大鼠皮质少突胶质细胞培养条件的优化

杨凯; 李一鹏; 刘英富; 程远驰; 汤锋武; 梁冰; 徐忠伟; 陈旭义 锦州医科大学武警后勤学院附属医院研究生培养基地; 辽宁省锦州市121000; 武警后勤学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所; 天津市300162; 武警后勤学院附属医院; 天津市300162; 天津中医药大学; 天津市300193; 武警后勤学院; 天津市300162

关键词:组织构建 组织工程 少突胶质前体细胞 少突胶质细胞 细胞密度 

摘要:背景:由于少突胶质细胞主要来自少突前体细胞,实验通过提取少突胶质前体细胞获取少突胶质细胞的过程中,选择合适的培养基和细胞接种密度对生长及形态学观察具有重要影响。目的:对比优化少突胶质细胞的培养条件。方法:取48 h内的SD新生鼠大脑皮质前体少突胶质细胞。分别用DMEM/高糖、DMEM/F12培养基培养少突胶质前体细胞,每组接种密度分别2×10^4/cm^2,4×10^4/cm^2,8×10^4/cm^2,16×10^4/cm^2,32×10^4/cm^2,64×10^4/cm^2;分别于少突胶质前体细胞贴壁72 h后,进行诱导分化,分化7 d后的少突胶质前体细胞在光镜下观察细胞形态变化并通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定。结果与结论:DMEM/高糖、DMEM/F12培养基以2×10^4/cm^2,4×10^4/cm^2,8×10^4/cm^2接种密度时,可辨识完整少突胶质前体细胞形态。诱导分化7d后,免疫荧光鉴定提示3组少突胶质前体细胞均可呈现髓鞘碱性蛋白阳性,F12组中2×10^4/cm^2,4×10^4/cm^2,8×10^4/cm^2接种密度条件下细胞均数分别为16.40±3.30,49.95±2.33,76.95±4.86,高于相应条件下的高糖组12.65±2.53,32.10±1.17,54.05±1.56(P<0.05)。结果表明,DMEM/F12较DMEM/高糖培养基适于少突胶质细胞培养,在一定范围内,少突胶质前体细胞分化为少突胶质细胞随接种密度成梯度增多,接种密度在4×10^4/cm^2-8×10^4/cm^2范围对观察细胞形态观察较为适合。

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