传代对照株PRRSV-A1f20。序列分析结果显示：PRRSV-A1βf20与PRRSV-A1f20在NSP2、ORF3、ORF5和ORF6等基因中累计分别出现43个和14个核苷酸突变，并...

鸡传染性支气管炎病毒Holte株S1基因在昆虫杆状病毒系统的表达及其抗原性分析

关键词: 鸡传染性支气管炎病毒  s1基因  真核表达  抗原性分析  

为真核表达鸡传染性支气管炎病毒（IBV）S1蛋白并鉴定其抗原性，本研究采用RT-PCR方法扩增出IBVHolte株s1基因，并将其克隆于昆虫杆状病毒转移载体pFastBacHT中，通过大肠杆菌中同源重组构建重组杆粒Bacmid—S1，将重组杆粒转染至Sf9细胞中，获得含S1基因的重组杆状病毒。将该重组杆状病毒感染Sf9细胞进行表达，经间接免疫荧光、SDS．PAGE和west...

一株鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定及TK基因分析

关键词: 传染性喉气管炎病毒  分离鉴定  tk基因  序列分析  

黑龙江省牡丹江市某养鸡场28周龄蛋鸡发生以呼吸困难、咳血和产蛋下降为主要症状的疾病。本研究利用特异性引物，从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）gB基因的567bp大小片段；将发病鸡喉头及分泌物处理后接种鸡胚，在鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上形成痘斑。病毒接种鸡胚肾细胞48h后电镜下可以观察到典型的疱疹病毒粒子形态...

猪肺炎支原体P159蛋白的截短表达及黏附活性研究

关键词: 猪肺炎支原体  p159截短蛋白  黏附活性  

为了解猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）P159蛋白的黏附活性，本实验利用PCR从MhpNJ株扩增P159基因片段（3’端），克隆于pET．28a（＋）进行表达，并用表达的截短蛋白进行黏附试验。结果表明，PCR扩增的目的基因片段约为450bp；SDS-PAGE检测重组蛋白分子量为46ku；westem blot检测表明该重组蛋白能够与Mhp阳性血清发生特异性反应...

6株牛支原体分离株对鸡胚和小鼠的致病性研究

关键词: 牛支原体  病理学特征  致死率  阳性感染率  

为通过复制不同牛支原体（Mycoplasma bovis）感染模型，筛选出毒力较强的M．bovis分离株，本研究采用等浓度的6株M．bovis分离株（W70、1738、677、01、03、JX02）感染7日龄健康鸡胚和6周龄～8周龄SPF级BALB／c小鼠，观察并比较各组受试动物死亡情况及病理剖检变化，取死亡鸡胚尿囊液或卵黄液，以及小鼠肺组织进行病原学分离培养和PCR鉴定。实...

家兔胚胎胃肠道细菌分离及16SrRNA基因序列分析

关键词: 家兔胚胎  胃肠道  细菌分离  16s  rrna基因序列  

为研究家兔胚胎胃肠道细菌菌群的种类，对常规饲养、正常妊娠的家兔胚胎后期胃肠道细菌进行分离，基于分离细菌的生理生化特性、16SrRNA基因序列的同源性比较及系统发育分析，初步确定家兔胚胎后期胃肠道中存在的微生物菌群有微球菌属（Micrococcus）、葡萄球菌属（Staphylococcus）、棒杆菌属（Corynebacterium）以及蜡样芽孢杆菌（Bacillus ce...

抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立

关键词: 牛病毒性腹泻病毒  e2蛋白  单克隆抗体  双抗体夹心elisa  

为建立牛病毒性腹泻病毒（BVDV）双抗夹心ELISA检测方法，本研究将BVDV890病毒株（BVDV-2）浓缩并纯化后免疫BALB／c小鼠，经常规技术进行细胞融合并筛选得到一株稳定分泌IgG的杂交瘤细胞株，命名为3F9。以BVDV单克隆抗体（MAb）IgM为捕获抗体，生物素标记的3F9为检测抗体，初步建立BVDV特异的双抗体夹心ELISA检测方法（BAS-ELISA）。采用建立的...

同时检测口蹄疫病毒和牛肠道病毒双重RT—PCR方法的建立

关键词: 口蹄疫病毒  牛肠道病毒  

为建立同时检测口蹄疫病毒（FMDV）和牛肠道病毒（BEv）的双重RT-PCR方法，本研究根据已发表的FMDV和BEV基因的5＇UTR保守区域，分别设计、筛选出一对特异性引物建立了双重RT-PCR方法，并优化了反应体系和条件。采用该方法检测其他几种牛相关病毒结果均为阴性，表明特异性良好。该方法对FMDV的最低检出限为8TCID50/0．1mL，对BEV的最低检出限为2...

