关键词：间质干细胞 肌细胞 平滑肌 培养基 条件性 

摘要：目的探讨通过条件培养液（CM）和高浓度血清即20％的胎牛血清（FBS）联合作用下，myocardin在骨髓来源的间充质干细胞向平滑肌细胞（SMC）定向分化过程中的表达特点。方法采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞，CM联合20％FBS诱导骨髓间充质干细胞，同时设立持续10％FBS、单20％FBS及单CM诱导下的骨髓间充质干细胞对照组和SMC阳性对照组，分别于诱导前及诱导3、7、10和14d时观察细胞形态的变化，并在相应的时间点用免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应法、Western blot半定量分析法检测myocardin以及SMC表面各种标志基因的表达变化，用透射电镜检测诱导后细胞内肌丝存在以此来证实诱导分化成功。结果光镜观察显示诱导前至诱导3、7、10和14d时，骨髓间充质干细胞由纺锤形、多角形、扁平形和小圆形等多种形态逐渐转变为单一的长梭形，在诱导21d后显示出明显的峰-谷特征。免疫荧光结果显示表达myocardin的阳性细胞数量逐渐增多，表达部位由胞质逐渐移向胞核，而表达平滑肌标志基因α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、平滑肌肌动蛋白重链（SM-MHC）的细胞也随之增加，同时联合诱导后3、7、10和14d表达myocardin和平滑肌标志基因（α-SMA或SM—MHC）的双阳性细胞数量逐渐增加。RT-PCR结果显示myocardin的mRNA表达逐渐上调，在诱导7d达到高峰后表达基本稳定（P〈0．05）；平滑肌标志基因α-SMA及SM22α的表达随着myocardin表达上调而增加（r=0．81，P〈0．05），诱导10d后表达基本稳定。Western blot结果显示myocardin蛋白和平滑肌标志基因α—SMA蛋白表达量在诱导后明显增加（r=0．84，P〈0．05）。透射电镜结果显示诱导21d后的分化细胞中有肌丝的存在。在不同时间点各组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CM联合高浓度的血清可有效诱导骨髓间充质干细胞向SMC分�

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