关键词：草酸钙结晶 肾结石 蛋白质表达谱 肾上皮细胞 聚类分析 

摘要：目的探讨肾结石草酸钙晶体对人近曲肾小管上皮细胞蛋白质表达谱的影响,筛选差异表达蛋白质并初步探讨肾结石与肾损伤的关系。方法选取临床经结石成分分析为草酸钙的肾结石标本,充分研磨后配制草酸钙晶体悬液,处理人近曲肾小管上皮细胞HK-2,提取总蛋白并通过SDS-PAGE对蛋白质量进行鉴定,通过BCA法测定蛋白浓度,然后通过TMT标记定量蛋白质组学分析法筛选实验组和对照组蛋白质表达谱的差异,最后通过生物信息学的方法进行聚类分析、GO富集分析以及差异基因相关的蛋白质相互作用网络分析。结果草酸钙晶体对HK-2细胞显示出明显的细胞毒性,细胞生长速度减慢且引起细胞形态以及培养基PH值发生显著改变。TMT标记定量蛋白质组学分析结果显示经草酸钙晶体处理后的HK-2细胞中差异表达的蛋白分子共1 141个,其中上调表达的699个,下调表达的442个。生物信息学分析结果提示这些差异蛋白在细胞外复合体、细胞器以及多种细胞学过程中发挥重要作用;差异蛋白共表达网络分析发现在细胞骨架维持(ACTB,CFL1)和细胞特殊功能如分泌和加帽中起作用的蛋白(MYH9,MYH14)关系最为密切。结论草酸钙结晶对人肾上皮细胞蛋白质表达有显著影响,并且这些差异表达的蛋白质分子可能与肾结石的形成以及肾损伤有关。

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