产肠毒素大肠杆菌多重PCR检测方法的建立

关键词: 产肠毒素大肠杆菌  多重pcr  k88菌毛  k99菌毛  sta毒素  

为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌（ETEc）菌毛（K88和K99）和毒素（STa）基因，本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物，对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化，建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法。该方法对K8、K和STa基因的扩增产物分别为237bp，314bp和166bp；此外，该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的多重P...

牛源化脓隐秘杆菌的分离鉴定及其PCR检测方法的建立

关键词: 化脓隐秘杆菌  分离鉴定  pcr  

为分离鉴定牛源化脓隐秘杆菌（Arcanobacterium pyogenes）并建立其PCR检测方法，本研究从某规模化奶牛场患牛肺组织中分离出两株细菌，根据其形态特征、培养特性及生化特性，结合16SrRNA分析确定分离菌为A．pyogenes。对小鼠致病性试验显示纯培养物对小鼠致死率较高，药敏试验表明分离茵仅对少数种类抗生素如头孢唑啉、氧氟沙星、阿奇霉素等敏...

重组禽流感病毒二价灭活疫苗对H5N1亚型7．2分支病毒的攻毒保护性研究

关键词: 禽流感  二价灭活疫苗  h5亚型  7  2分支  免疫保护  

为有效防控2006年以来出现的H5亚型7．2分支禽流感病毒（AIV）引起的免疫鸡群高致病性禽流感（HPAI）的流行，我们构建了重组AIVRe-4疫苗株，研制出含有重组AIVRe-4株的H5亚型二价系列灭活疫苗，并在我国北方地区使用，有效地控制了其流行。2012年我国北方地区再次出现7．2分支病毒引起的HPAI疫情。为评估现有H5亚型二价系列灭活疫苗对该分支病...

猪CD81的克隆、序列分析及其LEL区原核表达

关键词: cd81  克隆  胞外大环区  原核表达  

为研究猪CD81基因特征及对其进行原核表达，本研究从猪PBMC的总RNA中扩增获得CD81全基因，测序后经比对分析表明，与已报道的序列同源性为99．7％～100％，与牛羊的同源性约为92％，其次为灵长类（约90％），大鼠和小鼠最低（约87％）。氨基酸序列分析其SEL和LEL区为主要变异区，尤其LEL区在不同物种间变异较大。进一步扩增其LEL区基因并以pGEX-...

华东地区鸡白痢沙门氏菌毒力基因的分子流行病学调查

关键词: 鸡白痢沙门氏菌  毒力岛  基因序列  

为了解鸡白痢沙门氏菌（S．pullorum）的相关毒力因子的流行病学变化，本研究参考GenBank中相关基因序列设计引物，对2010年10月至2012年7月期间江苏、安徽、上海、浙江等华东地区鸡、鸭、鹅、鸽中所分离的70株S．pullorum的毒力岛SPI-1、SPI-2、SPI-3、SPI-4、SPI-5的毒力基因hilA、sseL、mgtC、siiE、sopB进行PCR检测，并选择10株分别来源于鸡...

奶牛边缘无浆体MSP2的原核表达及抗原性鉴定

关键词: 边缘无浆体  msp2  原核表达  免疫原性  

为克隆和原核表达牛边缘无浆体（A.marginale）膜表面蛋白2（MSP2），并分析其免疫原性，本研究通过PCR方法扩增A．marginale的MSP2基因，将其连接到pGEX6p．1载体中，转化感受态细胞BL21（DE3），经IPTG诱导表达，进行SDS—PAGE分析，将纯化的MSP2重组蛋白免疫小鼠。结果表明表达并纯化了A．marginaleMSP2，其免疫原性良好，为制备单克隆抗体及...

副结核病诊断技术研究进展

关键词: 副结核病  诊断技术  经济损失  临床症状  诊断方法  检验检疫  潜伏期  世界性  

副结核病（Paratuberculosis）呈世界性流行，该病对畜牧业的危害严重，仅在美国造成经济损失就高达200亿美元，我国将其列入二类多种动物共患传染病。由于该病具有潜伏期长、部分患病动物临床症状不明显等特点，使该病的防控更为困难，因而针对该病建立快速有效地检测方法显得尤为重要。近年来，虽然人们对副结核分枝杆菌病的研究取得了很大进...

嵴病毒（Kobuvirus）研究进展

关键词: 小rna病毒  分类地位  结构特征  流行病学  胃肠炎  aiv  病毒学  基因组  

嵴病毒（Kobuvirus）属于小RNA病毒科家族，迄今为止，嵴病毒属存在两个公认的种：人爱知病毒（Aichivirus，AiV）和牛嵴病毒（Bovinekobuvirus，BKV）；另有一个候选种，猪嵴病毒（PorcineKobuvirus，PKV）。AiV可能是导致人胃肠炎的病因之一，BKV可能造成牛和猪的腹泻。近年来，病毒学界对嵴病毒关注较高，不断有学者发现嵴病毒新的种，使嵴病...

中国预防兽医学报2012年第34卷总目次