关键词:腺病毒 克隆
摘要:目的构建表达白细胞介素(IL)-18的条件增殖腺病毒。方法以质粒pJW-IL18为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增获得全长IL-18基因并改变其包含的酶切位点BglⅡ。将IL-18克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13-IL18。用BglⅡ从pCA13-IL18酶切出包含CMV启动子的IL-18表达框,并克隆进条件增殖腺病毒质粒pZD55,构建重组质粒pZD55-IL18。将pZD55-IL18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞,9~12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA,PCR鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD55-IL18。大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。结果成功构建了表达IL-18的条件增殖腺病毒。结论成功构建的ZD55-IL18为肿瘤靶向治疗奠定基础。
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