关键词：二十二碳六烯酸 氧糖剥夺 细胞凋亡 脑微血管内皮细胞 

摘要：目的评价二十二碳六烯酸（DHA）预处理是否增强血管生成素-1（Ang-1）对氧糖剥夺（OGD）条件下大鼠脑微血管内皮细胞（BMVECs）的保护作用。方法大鼠BMVECs传代培养，第3—4代用于实验。采用随机数字表法分为7组：正常对照组、正常对照＋Ang-1组、OGD组、OGD＋Ang-1组、OGD＋DHA组、OGD＋DHA＋Ang-1组、OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组。在正常对照组和正常对照＋Ang-1组加人含血清、5mmol／L葡萄糖和1．25mmol／L丙酮酸盐的DMEM培养液；在各OGD组用无糖、无血清的DMEM液置换原培养液。在OGD＋DHA、OGD＋DHA＋Ang-1和OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组加入40μmol／LDHA，同时在OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组再加入5μmol／L GW9662[过氧化物酶体增殖物激活受体-1（PPAR-γ）的抑制剂]，以上3组在5％CO2和95％空气条件下预处理培养1h。预处理完成后，在正常对照＋Ang-1组、OGD＋Ang-1组、OGD＋DHA＋Ang-1组和OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组加入浓度为250ng／ml的Ang-1。除正常对照组和正常对照＋Ang-1组在5％CO2和95％空气条件下培养外，其余各组均在94％N2：5％CO2：1％O2低氧条件下培养，培养时间均为24h。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，Westernblot检测Bax、Bel-2、半胱天冬酶-3（easpase-3）、血管生成素受体-1（Tie-1）、Tie-2、磷酸化的Tie-2（pTie-2）、磷酸化的蛋白激酶B（pAkt）和紧密连接蛋白-1（ZO-1）的表达水平。结果与正常对照组比较，OGD、OGD＋Ang-1、OGD＋DHA、OGD＋DHA＋Ang-1和OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组细胞凋亡显著增加（P=0．000、0．000、0．000、0．004、0．000）；Bax、easpase．3、Tie-1表达显著增加（Bax：0．62±0．03、0．38±0．03、0．45±0．03、0．26±0．02、0．33±0．02比0．16±0．01；caspase．3：0．76±0．05、0．42±0．04、0．52±0．02、0．32±0．02、0．40±0．02比0．15±0．01；Tie-1：0．51±0．03、0．25±0．01、0．33±0．02、0．16±0．0

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